---
title: "\"МУК 4.1.1415-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение кломазона в воде хроматографическими методами. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1415-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1415-03"
---

## "МУК 4.1.1415-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение кломазона в воде хроматографическими методами. Методические указания"

# "МУК 4.1.1415-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение кломазона в воде хроматографическими методами. Методические указания"

(утв. Минздравом России 24.06.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 30 июня 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

24 июня 2003 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЛОМАЗОНА В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="right">

**МУК 4.1.1415-03**

</div>


<a id="p100002"></a>Дата введения
30 июня 2003 года

1. <a id="p100006"></a>Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева; при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России. Разработчики методики указаны в конце.
2. <a id="p100007"></a>Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, акад. РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

<div align="center">

4. <a id="p100009"></a>Введены с 30 июня 2003 г.

</div>

5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100011"></a>Вводная часть


<a id="p100012"></a>Фирма-производитель: ФМС (США).
<a id="p100013"></a>Торговое название: КОММАНД.
<a id="p100014"></a>Действующее вещество: кломазон.
<a id="p100015"></a>2-(2-хлорбензил)-4,4-диметил-3-изоксалидин-3-он(ИЮПАК)

<a id="p100016"></a>    Эмпирическая формула: C  H  ClNO                  М. м.: 239,7
                           12 14    2

<a id="p100017"></a>Светло-коричневая вязкая жидкость.
<a id="p100018"></a>Температура плавления: 25 °С.
<a id="p100019"></a>Температура кипения: 275 °С.
<a id="p100020"></a>Давление паров при 25 °С: 19,2 мПа.
<a id="p100021"></a>    Коэффициент распределения н-октанол/вода: K   logP = 2,5.
                                               ow
<a id="p100022"></a>Хорошо растворим в ацетоне, гексане, этаноле, метаноле, хлороформе, дихлорметане и ацетонитриле; растворимость в воде - 1,10 г/куб. дм.
<a id="p100023"></a>Стабилен при комнатной температуре не менее 2 лет, при 50 °С - не менее 3 месяцев.
<a id="p100024"></a>    Краткая  токсикологическая  характеристика: Острая пероральная
токсичность (LD  ) для крыс - 1369 - 2077 мг/кг; острая дермальная
               50
токсичность   (LD  )   для   крыс   -  более  2000  мг/кг;  острая
                 50
ингаляционная токсичность (LC  ) для крыс - 4,8 мг/куб. дм (4 ч).

<div align="center">

                             50<br>
<a id="p100025"></a>Гигиенические нормативы. ПДК в воде - 0,02 мг/куб. дм.

</div>

<a id="p100026"></a>Область применения препарата. Кломазон - гербицид избирательного действия, применяемый для борьбы со злаковыми и двудольными сорными растениями в посевах сои и риса при довсходовом или предпосевном внесении.


## 2. <a id="p100027"></a>Методика определения кломазона в воде хроматографическими методами



### <a id="p100028"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100029"></a>2.1.1 Принцип методики

<a id="p100030"></a>Методика основана на извлечении кломазона из анализируемой пробы гексаном, концентрировании экстракта и последующем количественном определении альтернативными методами: высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором, газожидкостной хроматографией (ГЖХ) с детектором постоянной скорости рекомбинации или тонкослойной хроматографией (ТСХ).
<a id="p100031"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

##### <a id="p100032"></a>2.1.2 Избирательность метода

<a id="p100033"></a>В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии глобальных загрязнителей окружающей среды: хлорпроизводные циклопарафинов (изомеры ГХЦГ), соединений дифенильного ряда (ДДТ и его производные), их метаболитов - полихлорированных бензолов и фенолов, а также в присутствии трихлорацетата натрия, который может применяться на посевах в качестве гербицида.

##### <a id="p100034"></a>2.1.3 Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95)



<table>
<colgroup><col width="63%"><col width="18%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Показатели точности измерений</td><td colspan="2">Метод</td></tr>
<tr><td>ВЭЖХ</td><td>ГЖХ</td></tr>
<tr><td>Среднее значение определения (%)</td><td>90</td><td>90</td></tr>
<tr><td>Стандартное отклонение (%)</td><td>17,4</td><td>7,0</td></tr>
<tr><td>Относительное стандартное отклонение (%)</td><td>7,1</td><td>4,0</td></tr>
<tr><td>Доверительный интервал (%)</td><td>+/- 18,4</td><td>+/- 10,9</td></tr>
<tr><td>Относительная погрешность измерения (%)</td><td>+/- 20,4</td><td>+/- 12,1</td></tr>
<tr><td>Нижний предел обнаружения (мг/куб. дм)</td><td>0,01</td><td>0,001</td></tr>
</table>



### <a id="p100042"></a>2.2. Реактивы, растворы и материалы


<a id="p100043"></a>Кломазон с содержанием д. в. 99,8%
**(ФМС, США)**
<a id="p100044"></a>Азот, оч                                          ГОСТ 9293-79
<a id="p100045"></a>Аммиак водный, 25%-ный, ч                         ГОСТ 1277-81
<a id="p100046"></a>Ацетон, ч ГОСТ 2603-79
<a id="p100047"></a>н-Гексан, ч ГОСТ 2603-79
<a id="p100048"></a>Водорода пероксид, 30%-ный водный раствор         ГОСТ 10929-77
<a id="p100049"></a>Изопропиловый спирт, хч                           ТУ 6-09-402-75
<a id="p100050"></a>Кислота серная, хч                                ГОСТ 4203-77
<a id="p100051"></a>Кислота хлороводородная (соляная), хч ГОСТ 3118-77
<a id="p100052"></a>Метиловый спирт, хч                               ГОСТ
<a id="p100053"></a>Натрия гидроксид, хч, 25%-ный водный раствор      ГОСТ 4323-77
<a id="p100054"></a>Натрия сульфат безводный, хч                      ГОСТ 1277-81
<a id="p100055"></a>Серебра нитрат, хч                                ГОСТ 1277-81
<a id="p100056"></a>2-Феноксиметанол, ч                               ТУ 6-09-3688-76
<a id="p100057"></a>Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм)
с 5% SE-30, Хемапол, Чехия
<a id="p100058"></a>Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм) с 1,5
ОV-17 + 1,95% QF-1, Хемапол, Чехия
<a id="p100059"></a>Пластинки для ВЭТСХ (СССР)

<div align="center">

<a id="p100060"></a>Пластинки "Кизельгель 60 F-254" (ФРГ)

</div>

<a id="p100061"></a>Пластинки "Силуфол" Чехия
<a id="p100062"></a>Бумажные фильтры "белая лента", обеззоленные
и предварительно промытые гексаном                ТУ 6-09-2678-77


### <a id="p100063"></a>2.3. Приборы, аппаратура, посуда


<a id="p100064"></a>Жидкостный хроматограф Милихром
с ультрафиолетовым детектором
<a id="p100065"></a>Хроматографическая колонка стальная,
длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм,
заполненная Силасорбом 600, зернением 5 мкм
<a id="p100066"></a>Хроматограф газовый серии "Цвет" или
аналогичный, снабженный детектором постоянной
скорости рекомбинации (ДПР) с пределом
                                -14
детектирования по линдану 4 x 10    г/куб. см
<a id="p100067"></a>Хроматографическая колонка стеклянная, длиной
1 или 2 м, внутренним диаметром 2 - 3 мм
<a id="p100068"></a>Микрошприц типа МШ-10, вместимостью 10 мкл        ТУ 5Е2-833-024
<a id="p100069"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с              ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100070"></a>Баня водяная                                      ТУ 64-1-2850-76
<a id="p100071"></a>Весы аналитические типа ВЛА-200                   ГОСТ 34104-80Е
<a id="p100072"></a>Камера хроматографическая                         ГОСТ 10565-74
<a id="p100073"></a>Насос водоструйный                                ГОСТ 10696-75
<a id="p100074"></a>Облучатель ртутно-кварцевый типа ОКН-11           ТУ 64-1-1618-77
<a id="p100075"></a>Пульверизаторы стеклянные                         ГОСТ 10391-74
<a id="p100076"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М
или аналогичный                                   ТУ 25-11-917-76
<a id="p100077"></a>Установка компрессорная                           ТУ 64-1-2985-78
<a id="p100078"></a>Шкаф сушильный                                    ТУ 64-1-1411-76Е
<a id="p100079"></a>Воронки делительные                               ГОСТ 3613-75
<a id="p100080"></a>Колбы мерные, вместимостью 100 мл                 ГОСТ 1770-74
<a id="p100081"></a>Цилиндры мерные, вместимостью 10, 50 мл           ГОСТ 1770-74Е
<a id="p100082"></a>Колбы грушевидные со шлифом,
вместимостью 100 мл                               ГОСТ 10394-72
<a id="p100083"></a>Колбы конические, вместимостью 100 мл [ГОСТ 22524-77](https://bukva.ai/docs/gost-22524-77)
<a id="p100084"></a>Пробирки центрифужные, мерные ГОСТ 25336-82Е
<a id="p100085"></a>Пипетки, вместимостью 0,1, 1, 2, 5 и 10 мл [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
<a id="p100086"></a>Воронки химические, конусные, диаметром
34 - 40 мм ГОСТ 25336-82Е


### <a id="p100087"></a>2.4. Отбор проб


<a id="p100088"></a>Отбор, хранение и подготовка проб проводятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными за N 2051-79 от 21.08.79.
<a id="p100089"></a>Отобранные пробы можно хранить в холодильнике не более 5 дней. Перед анализом воду (при наличии взвеси) фильтруют через неплотный бумажный фильтр.


### <a id="p100090"></a>2.5. Подготовка к определению



##### <a id="p100091"></a>2.5.1 Метод ВЭЖХ


###### <a id="p100092"></a>2.5.1.1 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

<a id="p100093"></a>В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают с помощью пипетки 5 мл изопопанола и 5 мл метанола, доливают до метки гексаном, перемешивают, фильтруют.

###### <a id="p100094"></a>2.5.1.2 Кондиционирование колонки

<a id="p100095"></a>Промыть колонку для ВЭЖХ смесью гексан-метанол-изопропанол (90:5:5, по объему) в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 100 мкл/мин.

##### <a id="p100096"></a>2.5.2 Метод ГЖХ. Подготовка и кондиционирование колонки

<a id="p100097"></a>Готовую насадку (5% SE-30 на Хроматоне N-AW-DMCS) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 10 - 12 ч.

##### <a id="p100098"></a>2.5.3 Метод ТСХ


###### <a id="p100099"></a>2.5.3.1 Приготовление проявляющих реагентов


###### <a id="p100100"></a>2.5.3.1.1 Проявляющий реагентин N 1

<a id="p100101"></a>1 г нитрата серебра растворяют в 1 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл 2-феноксиметанола, 190 мл ацетона, 1 - 2 капли пероксида водорода, раствор перемешивают и переносят в склянку из темного стекла.

###### <a id="p100102"></a>2.5.3.2.2 Проявляющий реагент N 2

<a id="p100103"></a>0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды в мерной колбе на 100 мл, добавляют 10 мл 25%-ного водного аммиака, раствор доводят до 100 мл ацетоном, перемешивают и переносят в склянку из темного стекла.

###### <a id="p100104"></a>2.5.3.2 Приготовление подвижной фазы для ТСХ

<a id="p100105"></a>В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 20 мл ацетона и добавляют до метки гексан, перемешивают. Смесь наливают в хроматографическую камеру слоем не более 6 - 8 мм за 30 мин. до начала хроматографирования.

##### <a id="p100106"></a>2.5.4 Приготовление стандартных растворов

<a id="p100107"></a>Основной стандартный раствор кломазона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,8% д. в., в гексане в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100108"></a>Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,4; 1,0; 2,0; 4,0; 10,0; 20 и 40,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора кломазона соответствующим последовательным разбавлением гексаном.
<a id="p100109"></a>Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.

##### <a id="p100110"></a>2.5.5 Построение градуировочного графика


###### <a id="p100111"></a>2.5.5.1 Градуировочный график А (измерение по [п. 2.7.1,](#p100119) ВЭЖХ)

<a id="p100112"></a>Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора кломазона с концентрацией 4,0; 10,0; 20,0 и 40 мкг/мл.

###### <a id="p100113"></a>2.5.5.2 Градуировочный график В (измерение по [п. 2.7.2,](#p100131) ГЖХ)

<a id="p100114"></a>Для построения градуировочного графика в испаритель хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора кломазона с концентрацией 0,4; 1,0; 2,0; 4,0 и 10,0.
<a id="p100115"></a>Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график (А или В) зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации кломазона в растворе в мкг/мл.


### <a id="p100116"></a>2.6. Описание определения


<a id="p100117"></a>100 мл анализируемой пробы воды помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 10 мл 25%-ного водного раствора гидроксида натрия, перемешивают и добавляют 20 мл н-гексана. Воронку встряхивают в течение 3 мин., после разделения фаз гексановый слой сливают в грушевидную колбу вместимостью 100 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, помещенного в конической воронке на складчатом бумажном фильтре. Извлечение препарата из водной пробы повторяют еще дважды, используя по 20 мл н-гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С почти досуха, остаток отдувают потоком воздуха или азота особой чистоты. Сухой остаток растворяют в 0,1 (ВЭЖХ, ТСХ) или 0,25 мл (ГЖХ) н-гексана и анализируют одним из хроматографических методов.


### <a id="p100118"></a>2.7. Условия хроматографирования



##### <a id="p100119"></a>2.7.1 ВЭЖХ

<a id="p100120"></a>Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия).
<a id="p100121"></a>Колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная Силасорбом 600, зернением 5 мкм.
<a id="p100122"></a>Температура колонки: комнатная.
<a id="p100123"></a>Подвижная фаза: гексан-изопропанол-метанол (90:5:5, по объему).
<a id="p100124"></a>Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.
<a id="p100125"></a>Рабочая длина волны: 240 нм.
<a id="p100126"></a>Чувствительность: 0,4 ед. абсорбции на шкалу.
<a id="p100127"></a>Объем вводимой пробы: 5 мкл.
<a id="p100128"></a>Время выхода кломазона: около 6 мин.
<a id="p100129"></a>Линейный диапазон детектирования: 20 - 200 нг.
<a id="p100130"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 40 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

##### <a id="p100131"></a>2.7.2 ГЖХ

<a id="p100132"></a>Хроматограф газовый "Цвет-570" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов.
<a id="p100133"></a>Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хроматоном N-AW-DMCS с 5% SE-30 (0,16 - 0,20 мм).
                                      10
<a id="p100134"></a>    Рабочая шкала электрометра 64 x 10   Ом.
<a id="p100135"></a>    Скорость движения ленты самописца 200 мм/ч.
<a id="p100136"></a>    Температура термостата колонки - 190 °С
                           детектора - 300 °С
                           испарителя - 220 °С
<a id="p100137"></a>Скорость газа-носителя (азота) - 60 мл/мин.
<a id="p100138"></a>Объем вводимой пробы - 5 мкл.
<a id="p100139"></a>Время выхода кломазона - 2,5 мин.
<a id="p100140"></a>Линейный диапазон детектирования: 2 - 50 нг.
<a id="p100141"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют гексаном.
<a id="p100142"></a>Для повышения точности идентификации кломазона при совместном присутствии в пробе гамма-ГХЦГ, имеющего близкое время удерживания, кломазон удаляется из пробы обработкой концентрированной серной кислотой. Повторный анализ пробы позволяет установить вклад кломазона в первичный хроматографический сигнал.

##### <a id="p100143"></a>2.7.3 ТСХ

<a id="p100144"></a>Гексановый раствор в колбе, полученный по [п. 2.6](#p100116) количественно (или его аликвотную часть) наносят на хроматографические пластинки "Силуфол", "Кизельгель 60F-254" или "Пластинки для ВЭТСХ". Рядом наносят стандартные растворы в объеме, соответствующем содержанию кломазона 1, 2, 5 и 10 мкг. Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, содержащую смесь н-гексан-ацетон (4:1, по объему). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помещают ее под тягу до испарения растворителей, затем обрабатывают одним из проявляющих реагентов и помещают под ультрафиолетовую лампу на 5 мин. Зона локализации препарата на пластинках "Силуфол", "Пластинках для ВЭТСХ" и "Кизельгель 60F-254" проявляется в виде серо-бурых пятен с величиной Rf 0,35, 0,85 и 0,43, соответственно.
<a id="p100145"></a>Для определения кломазона методом ТСХ можно использовать пластинки "Алюграм" и "Полиграм" (производства ФРГ). Величина Rf кломазона на этих пластинках составляет 0,37 и 0,38, соответственно.


### <a id="p100146"></a>2.8. Обработка результатов анализа



##### <a id="p100147"></a>2.8.1 Метод ВЭЖХ и ГЖХ

<a id="p100148"></a>Содержание кломазона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                                h   x V
                                 пр
<a id="p100149"></a>                        X = --------------,
                            (K  x V   x P)
                              г    ал

<a id="p100150"></a>где:
<a id="p100151"></a>X - содержание кломазона в пробе, мг/куб. дм;
<a id="p100152"></a>V - конечный объем пробы, подготовленной для хроматографирования, мл;
<a id="p100153"></a>    V   - объем аликвоты пробы, введенной в хроматограф, мкл;
     ал
    P - объем пробы воды, взятой для анализа, куб. дм;
    K   -  коэффициент  градуировки прибора, рассчитанный из серии
     г
измерений стандартного раствора препарата.

##### <a id="p100154"></a>2.8.2 Метод ТСХ

<a id="p100155"></a>Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен анализируемой пробы и серии стандартов.
<a id="p100156"></a>Содержание кломазона в анализируемой пробе воды X, мг/куб. дм,

                                  C
<a id="p100157"></a>                              X = -,
                                  P

<a id="p100158"></a>C - содержание кломазона в пробе (мг), соответствующее интенсивности окраски пятна;
<a id="p100159"></a>P - объем пробы воды, взятой для анализа (куб. дм).


## 3. <a id="p100160"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100161"></a>Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.


## 4. <a id="p100162"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100163"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95.](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95) ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".


## 5. <a id="p100164"></a>Разработчики


<a id="p100165"></a>Юдина Т.В., Федорова Н.Е. (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана).
<a id="p100166"></a>Давидюк Е.И. (УкрНИИГИНТОКС, г. Киев); Кисенко М.А., Демченко В.Ф. (Институт медицины труда АН и АМН Украины, г. Киев).



<a id="p100167"></a>

---