--- title: "\"МУК 4.1.1230-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тралкоксидима в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.1230-03" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1230-03" --- ## "МУК 4.1.1230-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тралкоксидима в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.1230-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тралкоксидима в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Минздравом России 16.03.2003) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2003 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
16 марта 2003 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРАЛКОКСИДИМА** **В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР** **МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1230-03**
Дата введения
1 июля 2003 года 1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. А.В. Довгилевич) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик контроля указаны в конце каждой из них. 2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России. 3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г. 4. Введены впервые. ## 1. Вводная часть Фирма производитель: Зенека (Великобритания). Торговое название: Грасп 80% ВДГ. Действующее вещество: тралкоксидим [2-1(этоксиимино)пропил]-3-гидрокси-5-мезитилциклогекс-2-енон (номенклатура ИЮПАК). Структурная формула: (не приводится). Эмпирическая формула: C H NO . 20 27 3 Молекулярная масса: 329. Белый порошок без запаха. Температура плавления: 106 °С. -7 Давление паров (20 °С): 4 х 10 Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода (20 °С): 2,1. Растворимость в воде (22 °С): 6 мг/л (рН 5,2) 7 мг/л (рН 6,5) 8850 мг/л (рН 9,0). Растворимость в органических растворителях (г/л) (24 °С): метанол 25 ацетон 89 хлористый метилен > 500 толуол 213 гексан 18. Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность для крыс LD = 934 - 1324 мг/кг; острая дермальная 50 токсичность для крыс LD > 2000 мг/кг; острая ингаляционная 50 токсичность для крыс LC = 3,5 мг/л воздуха. 50 В России установлены следующие гигиенические нормативы: ПДК в воде - 0,008 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,06 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,02 мг/кг. Область применения. Грасп 80% в.д.г. - послевсходовый селективный системный гербицид для борьбы с сорняками в посевах пшеницы и ячменя. ## 2. Методика определения остаточных количеств тралкоксидима в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип методики Методика основана на определении тралкоксидима методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции вещества из воды хлороформом, из почвы и растительного материала ацетонитрилом, очистки экстрактов перераспределением в системе вода - хлороформ и на концентрирующих патронах-колонках Диапак-диол и Диапак-амин. Идентификация тралкоксидима проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Избирательность метода Методика специфична в присутствии пестицидов, применяемых на зерновых культурах. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1. Таблица 1
**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ И СТАТИСТИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ**
(Р = 0,95, N = 20) | Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/л, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/л, мг/кг | Среднее значение определения, - % | Стандартное отклонение, S | Доверительный интервал среднего результата, +/- % | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Вода | 0,005 | 0,005 - 0,05 | 83,2 | 4,4 | 2,1 | | Почва | 0,01 | 0,01 - 0,1 | 81,0 | 7,8 | 3,7 | | Зерно | 0,01 | 0,01 - 0,1 | 81,0 | 7,0 | 3,3 | | Солома | 0,05 | 0,05 - 0,5 | 84,7 | 8,1 | 3,8 | ### 2.2. Реактивы, растворы, материалы Тралкоксидим, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,4% (Зенека) Ацетон, ос.ч., 9 - 5 ТУ 2633-00-4-11291058-94 Ацетонитрил, ос.ч., сорт 2, Криохром, Санкт-Петербург Вода бидистиллированная [<*>](#p100047) или деионизированная ГОСТ 7602-72 Гексан, ч. ТУ 6-09-3375-78 Калия карбонат, х.ч. [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76) Калия перманганат ГОСТ 20490-75 Кальция хлорид, х.ч. ГОСТ 4161-77 Концентрирующие патроны Диапак-диол, АО БиоХимМак (117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ) ТУ 4215-002-05451931-94 Концентрирующие патроны Диапак-амин, АО БиоХимМак (117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ) ТУ 4215-002-05451931-94 Натрия сульфат безводный, х.ч. [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Натрия тетраборат, х.ч. [ГОСТ 4199-76](https://bukva.ai/docs/gost-4199-76) Фосфора пентоксид, ч. МРТУ 6-09-5759-69 Хлороформ медицинский ГОСТ 20015-74 Эфир диэтиловый ГОСТ 6265-74
Фильтры бумажные, синяя лента ТУ 6-09-1678
--- <*> Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с перманганатом калия, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют. ### 2.3. Приборы, аппаратура, посуда Высокоэффективный жидкостный хроматограф фирмы Beckman (насос 114 м, ультрафиолетовый детектор 166) или аналогичный Самописец регистрирующий фирмы Kipp@Zonen ВD41 или аналогичный Хроматографическая колонка фирмы Merck LiChrosorb NH , стальная 2 250 х 4,6 мм, 10 мкм или колонка АО БиоХимМак (117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ) Диасорб-130 Амин Шприц хроматографический фирмы Hamilton на 100 мкл или аналогичный Центрифуга Beckman, модель J2-21 или аналогичная Весы аналитические типа ВЛР-200 ГОСТ 19401-74 Водоструйный насос ГОСТ 10696-75 Встряхиватель механический ТУ 64-1-1081-73 Вакуумный роторный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-76 или аналогичный Воронка Бюхнера ГОСТ 0147-73 Воронки делительные емкостью 100, 500 мл ГОСТ 25336-82 Воронки для фильтрования стеклянные ГОСТ 8613-75 Колба Бунзена ГОСТ 5614-75 Колбы круглодонные со шлифом на 10, 100 и 250 мл ГОСТ 9737-70 Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 мл ГОСТ 25336-82 Колбы мерные на 100 мл ГОСТ 1770-74 Пипетки мерные на 1, 2, 5 мл [ГОСТ 20292-74Е](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Цилиндры мерные на 25, 50, 100, 250 мл ГОСТ 1770-74 ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.1979). Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре -18 °С - в течение месяца. Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице, почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. ### 2.5. Подготовка к определению ##### 2.5.1 Подготовка и очистка растворителей Гексан сушат над хлоридом кальция, затем перегоняют над пен-токсидом фосфора. Диэтиловый эфир сушат двумя порциями хлорида кальция, периодически встряхивая, затем перегоняют над хлоридом кальция. ##### 2.5.2 Приготовление стандартных растворов Взвешивают 100 мг тралкоксидима и растворяют его в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл, получая стандартный раствор N 1 с концентрацией тралкоксидима 1 мг/мл. Берут 1 мл этого раствора в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки ацетонитрилом, получая стандартный раствор N 2. Стандартные растворы N 1 и 2 можно хранить в холодильнике в течение 3 месяцев. Рабочие стандартные растворы тралкоксидима концентрацией 2,5; 1,25; 0,5; 0,25; 0,1; 0,05 мкг/мл готовят из стандартного раствора N 2 методом последовательного разведения ацетонитрилом. Их используют для построения калибровочного графика и фортификации образцов (внесения в образцы для оценки полноты извлечения тралкоксидима). Эти стандартные растворы можно использовать в течение 7 дней при хранении в холодильнике. ##### 2.5.3 Приготовление подвижной фазы Для ВЭЖХ анализа тралкоксидима используют подвижную фазу, содержащую 80% ацетонитрила и 20% воды (по объему). Перед анализом фазу дегазируют, пропуская через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин. в течение 5 мин. и помещая сосуд с фазой в ультразвуковую ванну на 1 мин. ##### 2.5.4 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика вводят в инжектор хроматографа последовательно 5 раз по 100 мкл каждого рабочего стандартного раствора, измеряют высоты или площади пиков, рассчитывают среднее значение высоты или их площади для каждой концентрации и строят график зависимости высоты или площади пика от концентрации тралкоксидима. ##### 2.5.5 Кондиционирование патронов-колонок Диапак-диол и Диапак-амин Патрон устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл, который используют как емкость для элюента. Патрон промывают два раза 3 мл гексана. Промывку проводят под вакуумом непосредственно перед очисткой экстрактов образцов со скоростью не более 2 мл/мин., не допуская высыхания поверхности патрона. ##### 2.5.6 Проверка хроматографического поведения тралкоксидима на концентрирующих патронах-колонках Диапак 2.5.6.1. Диапак-диол. Приливают в круглодонную колбу на 10 мл 1 мл стандартного раствора тралкоксидима в гексане концентрацией 1 мкг/мл, добавляют 3 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (90:10) и наносят на кондиционированный патрон. Обмывают колбу 6 мл этой же смеси и также наносят на патрон. Элюирование проводят под вакуумом со скоростью не более 1 мл/мин. Элюат собирают в круглодонную испарительную колбу, упаривают его, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по [п. 2.7,](#p100077) которое должно составлять около 100% от внесенного количества. 2.5.6.2. Диапак-амин. Наносят на кондиционированный патрон 1 мл стандартного раствора тралкоксидима в гексане концентрацией 1 мкг/мл и элюируют его 10 мл ацетона со скоростью 1 мл/мин. Элюат собирают в испарительную колбу, упаривают, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по [п. 2.7,](#p100077) которое должно составлять около 100% от внесенного количества. ### 2.6. Описание методики определения ##### 2.6.1 Вода Образец предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл переносят в делительную воронку на 500 мл, добавляют 30 мл 0,01 М раствора тетрабората натрия и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным сернокислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до объема примерно 1 мл и остатки раствора высушивают током азота. Сухой остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по [п. 2.7.](#p100077) ##### 2.6.2 Почва 2.6.2.1. Экстракция и предварительная очистка. В коническую плоскодонную колбу на 100 мл помещают навеску почвы 20 г, приливают 40 мл ацетонитрила и встряхивают в течение 45 мин. Экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр "синяя лента". К остатку почвы в колбе добавляют еще 40 мл ацетонитрила и процедуру экстракции повторяют. Почву на фильтре промывают 20 мл ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту 50 мл, эквивалентную 10 г почвы, добавляют 15 мл деионизированной воды и раствор упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до водного остатка. Водный остаток количественно переносят в делительную воронку на 100 мл, добавляют 20 мл хлороформа и встряхивают воронку в течение 1 мин. Нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным сернокислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Процедуру экстракции хлороформом повторяют еще два раза. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С примерно до 1 мл и его остатки высушивают током азота. Дальнейшую очистку проводят по п. 2.6.2.2. 2.6.2.2. Очистка экстрактов на патронах-колонках Диапак. Сухой остаток растворяют в 4 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (90:10) и наносят на кондиционированный патрон Диапак-диол. Затем 6 мл этой же смеси обмывают колбу и также наносят на патрон. Элюат собирают, наносят на кондиционированный патрон Диапак-амин и после пропускания через патрон отбрасывают. Тралкоксидим элюируют из патрона Диапак-амин 10 мл ацетона в круглодонную испарительную колбу. Ацетоновый раствор упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до объема примерно 1 мл, который высушивают током азота. Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют по [п. 2.7.](#p100077) Нанесение растворов на патроны и элюирование проводят под вакуумом со скоростью не более 1 мл/мин. ##### 2.6.3 Зерно и солома 2.6.3.1. Экстракция и предварительная очистка. В коническую колбу на 250 мл помещают измельченный образец зерна (10 г) или соломы (5 г). Приливают 50 мл (для соломы - 80 мл) ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр "синяя лента". Процедуру экстракции повторяют еще раз, и фильтруют экстракт через тот же фильтр. Растительные остатки на фильтре промывают 20 мл ацетонитрила. Экстракты объединяют, берут аликвоту - 60 мл для зерна и 90 мл для соломы, добавляют к ним 15 мл деионизированной воды и упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до водного остатка. Далее остаток подвергают центрифугированию (2 °С, 20000 об./мин., 15 мин.) и фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента" в делительную воронку на 100 мл, добавляют 20 мл хлороформа и встряхивают воронку в течение 1 мин. Нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным сернокислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Процедуру экстракции хлороформом повторяют еще два раза. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С примерно до 1 мл и его остатки высушивают током азота. Дальнейшую очистку проводят по [п. 2.6.2.2,](#p100073) а анализ на хроматографе - по п. 2.7. ### 2.7. Условия хроматографирования Высокоэффективный жидкостный хроматограф фирмы Beckman (насос 114 м, ультрафиолетовый детектор 166) или аналогичный Самописец регистрирующий фирмы Kipp@Zonen BD41 или аналогичный Хроматографическая колонка фирмы Merck Lichrosorb NH стальная 250 х 4,6 мм, 2 10 мкм или колонка АО БиоХимМак (117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ) Диасорб-130 Амин Объем вводимой пробы: 100 мкл Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (80:20, по объему) Скорость потока подвижной фазы: 0,8 мл/мин. Длина волны детектора: 280 нм Чувствительность УФ-детектора: 0,01 AUFS Скорость протяжки ленты самописца: 2 мм/мин. Температура колонки: комнатная Время выхода тралкоксидима: 7,5 - 8,5 мин. ### 2.8. Обработка результатов анализа Содержание тралкоксидима рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: H x C x V 1 ст C = ------------ x p, 100 H x m ст где: С - содержание тралкоксидима в анализируемом объекте (мг/кг, мг/л); Н - высота пика образца (мм); 1 Н - высота пика стандарта (мм); ст С - концентрация стандартного раствора тралкоксидима ст (мкг/мл); V - объем экстракта (мл); m - масса или объем анализируемого образца (г, мл); р - содержание тралкоксидима в аналитическом стандарте (%). ## 3. Требования техники безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами. ## 4. Контроль погрешности измерений Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95) "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа". ## 5. Разработчики Калинин В.А., профессор, канд. с.-х. наук, Горбатов В.С., вед. научн. сотр., канд. биол. наук, Бондарева Т.А., научн. сотр. Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1, УНКЦ "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". ---