---
title: "\"МУК 4.1.1434-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Спинозина А и Спинозина Д в воде, почве, плодах огурца, яблок, перца, клубнях картофеля и капусте методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1434-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1434-03"
---

## "МУК 4.1.1434-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Спинозина А и Спинозина Д в воде, почве, плодах огурца, яблок, перца, клубнях картофеля и капусте методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1434-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Спинозина А и Спинозина Д в воде, почве, плодах огурца, яблок, перца, клубнях картофеля и капусте методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Минздравом России 24.06.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 30 июня 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
24 июня 2003 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИНОЗИНА А**
**И СПИНОЗИНА Д В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ПЛОДАХ ОГУРЦА, ЯБЛОК,**
**ПЕРЦА, КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ И КАПУСТЕ МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1434-03**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

30 июня 2003 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. А.В. Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методики указаны в конце.
2. <a id="p100007"></a>Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены с 30 июня 2003 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100011"></a>Вводная часть


<a id="p100012"></a>Фирма-производитель: Дау АгроСайенсес.
<a id="p100013"></a>Торговое название: Спинтор.
<a id="p100014"></a>Название действующего вещества по ИСО: Спиносад.
<a id="p100015"></a>Синонимы: XDE-105; DE-105.
<a id="p100016"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК:
<a id="p100017"></a>Смесь (2R,3аR,5аR,5bS,9S,13S,14R,16aS,16bR)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-О-метил-альфа-L-манно-пиранозилокси)-13-(4-диметиламино-2,3,4,6-тетра-дезокси-бета-D-эритропиранозилокси)-9-этил-2,3,3а,5а,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16а,16b-гексадекогидро-14-метил-1Н-8-оксациклододека-[b]аs-индацен-7,15-диона и (2S,3аR,5аS,5bS,9S,13S,14R,16аS,16bS)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-О-метил-альфа-L-маннопиранозилокси)-13-(4-диметиламино-2,3,4,6-тетрадезокси-бета-D-эритропира-нозилокси)-9-этил-2,3,3а,5а,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16а,16b-гексадекогидро-4,14-диметил-1Н-8-оксациклододека[b]аs-индацен-7,15-диона в соотношении от 50 - 95% до 50 - 5%.
<a id="p100018"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100019"></a>Спинозин А, R = Н-
<a id="p100020"></a>    Спинозин D, R = СН -
                      3
<a id="p100021"></a>    Эмпирическая  формула:  Спинозин  А - C  H  NO  ; Спинозин Д -
                                           41 65  10
**C  H  NO  .**
 42 67  10
<a id="p100022"></a>Молекулярная масса: Спинозин А - 732,0; Спинозин Д - 746,0.
<a id="p100023"></a>Спиносад представляет собой светло-серый или белый кристаллический порошок.
<a id="p100024"></a>Температура плавления: Спинозин А - 84,0 - 99,5 °С; Спинозин Д - 161,5 - 170,0 °С.
                            -5
<a id="p100025"></a>    Давление  паров 3,0 х 10   мПа (при 25 °С) - Спинозин А; 2,0 х
  -5
10   мПа (при 25 °С) - Спинозин Д.
<a id="p100026"></a>    Коэффициент распределения в системе октанол - вода:
<a id="p100027"></a>    Спинозин А - К   log Р 2,8 (рН 5), 4,0 (рН 7), 5,2 (рН 9);
                  ow
<a id="p100028"></a>    Спинозин Д - К   log Р 3,2 (рН 5), 4,5 (рН 7), 5,2 (рН 9).
                  ow
<a id="p100029"></a>Растворимость в воде:
<a id="p100030"></a>Спинозин А - 89 мг/л (дистиллированная вода), 235 мг/л (рН 7) (при 20 °С);
<a id="p100031"></a>Спинозин Д - 0,5 мг/л (дистиллированная вода), 0,33 мг/л (рН 7) (при 20 °С).
<a id="p100032"></a>Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С):
<a id="p100033"></a>Спинозин А: ацетон - 16,8, ацетонитрил - 13,4, хлористый метилен - 52,5, метанол - 19,0, гексан - 0,448, толуол - 45,7, н-октанол - 0,926.
<a id="p100034"></a>Спинозин Д: ацетон - 1,01, ацетонитрил - 0,255, хлористый метилен - 44,8, метанол - 0,252, гексан - 0,743, толуол - 15,2, н-октанол - 0,127.
<a id="p100035"></a>    Оба  вещества  устойчивы к гидролизу при рН 5 и рН 7; ДТ   при
                                                            50
рН  9 составляет 200 дней для Спинозина А и 259 дней для Спинозина
Д. Фотодеградация в воде: ДТ   при рН 7  составляет  0,93  дня для
                            50
Спинозина А и 0,82 дня для Спинозина Д.
<a id="p100036"></a>    Спиносад  быстро  разлагается  под  действием ультрафиолета, в
почве   метаболизируется  бактериями  с  образованием  "природных"
соединений.   Время  полуразложения  в  почве  ДТ    при  аэробном
                                                 50
метаболизме  составляет  9,4 - 17,3 дня; ДТ   при фотодеградации в
                                           50
почве  составляет  8,7 дня для Спинозина А и 9,4 дня для Спинозина
Д.  При анаэробном водном метаболизме ДТ   составляет 161 день для
                                        50
Спинозина А и 250 дней для Спинозина Д.
<a id="p100037"></a>    Краткая токсикологическая характеристика. Спиносад относится к
малоопасным соединениям  по оральной  (ЛД    для самок крыс - 3783
                                         50
мг/кг,  для самцов крыс - более 5000 мг/кг) и дермальной (ЛД   для
                                                            50
кроликов - более  2000  мг/кг) токсичности  и  умеренно опасным по
ингаляционной (ЛК   для крыс - 4 ч - более 5,18 мг/л) токсичности.
                 50
Он   не   вызывает   раздражения   кожи,  отмечается  лишь  слабое
покраснение   глаз   у   кроликов.   Не   обладает   мутагенным  и
нейротоксичным свойствами или репродуктивной токсичностью.
<a id="p100038"></a>В России гигиенические нормативы не установлены.
<a id="p100039"></a>Область применения препарата. Спиносад - инсектицид контактного и кишечного действия из группы спинозинов, обладающий парализующим эффектом. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, бахромчатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых, плодовых, овощных и декоративных культур при норме расхода 5 - 40 г д.в./га. Препараты на основе Спиносада используется также для борьбы с синантропными насекомыми и в ветеринарии.
<a id="p100040"></a>В России и странах СНГ проходят регистрационные испытания препарата Спинтор в качестве инсектицида на огурцах и перцах закрытого грунта, в яблоневых садах и на посадках картофеля и капусты с нормой расхода 1,0 - 1,5 л/га по препарату при однократной обработке (яблони и картофель), при двукратной обработке на огурцах закрытого грунта.


## 2. <a id="p100041"></a>Методика определения остаточных количеств Спинозинов А и Д в воде, почве, плодах огурца, яблок, перца, клубнях картофеля и капусте методом высокоэффективной жидкостной хроматографии



### <a id="p100042"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100043"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100044"></a>Методика основана на раздельном определении Спинозинов А и Д (составных компонентов Спиносада) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем и очистки экстракта на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак-Амин, Диапак С). Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение методом абсолютной калибровки.


##### <a id="p100045"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100046"></a>Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и [2](#p100067).

<div align="right">

<a id="p100047"></a>Таблица 1

</div>


<div align="center">

<a id="p100048"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**

</div>



<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="15%"><col width="15%"><col width="14%"><col width="17%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры, р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>предел обнаружения, мг/кг (мг/л)</td><td>диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л)</td><td>среднее значение определения, %</td><td>стандартное отклонение, S</td><td>доверительный интервал среднего результата, %, +/-</td></tr>
<tr><td colspan="6">Спинозин А</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,0025</td><td>0,0025 - 0,025</td><td>96,2</td><td>2,49</td><td>0,58</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,05</td><td>0,05 - 0,5</td><td>76,6</td><td>1,92</td><td>0,56</td></tr>
<tr><td>Плоды огурца</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>75,9</td><td>1,32</td><td>0,29</td></tr>
<tr><td>Плоды яблок</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>76,7</td><td>1,62</td><td>0,48</td></tr>
<tr><td>Плоды перца</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>78,5</td><td>2,88</td><td>1,35</td></tr>
<tr><td>Капуста</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>76,3</td><td>1,6</td><td>0,70</td></tr>
<tr><td>Клубни картофеля</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>75,1</td><td>1,16</td><td>0,39</td></tr>
<tr><td colspan="6">Спинозин Д</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,0025</td><td>0,0025 - 0,025</td><td>94,4</td><td>2,96</td><td>0,70</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,05 - 0,5</td><td>0,05 - 0,5</td><td>76,0</td><td>1,49</td><td>0,44</td></tr>
<tr><td>Плоды огурца</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>75,8</td><td>1,87</td><td>0,42</td></tr>
<tr><td>Плоды яблок</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>76,7</td><td>1,72</td><td>0,38</td></tr>
<tr><td>Плоды перца</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>75,2</td><td>1,46</td><td>0,68</td></tr>
<tr><td>Капуста</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>76,6</td><td>1,6</td><td>0,75</td></tr>
<tr><td>Клубни картофеля</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>73,6</td><td>1,16</td><td>0,26</td></tr>
</table>


<div align="right">

<a id="p100066"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100067"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПИНОЗИНОВ А И Д В ВОДЕ,**<br>
**ПОЧВЕ, ПЛОДАХ ОГУРЦА, ЯБЛОК, ПЕРЦА, КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ**<br>
**И КАПУСТЕ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**

</div>



<table>
<colgroup><col width="20%"><col width="20%"><col width="18%"><col width="22%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Внесено, мг/кг (мг/л)</td><td>Обнаружено, мг/кг (мг/л)</td><td>Доверительный интервал, +/-</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td>1</td><td>2</td><td>3</td><td>4</td><td>5</td></tr>
<tr><td colspan="5">Спинозин А</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,0025</td><td>0,0023</td><td>0,0001</td><td>92</td></tr>
<tr><td></td><td>0,005</td><td>0,0048</td><td>0,0001</td><td>96</td></tr>
<tr><td></td><td>0,010</td><td>0,0098</td><td>0,0001</td><td>98</td></tr>
<tr><td></td><td>0,025</td><td>0,0247</td><td>0,0003</td><td>98,8</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>96,2</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,05</td><td>0,038</td><td>0,0011</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,10</td><td>0,075</td><td>0,0014</td><td>75</td></tr>
<tr><td></td><td>0,25</td><td>0,191</td><td>0,0071</td><td>76,4</td></tr>
<tr><td></td><td>0,50</td><td>0,393</td><td>0,0070</td><td>79</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>76,6</td></tr>
<tr><td>Плоды огурца</td><td>0,025</td><td>0,019</td><td>0,0005</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,05</td><td>0,038</td><td>0,0007</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,095</td><td>0,0019</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,189</td><td>0,0047</td><td>75,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>75,9</td></tr>
<tr><td>Плоды яблок</td><td>0,025</td><td>0,019</td><td>0,0003</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,050</td><td>0,038</td><td>0,0007</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,097</td><td>0,0008</td><td>77,6</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,193</td><td>0,0010</td><td>77,2</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>76,7</td></tr>
<tr><td>Плоды перца</td><td>0,025</td><td>0,019</td><td>0,0004</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,05</td><td>0,039</td><td>0,0010</td><td>78</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,104</td><td>0,0033</td><td>83,2</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,192</td><td>0,0028</td><td>76,8</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>78,5</td></tr>
<tr><td>Капуста</td><td>0,025</td><td>0,019</td><td>0,0006</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,05</td><td>0,038</td><td>0,0005</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,095</td><td>0,0023</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,193</td><td>0,0046</td><td>77,2</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>76,3</td></tr>
<tr><td>Клубни картофеля</td><td>0,025</td><td>0,0185</td><td>0,0005</td><td>74</td></tr>
<tr><td></td><td>0,050</td><td>0,037</td><td>0,0011</td><td>74</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,096</td><td>0,0009</td><td>76,8</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,189</td><td>0,0015</td><td>75,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>75,1</td></tr>
<tr><td colspan="5">Спинозин Д</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,0025</td><td>0,0023</td><td>0,0001</td><td>92</td></tr>
<tr><td></td><td>0,005</td><td>0,0046</td><td>0,0001</td><td>92</td></tr>
<tr><td></td><td>0,010</td><td>0,0096</td><td>0,0001</td><td>96</td></tr>
<tr><td></td><td>0,025</td><td>0,0244</td><td>0,0003</td><td>97,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>94,4</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,05</td><td>0,039</td><td>0,0011</td><td>78</td></tr>
<tr><td></td><td>0,10</td><td>0,075</td><td>0,0013</td><td>75</td></tr>
<tr><td></td><td>0,25</td><td>0,189</td><td>0,0030</td><td>75,6</td></tr>
<tr><td></td><td>0,50</td><td>0,377</td><td>0,0083</td><td>75,4</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>76,0</td></tr>
<tr><td>Плоды огурца</td><td>0,025</td><td>0,019</td><td>0,0006</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,05</td><td>0,038</td><td>0,0004</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,093</td><td>0,0040</td><td>74,4</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,192</td><td>0,0051</td><td>76,8</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>75,8</td></tr>
<tr><td>Плоды яблок</td><td>0,025</td><td>0,019</td><td>0,0003</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,050</td><td>0,038</td><td>0,0007</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,098</td><td>0,0008</td><td>78,4</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,191</td><td>0,0010</td><td>76,4</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>76,7</td></tr>
<tr><td>Плоды перца</td><td>0,025</td><td>0,019</td><td>0,0004</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,05</td><td>0,037</td><td>0,0006</td><td>74</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,094</td><td>0,0034</td><td>75,2</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,189</td><td>0,0019</td><td>75,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>75,2</td></tr>
<tr><td>Капуста</td><td>0,025</td><td>0,019</td><td>0,0005</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,05</td><td>0,038</td><td>0,0004</td><td>76</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,096</td><td>0,0033</td><td>76,8</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,194</td><td>0,0050</td><td>77,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>76,6</td></tr>
<tr><td>Клубни картофеля</td><td>0,025</td><td>0,0185</td><td>0,0003</td><td>74</td></tr>
<tr><td></td><td>0,050</td><td>0,037</td><td>0,0006</td><td>74</td></tr>
<tr><td></td><td>0,125</td><td>0,091</td><td>0,0012</td><td>72,8</td></tr>
<tr><td></td><td>0,250</td><td>0,184</td><td>0,0036</td><td>73,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>73,6</td></tr>
</table>



##### <a id="p100142"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100143"></a>В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании огурцов, яблок, перца, капусты и картофеля.


### <a id="p100144"></a>2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование



##### <a id="p100145"></a>2.2.1 Реактивы, материалы и растворы


<a id="p100146"></a>Спинозин А, аналитический стандарт
с содержанием д.в. 91,2%, фирма
<a id="p100147"></a>ДауАгросайенсес
<a id="p100148"></a>Спинозин Д, аналитический стандарт
с содержанием д.в. 94,0%, фирма
<a id="p100149"></a>ДауАгросайенсес
<a id="p100150"></a>Аммоний уксусно-кислый, ч. ГОСТ 3117-78
<a id="p100151"></a>Ацетон, ос.ч.                              ТУ 6-09-3513-86
<a id="p100152"></a>Ацетонитрил                                ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100153"></a>Вода бидистиллированная деионизированная   ГОСТ 7602-72
<a id="p100154"></a>Гексан, ч.                                 ТУ 6-09-3375
<a id="p100155"></a>Гелий, ос.ч.
<a id="p100156"></a>Калий марганцово-кислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75
<a id="p100157"></a>Метилен хлористый для ВЭЖХ, пестицидный    ТУ 6-09-2662-77
<a id="p100158"></a>Метиловый спирт (метанол), Chromasolv,
RiedeldeHaen 34860
<a id="p100159"></a>Натрий серно-кислый безводный, х.ч. [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100160"></a>Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
<a id="p100161"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ:
ацетонитрил - 350 мл, метанол - 350 мл,
2%-ный аммоний уксусно-кислый - 200 мл
<a id="p100162"></a>Концентрирующие патроны Диапак-Амин        ТУ 4215-002-05451931-94
(0,6 г)
<a id="p100163"></a>Концентрирующие патроны Диапак-С           ТУ 4215-002-05451931-94
(0,6 г)
<a id="p100164"></a>Фильтры бумажные "красная лента" ТУ 6-09-1678-86

<div align="center">

<a id="p100165"></a>Фильтры для очистки растворителей

</div>

диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм,

<div align="center">

фирма Уотерс.

</div>



##### <a id="p100166"></a>2.2.2 Приборы и оборудование


<a id="p100167"></a>Хроматограф жидкостный Уотерс 510
с ультрафиолетовым детектором с изменяемой
длиной волны и чувствительностью не ниже
0,005 единиц адсорбции на шкалу или
другой аналогичного типа
<a id="p100168"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной
150 мм, внутренним диаметром 3,9 мм,
зернением 5 мкм XTerra MS С18 (Waters)
<a id="p100169"></a>Предколонка стальная длиной 20 мм,
внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм
Symmetry Shield RP 18
<a id="p100170"></a>Ванна ультразвуковая
<a id="p100171"></a>Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные         ГОСТ 34104-80Е
<a id="p100172"></a>Весы лабораторные общего назначения, с ГОСТ 19491-74
наибольшим пределом взвешивания до 500 г
и пределом допустимой погрешности
+/- 0,038 г
<a id="p100173"></a>Воронки делительные на 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82Е
<a id="p100174"></a>Воронки конические стеклянные ГОСТ 25336-82Е
диаметром 50 - 60 мм
<a id="p100175"></a>Встряхиватель механический или                     ТУ 64-673М
аналогичный
<a id="p100176"></a>Колбы конические плоскодонные на 250 и             ГОСТ 9737-70
500 мл
<a id="p100177"></a>Колбы мерные на 10, 25, 50 и 100 мл                ГОСТ 1770-74
<a id="p100178"></a>Концентраторы грушевидные и круглодонные           ГОСТ 10394-72
объемом 50, 100 и 250 мл, КТУ-100-14/19
<a id="p100179"></a>Микрошприц для жидкостного хроматографа на
50 - 100 мкл
<a id="p100180"></a>Насос водоструйный                                 ГОСТ 10696-75
<a id="p100181"></a>Пипетки мерные на 0,2; 1,0; 2,0; и 5,0 мл [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
<a id="p100182"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М             ТУ 25-11-917-74
или аналогичный
<a id="p100183"></a>Стаканы стеклянные на 100 - 500 мл                 ГОСТ 25366-80Е
<a id="p100184"></a>Алонж прямой с отводом для вакуума для
работы с концентрирующими патронами
<a id="p100185"></a>Диапак-Амин и Диапак С.


### <a id="p100186"></a>2.3. Подготовка к определению



##### <a id="p100187"></a>2.3.1 Подготовка растворителей

<a id="p100188"></a>Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцово-кислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.
<a id="p100189"></a>Перед началом эксперимента проверяют чистоту ацетонитрила, ацетона, гексана и хлористого метилена. Для этого досуха выпаривают на ротационном вакуумном испарителе 100 мл растворителя, добавляют в концентратор 2 мл ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют при 245 нм. При недостаточной чистоте растворителей проводят их очистку.
<a id="p100190"></a>Ацетонитрил перегоняют.
<a id="p100191"></a>Ацетон перегоняют над небольшим количеством марганцово-кислого калия (Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М., 1976. С. 438 - 439).
<a id="p100192"></a>Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором марганцово-кислого калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М., 1976. С. 441).
<a id="p100193"></a>Хлористый метилен встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают водным раствором карбоната натрия, водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют над оксидом (V) фосфора (Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М., 1976. С. 440).


##### <a id="p100194"></a>2.3.2 Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

<a id="p100195"></a>Колонку XTerra MS С18 с предколонкой Symmetry Shield RP 18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин. в течение 3 - 4 ч.


##### <a id="p100196"></a>2.3.3 Приготовление растворов для проведения анализа


###### <a id="p100197"></a>2.3.3.1 Приготовление 2%-ного раствора уксусно-кислого аммония.

<a id="p100198"></a>В мерную колбу объемом 1000 мл наливают 300 мл очищенной воды, добавляют 20 г уксусно-кислого аммония, перемешивают, доводят до метки очищенной водой и тщательно перемешивают.
<a id="p100199"></a>2.3.3.2. Приготовление смеси для растворения образцов и последовательного разведения стандартных растворов.
<a id="p100200"></a>В колбу объемом 100 мл помещают 50 мл ацетонитрила, добавляют 50 мл метанола и тщательно перемешивают. Фазу используют для растворения стандартов, образцов и последовательного разведения стандартных растворов.

###### <a id="p100201"></a>2.3.3.3 Приготовление стандартных растворов.

<a id="p100202"></a>Спинозин А и Спинозин Д разлагаются под воздействием света. При работе как со стандартными растворами, так и с аналитическими пробами следует соблюдать меры предосторожности: защищать от света (например, обертывать черной бумагой) колбы с экстрактами, патроны Диапак-Амин и Диапак С, концентраторы с сухим остатком экстракта. Процедуру очистки экстрактов в делительных воронках и упаривания экстрактов на ротационном вакуумном испарителе необходимо проводить в затемненной комнате (без включения электрического света и с зашторенным окном).
<a id="p100203"></a>Взвешивают 10 мг Спинозина А (Спинозина Д) в мерной колбе объемом 100 мл. Навеску растворяют в 100 мл смеси растворителей (ацетонитрил - метанол в соотношении 1:1) для растворения стандартов (стандартный раствор с концентрацией Спинозина А (Спинозина Д) 100 мкг/мл). Затем по 10,0 мл стандартных растворов Спинозина А и Спинозина Д с концентрацией 100,0 мкг/мл отбирают пипеткой в мерную колбу объемом 100 мл и доводят объем до метки смесью растворителей для растворения стандартов при перемешивании (стандартный раствор, содержащий по 10,0 мкг/мл Спинозина А и Спинозина Д). Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,5; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/мл Спинозина А и Спинозина Д, и используют эти растворы для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы можно хранить в холодильнике в темной посуде в течение трех месяцев.


##### <a id="p100204"></a>2.3.4 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

<a id="p100205"></a>Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду.
<a id="p100206"></a>В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 350 мл ацетонитрила, 350 мл метанола и 200 мл 2%-ного уксусно-кислого аммония. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.


##### <a id="p100207"></a>2.3.5 Построение калибровочного графика

<a id="p100208"></a>Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из стандартных растворов, содержащих по 2,5; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/мл Спинозина А и Спинозина Д, измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят графики зависимости площади пика от концентрации Спинозина А и Спинозина Д.


##### <a id="p100209"></a>2.3.6 Подготовка концентрирующего патрона Диапак-Амин (0,6 г) для очистки экстракта

<a id="p100210"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 2 мл/мин.
<a id="p100211"></a>Патрон Диапак-Амин устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).

###### <a id="p100212"></a>2.3.6.1 Кондиционирование патрона.

<a id="p100213"></a>Концентрирующий патрон промывают последовательно 10 мл смеси гексан - ацетон в соотношении 1:1 и 10 мл гексана. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
<a id="p100214"></a>2.3.6.2. Проверка хроматографического поведения Спиносада на концентрирующем патроне Диапак-Амин.
<a id="p100215"></a>Из стандартного раствора, содержащего по 10 мкг/мл Спинозина А и Спинозина Д, отбирают 1 мл, помещают в концентратор объемом 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси для растворения образцов, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют.
<a id="p100216"></a>Концентратор тщательно обмывают 1 мл ацетона, добавляют туда же 9 мл гексана и смесь также вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси для растворения образцов, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют.
<a id="p100217"></a>Повторяют вышеописанную процедуру еще раз. Определяют фракции, содержащие Спинозин А и Спинозин Д, и объединяют их.


##### <a id="p100218"></a>2.3.7 Подготовка концентрирующего патрона Диапак-С (0,6 г) для очистки экстракта

<a id="p100219"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 2 мл/мин.
<a id="p100220"></a>Патрон Диапак-С устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).

###### <a id="p100221"></a>2.3.7.1 Кондиционирование патрона.

<a id="p100222"></a>Концентрирующий патрон промывают последовательно 10 мл смеси хлористый метилен - метанол в соотношении 75:25, 10 мл ацетонитрила, 10 мл хлористого метилена и 20 мл смеси гексана. Элюаты отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
<a id="p100223"></a>2.3.7.2. Проверка хроматографического поведения Спиносада на концентрирующем патроне Диапак-С.
<a id="p100224"></a>Из стандартного раствора Спиносада, содержащего по 10 мкг/мл Спинозина А и Спинозина Д, отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 10 мл гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор объемом 100 мл и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси и хроматографируют.
<a id="p100225"></a>Далее в концентратор добавляют 20 мл гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор объемом 100 мл и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси и хроматографируют.
<a id="p100226"></a>Затем в концентратор добавляют 10 мл хлористого метилена, тщательно обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор объемом 100 мл и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси и хроматографируют.
<a id="p100227"></a>Далее в концентратор добавляют 5 мл ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор объемом 100 мл и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси и хроматографируют.
<a id="p100228"></a>Продолжают элюирование Спинозина А и Спинозина Д двумя порциями по 10 мл смеси ацетонитрил - метанол в соотношении 75:25, обмывая каждый раз концентратор. Элюат после внесения каждой порции растворителей собирают в концентратор и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси для растворения образцов и хроматографируют. Элюаты, содержащие Спинозин А и Спинозин Д, объединяют и определяют полноту элюирования веществ с патрона, а также необходимый объем растворителей.
<a id="p100229"></a>Проверку проводят каждый раз перед началом использования новой партии патронов.


### <a id="p100230"></a>2.4. Отбор проб


<a id="p100231"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
<a id="p100232"></a>Пробы плодов огурцов и яблок, а также клубни картофеля замораживают и хранят при температуре -18 °С. Непосредственно перед определением пробы измельчают на терке.


### <a id="p100233"></a>2.5. Описание определения



##### <a id="p100234"></a>2.5.1 Вода

<a id="p100235"></a>Пробу воды объемом 200 мл фильтруют через фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 50 мл хлористого метилена и интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор, пропуская экстракт через безводный сульфат натрия. Экстракцию Спинозина А и Спинозина Д хлористым метиленом повторяют еще 2 раза порциями по 50 мл, интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. Каждый раз после разделения фаз в воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор, пропуская экстракт через безводный сульфат натрия. Осушитель обмывают 10 мл хлористого метилена и смыв объединяют с основным экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток после упаривания растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил - метанол в соотношении 1:1 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.


##### <a id="p100236"></a>2.5.2 Почва


###### <a id="p100237"></a>2.5.2.1 Экстракция и предварительная очистка экстракта.

<a id="p100238"></a>Образец почвы массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, затем добавляют 70 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 8:2 и экстрагируют в течение 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно встряхивают в течение 10 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт переносят в центрифужный стакан и центрифугируют при 2500 об./мин. 5 мин. Супернатант фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли через фильтр "красная лента".
<a id="p100239"></a>Экстракцию повторяют еще два раза, добавляя каждый раз по 70 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 8:2 и экстрагируя по 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт фильтруют в защищенную от света колбу с 5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют выстаиваться на 5 мин. Затем объединенный экстракт переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) и после разделения фаз нижний водный слой отбрасывают.
<a id="p100240"></a>К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой (объемом приблизительно 1,0 - 2,0 мл). Ацетонитрильный слой переносят в коническую колбу с 5 г безводного сульфата натрия, плотно закрывают колбу стеклянной или тефлоновой пробкой и колбу встряхивают на механическом встряхивателе 10 мин. Затем ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия, осушитель в колбе промывают 10 мл ацетонитрила, объединяют с основным экстрактом и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100241"></a>Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетона, добавляют туда же 50 мл дистиллированной воды, 2 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор обмывают 20 мл хлористого метилена, переносят его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 20 мл хлористого метилена и интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Экстракты (нижний слой) объединяют в концентраторе, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 мл хлористого метилена, который объединяют с основным экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

###### <a id="p100242"></a>2.5.2.2 Очистка экстракта на концентрирующих патронах.

<a id="p100243"></a>Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на подготовленный патрон Диапак-Амин. В концентратор помещают 1 мл ацетона, добавляют 9 мл гексана, смесью тщательно обмывают стенки концентратора, перемешивают и полученный раствор также вносят на картридж. Элюаты объединяют и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток подвергают дальнейшей очистке на патроне Диапак С.
<a id="p100244"></a>Сухой остаток растворяют в 10 мл гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на картридж. Далее в концентратор последовательно добавляют растворители, тщательно обмывая стенки концентратора. Растворы вносят на картридж в следующем порядке, пропуская их через патрон, не допуская его усушения: 20 мл гексана, 10 мл хлористого метилена, 5 мл ацетонитрила. Все элюаты отбрасывают. Спинозин А и Спинозин Д элюируют с патрона 10 мл смеси ацетонитрил - метанол в соотношении 75:25, обмыв предварительно концентратор. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100245"></a>Сухой остаток растворяют в 4 мл смеси ацетонитрил - метанол в соотношении 1:1 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.


##### <a id="p100246"></a>2.5.3 Плоды огурца и яблок

<a id="p100247"></a>Образец измельченных плодов огурца (яблок) массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, защищенную от света, прибавляют последовательно 50 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 9:1 и экстрагируют в течение 5 мин. на ультразвуковой ванне, дополнительно встряхивая воронку в течение 5 мин. на механическом встряхивателе.
<a id="p100248"></a>Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 9:1 и экстрагируя по 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт фильтруют в защищенную от света колбу с 5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют выстаиваться на 5 мин. Затем объединенный экстракт переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) и после разделения фаз нижний водный слой отбрасывают.
<a id="p100249"></a>К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой (объемом приблизительно 1,0 - 2,0 мл). Ацетонитрильный слой переносят в коническую колбу с 5 г безводного сульфата натрия, плотно закрывают колбу стеклянной или тефлоновой пробкой и колбу встряхивают на механическом встряхивателе 10 мин. Затем ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия, осушитель в колбе промывают 10 мл ацетонитрила, объединяют с основным экстрактом и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100250"></a>Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетона, добавляют туда же 50 мл дистиллированной воды, 2 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор обмывают 20 мл хлористого метилена, переносят его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 20 мл хлористого метилена и интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Экстракты (нижний слой) объединяют в концентраторе, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 мл хлористого метилена, который объединяют с основным экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100251"></a>Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих патронах, как описано в [разделе 2.5.2.2](#p100242).
<a id="p100252"></a>Сухой остаток после очистки растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил - метанол в соотношении 1:1 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.


##### <a id="p100253"></a>2.5.4 Клубни картофеля и плоды перца

<a id="p100254"></a>Образец измельченных клубней картофеля или перца массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, защищенную от света, прибавляют последовательно 50 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 8:2 и экстрагируют в течение 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно в течение 5 мин. на механическом встряхивателе. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 8:2 и экстрагируя по 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт фильтруют в защищенную от света колбу с 5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют выстаиваться на 5 минут. Затем объединенный экстракт переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) и после разделения фаз нижний водный слой отбрасывают. К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают выделившийся нижний водный слой (объемом приблизительно 1,0 - 2,0 мл). Ацетонитрильный слой переносят в коническую колбу с 5 г безводного сульфата натрия, плотно закрывают колбу стеклянной или тефлоновой пробкой и колбу встряхивают на механическом встряхивателе 10 мин. Затем ацетонитрильный экстракт переносят в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия, осушитель в колбе промывают 10 мл ацетонитрила, объединяют с основным экстрактом и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100255"></a>Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетона, добавляют туда же 50 мл дистиллированной воды, 2 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор обмывают 20 мл хлористого метилена, переносят его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 20 мл хлористого метилена и интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Экстракты (нижний слой) объединяют в концентраторе, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 мл хлористого метилена, который объединяют с основным экстрактом. Объединенный экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100256"></a>Далее проводят очистку экстракта на патронах, как описано в [разделе 2.5.2.2](#p100242).
<a id="p100257"></a>Сухой остаток после очистки растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил - метанол в соотношении 1:1 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.


##### <a id="p100258"></a>2.5.5 Капуста

<a id="p100259"></a>Образец измельченной капусты массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, защищенную от света, прибавляют 50 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 8:2 и экстрагируют в течение 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно в течение 5 мин. на механическом встряхивателе. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 8:2, экстрагируя по 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт фильтруют в защищенную от света колбу с 5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют выстаиваться на 5 мин. Затем объединенный экстракт переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) и после разделения фаз нижний водный слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт переносят через химическую воронку с 10 г безводного сульфата натрия в плоскодонную колбу объемом 250 мл с притертой пробкой, осушитель обмывают 15 мл ацетонитрила, объединяют с основным экстрактом и объединенный экстракт помещают в морозильную камеру (температура -18 °С) на 0,5 ч. Затем экстракт фильтруют через фильтр "красная лента" в концентратор объемом 250 мл и осторожно (пенится в начале упаривания) упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100260"></a>Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетона, добавляют туда же 50 мл дистиллированной воды, 2 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор обмывают 20 мл хлористого метилена, переносят его в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор через слой безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 20 мл хлористого метилена и интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Экстракты (нижний слой) объединяют в концентраторе, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 мл хлористого метилена, который объединяют с основным экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100261"></a>Далее проводят очистку экстракта на патронах, как описано в [разделе 2.5.2.2](#p100242).
<a id="p100262"></a>Сухой остаток после очистки растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил - метанол в соотношении 1:1 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.


### <a id="p100263"></a>2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов



##### <a id="p100264"></a>2.6.1 Условия хроматографирования

<a id="p100265"></a>Хроматограф "Waters" или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
<a id="p100266"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм ХТеrrа MS С18 (Waters).
<a id="p100267"></a>Предколонка стальная длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм Symmetry Shield RP 18.
<a id="p100268"></a>Время выхода Спинозина А            11,0 - 11,8 мин.
<a id="p100269"></a>Время выхода Спинозина Д            14,3 - 15,4 мин.
<a id="p100270"></a>Температура колонки                 25 °С
<a id="p100271"></a>Подвижная фаза                      ацетонитрил - метанол - 2%-ный
                                    ацетат аммония в соотношении
                                    35:35:20
<a id="p100272"></a>Чувствительность                    0,005 ед. оптической
                                    плотности на шкалу
<a id="p100273"></a>Объем вводимой пробы                20 мкл.
<a id="p100274"></a>Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 5 - 50 нг.


##### <a id="p100275"></a>2.6.2 Обработка результатов анализа

<a id="p100276"></a>Содержание Спинозина А и Спинозина Д рассчитывают по формуле:

                             S   х А х V
                              пр
<a id="p100277"></a>                        Х = ------------- Р,
                            100 х S   х m
                                   ст

    где:
    Х - содержание Спинозина А (Спинозина Д)  в  пробе,  мг/кг или
мг/л;
    S   - высота (площадь) пика стандарта, мм;
     ст
    S   - высота (площадь) пика образца, мм;
     пр
    А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
    V - объем  экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
    m - масса анализируемого образца, г (мл);
    Р  -  содержание  Спинозина  А  (Спинозина Д)  в аналитическом
стандарте, %.


## 3. <a id="p100278"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100279"></a>Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.


## 4. <a id="p100280"></a>Разработчики


<a id="p100281"></a>Калинин В.А., проф., к. с-х. н.; Довгилевич Е.В., к. биол. н.; Довгилевич А.В., к. хим. н.; Устименко Н.В., к. биол. н.
<a id="p100282"></a>Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева.
<a id="p100283"></a>Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (095) 976-37-68, факс: (095) 976-43-26.



<a id="p100284"></a>

---