---
title: "\"МУК 4.1.1234-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фенамидона и его метаболитов (RPA 405862 и RPA 408056) в воде, почве, картофеле, томатах, луке и огурцах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1234-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1234-03"
---

## "МУК 4.1.1234-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фенамидона и его метаболитов (RPA 405862 и RPA 408056) в воде, почве, картофеле, томатах, луке и огурцах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1234-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фенамидона и его метаболитов (RPA 405862 и RPA 408056) в воде, почве, картофеле, томатах, луке и огурцах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Минздравом России 16.03.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

16 марта 2003 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЕНАМИДОНА**
**И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (RPA 405862 И RPA 408056) В ВОДЕ,**
**ПОЧВЕ, КАРТОФЕЛЕ, ТОМАТАХ, ЛУКЕ И ОГУРЦАХ МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1234-03**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 июля 2003 года

1. <a id="p100006"></a>Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. А.В. Довгилевич); при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.
2. <a id="p100007"></a>Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100010"></a>Вводная часть


<a id="p100011"></a>Фирма-производитель: Байер КропСайенс (Германия).
<a id="p100012"></a>Торговое название: Сектин (Секур).
<a id="p100013"></a>Действующее вещество: фенамидон (RPA 407213).
<a id="p100014"></a>(S)-5-метил-2-метилтио-5-фенил-3-фениламино-3,5-дигидроимидазол-4-он (ИЮПАК).
<a id="p100015"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100016"></a>    Эмпирическая формула: C  H  N OS. М.м.: 311.
                           17 17 3
<a id="p100017"></a>    Белый хлопьевидный порошок без запаха.
<a id="p100018"></a>    Температура плавления 137 °С.
                                      -7
<a id="p100019"></a>    Давление паров при 25 °С: 3,4 х 10   Па.
<a id="p100020"></a>    Коэффициент распределения н-октанол/вода: К   log P = 2,8.
                                               ow
<a id="p100021"></a>    Растворимость  (г/л)  при  20  °С: ацетон - 250, дихлорметан -
330, ацетонитрил - 86, толуол - 40, метанол - 43, вода - 0,008.
<a id="p100022"></a>    Стабильность  к  гидролизу: DT   = более 1 месяца при рН 5 - 7
                                  50
и 22 дня при рН 9.
<a id="p100023"></a>    Краткая  токсикологическая  характеристика. Острая пероральная
токсичность (LD  ) для крыс - более 5000  мг/кг; острая дермальная
               50
токсичность   (LD  )  для   крыс   -   более   2000 мг/кг;  острая
                 50
ингаляционная   токсичность  (LC  )  для  крыс -  2,1  мг/куб.  дм
                                50
воздуха.  Фенамидон  не  оказывает   раздражающего   действия   на
слизистые оболочки  глаз и кожу кроликов. LC   для рыб - 0,74 мг/л
                                            50
(96 ч).
<a id="p100024"></a>Препарат малотоксичен для пчел, птиц, зеленых водорослей, дафний, дождевых червей и почвенных микроорганизмов.
<a id="p100025"></a>Гигиенические нормативы:
<a id="p100026"></a>ПДК (с учетом метаболита) в воде водоемов - 0,003 мг/куб. дм;
<a id="p100027"></a>ОДК (с учетом метаболита) в почве - 0,09 мг/кг;
<a id="p100028"></a>МДУ (с учетом метаболита) в томатах - 0,5 мг/кг; картофеле -0,03 мг/кг.
<a id="p100029"></a>Основной метаболит фенамидона в воде и растениях: RPA 405862.
<a id="p100030"></a>5-метил-5-фенил-3-фениламиноимидазолидин-2,4-дион (ИЮПАК).
<a id="p100031"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100032"></a>    Эмпирическая формула: C  H  N O . М.м.: 281.
                           16 15 3 2
<a id="p100033"></a>Белый порошок без запаха.
<a id="p100034"></a>Другие физико-химические и токсикологические характеристики метаболита RPA 405862 отсутствуют.
<a id="p100035"></a>Основной метаболит фенамидона в почве: RPA 408056.
<a id="p100036"></a>5-метил-2-метилтио-5-фенил-3,5-дигидроимидазол-4-он (ИЮПАК).
<a id="p100037"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100038"></a>    Эмпирическая формула: C  H  N OS. М.м.: 220.
                           11 12 2
<a id="p100039"></a>Белый порошок без запаха.
<a id="p100040"></a>Другие физико-химические и токсикологические характеристики метаболита RPA 408056 отсутствуют.
<a id="p100041"></a>Область применения препарата. Фенамидон - специфический системный фунгицид широкого спектра действия, обладает защитными и искореняющими свойствами. Высокоэффективен против возбудителей фитофтороза картофеля и томатов, ложной мучнистой росы подсолнечника, огурцов и лука, мильдью винограда. Обычно применяется в смеси с препаратами контактного действия. В настоящее время в России и странах СНГ проходит регистрационные испытания смесевой препарат Сектин, ВДГ (100 г фенамидона + 500 г манкоцеба в 1 кг препарата) при норме расхода фунгицида 1,25 кг/га и 4-кратной обработке за сезон. Механизм действия фенамидона связан с подавлением транспорта электронов и образования АТФ в митохондриях патогенов.
<a id="p100042"></a>Фенамидон весьма лабильное соединение и достаточно быстро метаболизируется в растениях и объектах окружающей среды. В воде и растениях фенамидон разрушается с образованием 5-метил-5-фенил-3-фениламиноимидазолидин-2,4-диона (RPA 405862), а в почве он метаболизируется до 5-метил-2-метилтио-5-фенил-3,5-дигидроимидазол-4-она (RPA 408056).


## 2. <a id="p100043"></a>Методика определения остаточных количеств Фенамидона и его метаболитов (RPA 405862 и RPA 408056) в воде, почве, картофеле, томатах, луке и огурцах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии



### <a id="p100044"></a>2.1. Основные положения



#### <a id="p100045"></a>2.1.1. Принцип методики


<a id="p100046"></a>Методика основана на определении фенамидона и его метаболитов (RPA 405862 и RPA 408056) с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения фунгицида и RPA 405862 из воды соответственно гексаном и хлористым метиленом, фенамидона и метаболитов из почвы и растительного материала водным ацетоном, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с оксидом алюминия и концентрирующем патроне Диапак-диол.
<a id="p100047"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.


#### <a id="p100048"></a>2.1.2. Избирательность метода


<a id="p100049"></a>В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания картофеля, томатов, огурцов и лука.


#### <a id="p100050"></a>2.1.3. Метрологическая характеристика метода


<a id="p100051"></a>Таблица

<a id="p100052"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА**


<table>
<colgroup><col width="17%"><col width="16%"><col width="17%"><col width="12%"><col width="15%"><col width="10%"><col width="12%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="6">Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>предел обнаружения, мг/куб. дм мг/кг</td><td>диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм мг/кг</td><td>среднее значение определения, %</td><td>стандартное отклонение, S, %</td><td>относительное отклонение, %</td><td>доверительный интервал среднего, %</td></tr>
<tr><td>1</td><td>2</td><td>3</td><td>4</td><td>5</td><td>6</td><td>7</td></tr>
<tr><td colspan="7">Фенамидон</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,0005</td><td>0,0005 - 0,005</td><td>86,8</td><td>4,3</td><td>1,9</td><td>+/- 4,0</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>83,9</td><td>5,7</td><td>2,5</td><td>+/- 5,3</td></tr>
<tr><td>Картофель</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>88,7</td><td>4,1</td><td>1,8</td><td>+/- 3,8</td></tr>
<tr><td>Томаты</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>90,2</td><td>4,3</td><td>1,9</td><td>+/- 4,1</td></tr>
<tr><td>Лук</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>90,6</td><td>2,7</td><td>1,2</td><td>+/- 2,8</td></tr>
<tr><td>Огурцы</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>86,5</td><td>5,6</td><td>2,5</td><td>+/- 5,3</td></tr>
<tr><td colspan="7">Метаболит RPA 405862</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,0005</td><td>0,0005 - 0,005</td><td>85,8</td><td>5,4</td><td>2,4</td><td>+/- 5,0</td></tr>
<tr><td>Картофель</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>89,2</td><td>4,5</td><td>2,0</td><td>+/- 4,2</td></tr>
<tr><td>Томаты</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>89,1</td><td>5,9</td><td>2,7</td><td>+/- 5,5</td></tr>
<tr><td>Лук</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>85,6</td><td>2,9</td><td>1,3</td><td>+/- 2,9</td></tr>
<tr><td>Огурцы</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>91,1</td><td>4,0</td><td>1,8</td><td>+/- 4,1</td></tr>
<tr><td colspan="7">Метаболит RPA 408056</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,02</td><td>0,02 - 0,2</td><td>78,9</td><td>5,5</td><td>2,4</td><td>+/- 5,1</td></tr>
</table>



### <a id="p100070"></a>2.2. Реактивы, растворы и материалы


Фенамидон с содержанием д. в. 99,5%
(Авентис КропСайенс, Германия)
Метаболит фенамидона (RPA 405862) с
содержанием д. в. 99,3% (Авентис КропСайенс,
Германия)
Метаболит фенамидона (RPA 408056) с
содержанием д. в. 99,6% (Авентис КропСайенс,
Германия)
Ацетон, ч.д.а. ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил                                      ТУ 6-09-3534-82
Вода дистиллированная или деионизованная         ГОСТ 7602-72
н-Гексан, х.ч.                                   ТУ 6-09-3375-78
Калия перманганат ГОСТ 20490-75
Калий углекислый, х.ч. [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76)
Метилен хлористый [ГОСТ 12794-80](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)
Натрия сульфат безводный, х.ч. [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
Натрия гидроксид, х.ч. ГОСТ 4328-77
Фосфора пентоксид, ч.                            МРТУ 6-09-5759-69
Подвижная фаза N 1 для ВЭЖХ: смесь
ацетонитрил-вода (63:37, по объему)
Подвижная фаза N 2 для ВЭЖХ: смесь
ацетонитрил-вода (55:45, по объему)
Подвижная фаза N 3 для ВЭЖХ: смесь
ацетонитрил-вода (30:70, по объему)
Алюминия оксид для хроматографии, II степени
активности по Брокману                           МРТУ 6-09-5296-68
Стекловата
Фильтры бумажные "синяя лента"                   ТУ 6-09-1678-77


### <a id="p100071"></a>2.3. Приборы, аппаратура, посуда


Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым
детектором фирмы Altex (США) или аналогичный
Самописец регистрирующий фирмы Kipp@Zonen
BD 41 или аналогичный
Колонка хроматографическая длиной 15 см и
внутренним диаметром 4 мм, заполненная
Kromasil 100A-C18, зернением 5 мкм
(АО Био-ХимМак; Москва, Воробьевы горы, МГУ)
Шприц для ввода образцов в жидкостный
хроматограф емкостью 100 мкл
Аппарат для встряхивания АВУ                       ТУ 64-11081-83
Весы аналитические типа ВЛР-200                    ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос                                 ГОСТ 10696-75
Гомогенизатор                                      МРТУ 42-1505-63
Прибор для перегонки при атмосферном давлении
Ротационный испаритель, тип ИР-1М                  ТУ 25-11-917-76
Сито с диаметром отверстий 1 мм
Сушильный шкаф
Воронка Бюхнера                                    ГОСТ 9147-73
Воронки для фильтрования стеклянные                ГОСТ 8613-75
Воронки делительные вместимостью 100 и 500 мл ГОСТ 25336-82
Колба Бунзена                                      ГОСТ 5614-75
Колбы конические с притертыми пробками
вместимостью 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82
Колбы мерные вместимостью 50, 100 и 1000 мл        ГОСТ 1770-74
Колбы грушевидные вместимостью 50, 100 мл ГОСТ 25336-82
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250
и 1000 мл                                          ГОСТ 1770-74
Пробирки градуированные с притертыми пробками
вместимостью 5 и 10 мл                             ГОСТ 10515-75
Пипетки мерные вместимостью 1, 2 и 5 мл [ГОСТ 20292-74Е](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
Хроматографическая колонка стеклянная
25 x 1,8 см


### <a id="p100072"></a>2.4. Отбор проб


<a id="p100073"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
<a id="p100074"></a>Отобранные пробы почвы, клубней картофеля, плодов томата и огурца и лука хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более суток. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике при температуре не выше 4 °С в течение 3 месяцев; растительные образцы хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре -18 °С - в течение месяца.
<a id="p100075"></a>Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, а растительный материал измельчают.


### <a id="p100076"></a>2.5. Подготовка к определению



#### <a id="p100077"></a>2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей


<a id="p100078"></a>Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
<a id="p100079"></a>    Ацетон  перегоняют  над  перманганатом калия и поташом (на 1 л
ацетона 10 г KMnO  и 2 г К CO ).
                 4        2  3
<a id="p100080"></a>Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
<a id="p100081"></a>Оксид алюминия V степени активности по Брокману получают добавлением 12% воды к навеске оксида алюминия II степени активности.


#### <a id="p100082"></a>2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ


<a id="p100083"></a>При подготовке подвижной фазы N 1 для анализа фенамидона отмеряют 630 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу емкостью 1000 мл, добавляют 370 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
<a id="p100084"></a>При подготовке подвижной фазы N 2 для анализа метаболита RPA 405862 отмеряют 550 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу емкостью 1000 мл, добавляют 450 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
<a id="p100085"></a>При подготовке подвижной фазы N 3 для анализа метаболита RPA 408056 отмеряют 300 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу емкостью 1000 мл, добавляют 700 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.


#### <a id="p100086"></a>2.5.3. Кондиционирование колонки


<a id="p100087"></a>Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (63:37, по объему для фенамидона; 55:45, по объему для RPA 405862; 30:70, по объему для RPA 408056) в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (5 - 15 мин.).


#### <a id="p100088"></a>2.5.4. Приготовление стандартных растворов


<a id="p100089"></a>Основной стандартный раствор фенамидона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества, содержащего 99,5% д. в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
<a id="p100090"></a>Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,04; 0,08; 0,2 и 0,4 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора фенамидона соответствующим последовательным разведением подвижной фазой N 1 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082). Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более 7 дней.
<a id="p100091"></a>Основной стандартный раствор метаболита RPA 405862 с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества, содержащего 99,3% д. в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
<a id="p100092"></a>Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,04; 0,08; 0,2 и 0,4 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора метаболита RPA 405862 соответствующим последовательным разведением подвижной фазой N 2 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082). Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более 7 дней.
<a id="p100093"></a>Основной стандартный раствор метаболита RPA 408056 с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества, содержащего 99,6% д. в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
<a id="p100094"></a>Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,04; 0,08; 0,2 и 0,4 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора метаболита RPA 408056 соответствующим последовательным разведением подвижной фазой N 3 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082). Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более 7 дней.


#### <a id="p100095"></a>2.5.5. Построение калибровочного графика


<a id="p100096"></a>Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора фенамидона или метаболитов с концентрациями 0,04; 0,08; 0,2 и 0,4 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации вещества в растворе в мкг/мл.


#### <a id="p100097"></a>2.5.6. Подготовка колонки с оксидом алюминия и концентрирующего патрона Диапак-диол для очистки экстракта


<a id="p100098"></a>В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают около 10 мл гексана. Затем в колонку вносят суспензию 10 г оксида алюминия V степени активности по Брокману в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
<a id="p100099"></a>Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают сначала с помощью медицинского шприца 10 мл хлористого метилена, а затем 5 мл смеси гексан-хлористый метилен (9:1) при анализе фенамидона или 5 мл смеси гексан-хлористый метилен (6:4) при анализе RPA 405862 со скоростью 5 мл/мин.


#### <a id="p100100"></a>2.5.7. Проверка хроматографического поведения фенамидона на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100101"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора фенамидона с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл гексана и раствор наносят на хроматографическую колонку [(п. 2.5.6)](#p100097). Промывают колонку 50 мл гексана и затем 60 мл смеси гексан-хлористый метилен (9:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082) и анализируют на содержание фенамидона по [п. 2.7.1](#p100122).
<a id="p100102"></a>Фракции, содержащие фенамидон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ и вновь анализируют по [п. 2.7.1](#p100122). Рассчитывают содержание фенамидона в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
<a id="p100103"></a>Аналогичным образом проводится проверка хроматографического поведения метаболитов RPA 405862 и RPA 408056 на колонке с оксидом алюминия.
<a id="p100104"></a>*Примечание.* Профиль вымывания фенамидона и метаболитов может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.


### <a id="p100105"></a>2.6. Описание определения



#### <a id="p100106"></a>2.6.1. Экстракция фенамидона и его метаболитов


<a id="p100107"></a>2.6.1.1. Вода. 200 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 500 мл и трижды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл при энергичном встряхивании в течение 1 мин. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082) и анализируют на содержание фенамидона по [п. 2.7.1](#p100122).
<a id="p100108"></a>Водную фазу, оставшуюся после экстракции гексаном, трижды экстрагируют хлористым метиленом (30 + 20 + 20 мл) при встряхивании. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082) и анализируют на содержание метаболита RPA 405862 по [п. 2.7.2](#p100138).
<a id="p100109"></a>2.6.1.2. Почва. Навеску (50 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу на 500 мл, приливают 40 мл бидистиллированной воды и спустя 20 мин. 160 мл ацетона и суспензию перемешивают в течение 30 мин. на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Почву повторно экстрагируют 200 мл 80%-ного водного ацетона в течение 30 мин. и суспензию фильтруют. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 35 мл), эквивалентную 5 г почвы. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [п. 2.6.2](#p100111).
<a id="p100110"></a>2.6.1.3. Клубни картофеля, плоды томата и огурца, лук. К навеске (25 г) измельченного растительного материала приливают 100 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему) и гомогенизируют 5 мин. при 10000 об./мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 250 мл. Остаток на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 30 мл), эквивалентную соответственно 5 г ткани. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [п. 2.6.2](#p100111).


#### <a id="p100111"></a>2.6.2. Очистка экстракта


<a id="p100112"></a>Аликвоту почвенного (из [п. 2.6.1.2](#p100109)) или растительного (из [п. 2.6.1.3](#p100110)) экстракта упаривают до водной фазы на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 20 мл бидистиллированной воды и 30 мл гексана и воронку встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев отделяют гексановую фракцию, а водную фазу экстрагируют гексаном еще дважды (20 + 20 мл). Объединенный гексановый экстракт, содержащий фенамидон, пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, и затем упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [п. 2.6.3](#p100114).
<a id="p100113"></a>Водную фазу, оставшуюся после экстракции гексаном, трижды экстрагируют хлористым метиленом (30 + 20 + 20 мл) при встряхивании. Объединенный дихлорметановый экстракт, содержащий метаболиты фенамидона, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [п. 2.6.3](#p100114).


#### <a id="p100114"></a>2.6.3. Очистка на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100115"></a>Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. 2.6.2](#p100111) гексановых экстрактов растительного материала или почвы, содержащих фенамидон, количественно переносят тремя 1-мл порциями гексана в кондиционированную хроматографическую колонку [(п. 2.5.6)](#p100097). Промывают колонку 50 мл гексана, которые отбрасывают. Фенамидон элюируют 50 мл смеси гексан-хлористый метилен (9:1, по объему), отбрасывая первые 15 мл элюата и собирая последующие 35 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухие остатки экстрактов клубней картофеля и плодов томата растворяют в 2,5 мл, а экстракта почвы - в 1,25 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082) и анализируют на содержание фенамидона по [п. 2.7.1](#p100122). Сухие остатки экстрактов плодов огурца и лука дополнительно очищают на концентрирующем патроне Диапак-диол по [п. 2.6.4](#p100118).
<a id="p100116"></a>Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. 2.6.2](#p100111) дихлорметановых экстрактов растительного материала, содержащих метаболит RPA 405862, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-хлористый метилен (6:4, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку [(п. 2.5.6)](#p100097). Промывают колонку 50 мл смеси гексан-хлористый метилен (6:4, по объему), которые отбрасывают. Метаболит элюируют 30 мл смеси гексан-хлористый метилен (1:1, по объему). Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухие остатки экстрактов клубней картофеля и плодов томата растворяют в 2,5 мл подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082) и анализируют на содержание метаболита RPA 405862 по [п. 2.7.2](#p100138). Сухие остатки экстрактов плодов огурца и лука дополнительно очищают на концентрирующем патроне Диапак-диол по [п. 2.6.4](#p100118).
<a id="p100117"></a>Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенного по [п. 2.6.2](#p100111) дихлорметанового экстракта почвы, содержащего метаболит RPA 408056, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-хлористый метилен (7:3, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку [(п. 2.5.6)](#p100097). Колонку промывают 50 мл смеси гексан-хлористый метилен (6:4, по объему), которые отбрасывают. Метаболит элюируют 30 мл смеси гексан-хлористый метилен (1:1, по объему), отбрасывая первые 5 мл элюата и собирая последующие 25 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы N 3 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082) и анализируют на содержание метаболита RPA 408056 по [п. 2.7.3](#p100149).


#### <a id="p100118"></a>2.6.4. Очистка на концентрирующем патроне Диапак-диол


<a id="p100119"></a>Сухой остаток экстракта плодов огурца или лука (из [п. 2.6.3](#p100114)), содержащий фенамидон, количественно переносят двумя 1-мл порциями смеси гексан-хлористый метилен (9:1, по объему) в подготовленный концентрирующий патрон Диапак-диол [(п. 2.5.6)](#p100097). Патрон промывают 10 мл смеси гексан-хлористый метилен (1:1, по объему) со скоростью 5 мл/мин., которые отбрасывают. Фенамидон элюируют 12 мл смеси гексан-хлористый метилен (1:9, по объему). Элюат упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082) и анализируют на содержание фенамидона по [п. 2.7.1](#p100122).
<a id="p100120"></a>Сухой остаток экстракта плодов огурца или лука (из [п. 2.6.3](#p100114)), содержащий метаболит RPA 405862, количественно переносят двумя 1-мл порциями смеси гексан-хлористый метилен (6:4, по объему) в подготовленный концентрирующий патрон Диапак-диол [(п. 2.5.6)](#p100097). Патрон промывают 10 мл смеси гексан-хлористый метилен (4:6, по объему) со скоростью 5 мл/мин., которые отбрасывают. Метаболит RPA 405862 элюируют 8 мл смеси гексан-хлористый метилен (3:7, по объему) со скоростью 5 мл/мин. Элюат упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100082) и анализируют на содержание метаболита по [п. 2.7.2](#p100138).


### <a id="p100121"></a>2.7. Условия хроматографирования



#### <a id="p100122"></a>2.7.1. Фенамидон


<a id="p100123"></a>Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США) или аналогичный.
<a id="p100124"></a>Колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Kromasil 100A-С18, зернением 5 мкм.
<a id="p100125"></a>Температура колонки: комнатная.
<a id="p100126"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (63:37, по объему).
<a id="p100127"></a>Скорость потока элюента: 0,6 мл/мин.
<a id="p100128"></a>Рабочая длина волны: 240 нм.
<a id="p100129"></a>Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
<a id="p100130"></a>Объем вводимой пробы: 50 мкл.
<a id="p100131"></a>Скорость протяжки ленты самописца: 15 см/ч.
<a id="p100132"></a>Время удерживания фенамидона: около 6 мин.
<a id="p100133"></a>Линейный диапазон детектирования: 2 - 20 нг.
<a id="p100134"></a>Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С16 Т.
<a id="p100135"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (70:30, по объему).

<div align="center">

<a id="p100136"></a>Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин.

</div>

<a id="p100137"></a>Время удерживания фенамидона: 4 мин.


#### <a id="p100138"></a>2.7.2. Метаболит RPA 405862


<a id="p100139"></a>Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США).
<a id="p100140"></a>Колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Kromasil 100A-C18, зернением 5 мкм.
<a id="p100141"></a>Температура колонки: комнатная.
<a id="p100142"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (55:45, по объему).
<a id="p100143"></a>Скорость потока элюента: 0,6 мл/мин.
<a id="p100144"></a>Рабочая длина волны: 235 нм.
<a id="p100145"></a>Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
<a id="p100146"></a>Объем вводимой пробы: 50 мкл.

<div align="center">

<a id="p100147"></a>Время выхода метаболита: около 4 мин.

</div>

<a id="p100148"></a>Линейный диапазон детектирования: 2 - 20 нг.


#### <a id="p100149"></a>2.7.3. Метаболит RPA 408056


<a id="p100150"></a>Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США).
<a id="p100151"></a>Колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Kromasil 100A-C18, зернением 5 мкм.
<a id="p100152"></a>Температура колонки: комнатная.
<a id="p100153"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (30:70, по объему).
<a id="p100154"></a>Скорость потока элюента: 0,6 мл/мин.
<a id="p100155"></a>Рабочая длина волны: 240 нм.
<a id="p100156"></a>Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
<a id="p100157"></a>Объем вводимой пробы: 50 мкл.
<a id="p100158"></a>Время выхода метаболита: около 5,2 мин.

<div align="center">

<a id="p100159"></a>Линейный диапазон детектирования: 2 - 20 нг.

</div>

<a id="p100160"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,4 мкг/мл, разбавляют соответствующей подвижной фазой для ВЭЖХ.


### <a id="p100161"></a>2.8. Обработка результатов анализа


<a id="p100162"></a>Содержание фенамидона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                             H  x A x V
                              1
<a id="p100163"></a>                         X = ----------,
                               H  x m
                                0

<a id="p100164"></a>    где:
    Х - содержание фенамидона в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
    Н  - высота пика образца, мм;
     1
    Н  - высота пика стандарта, мм;
     0
<a id="p100165"></a>А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
<a id="p100166"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
<a id="p100167"></a>m - масса или объем анализируемой части образца, г или мл (для воды - 200 мл; для почвы и растительного материала - 5 г).
<a id="p100168"></a>Содержание метаболитов фенамидона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                             H  x A x V
                              1
<a id="p100169"></a>                         X = ----------,
                               H  x m
                                0

<a id="p100170"></a>    где:
    Х -  содержание  метаболита  фенамидона  в  пробе,  мг/кг  или
мг/куб. дм;
    Н  - высота пика образца, мм;
     1
    Н  - высота пика стандарта, мм;
     0
<a id="p100171"></a>А - концентрация стандартного раствора метаболита, мкг/мл;
<a id="p100172"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

<div align="center">

<a id="p100173"></a>m - масса или объем анализируемой части образца, г или мл.

</div>

<a id="p100174"></a>При расчете содержания метаболитов RPA 405862 и RPA 408056 в эквивалентах фенамидона полученное значение X умножают соответственно на 1,11 и 1,41.


## 3. <a id="p100175"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100176"></a>Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.


## 4. <a id="p100177"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100178"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95). ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.


## 5. <a id="p100179"></a>Разработчики


<a id="p100180"></a>Дубовая Л.В.; Макеев А.М., к. биол. н.; Микитюк О.Д., к. биол. н.; Назарова Т.А., к. биол. н.

<div align="center">

<a id="p100181"></a>ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

</div>




<a id="p100182"></a>

---