---
title: "\"МУК 4.1.1228-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спироксамина в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде методом газожидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1228-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1228-03"
---

## "МУК 4.1.1228-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спироксамина в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1228-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств спироксамина в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Минздравом России 16.03.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

16 марта 2003 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИРОКСАМИНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ,**
**ЗЕРНЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И СОЛОМЕ ЗЛАКОВЫХ КУЛЬТУР, ВИНОГРАДЕ**
**МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1228-03**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 июля 2003 года

1. <a id="p100006"></a>Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик контроля указаны в конце каждой из них.
2. <a id="p100007"></a>Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 года.
4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100010"></a>Вводная часть


<a id="p100011"></a>Название действующего вещества: спироксамин (ИСО).
<a id="p100012"></a>Торговое название: Фалькон.
<a id="p100013"></a>Фирма-производитель: Байер, Германия.
<a id="p100014"></a>8-третбутил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-2-ил-метил(этил)(пропил)-амин (IUPAC).
<a id="p100015"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100016"></a>    Эмпирическая формула: С  H  NO .
                           18 35  2
<a id="p100017"></a>Молекулярная масса: 297,5.
<a id="p100018"></a>Существует в виде смеси диастереоизомеров 1:2 = 49 - 56%:51 - 44%. Ниже приведены (если не указано особо) свойства для смеси диастереоизомеров.
<a id="p100019"></a>Вязкая жидкость бледно-желтого цвета без запаха. Температура кипения 120 °С при 6,7 Ра. Давление паров 9,7 mРа (20 °С) и 17 mРа (25 °С) для изомеров 1 и 2, соответственно.
<a id="p100020"></a>Хорошо растворим в органических растворителях. Растворимость при 20 °С в ацетоне, ацетонитриле, дихлорметане, гексане, пропаноле, толуоле более 200 г/л. Растворимость в воде при 20 °С (г/л): при рН 3 - > 200; при рН 7 - 0,470 (изомер 1) и 0,340 (изомер 2); при рН 9 - 0,014 (изомер 1) и 0,010 (изомер 2).
<a id="p100021"></a>    Коэффициент   распределения   в   системе   н-октанол  -  вода
K   lg P = 2,79 (изомер 1) и 2,92 (изомер 2).
 ow
<a id="p100022"></a>    Спироксамин  не  разлагается  в  течение  30 дней  при 25 °С в
водных  растворах с  диапазоном рН  от 5 до 9. Период  полураспада
изомера 1 и изомера  2  в  водных  растворах  с  рН 2,1  при 37 °С
6,1 и 15,4 ч, соответственно. Изомер 1 разрушается  при повышенных
температурах. Изомер 2 термостабилен.
<a id="p100023"></a>    Значения  рК  составляют 6,9  как  для  изомера 1,  так и  для
изомера 2.
<a id="p100024"></a>    ЛД   для крыс 500 - 595 мг/кг. Класс токсичности по ВОЗ - III.
      50
<a id="p100025"></a>Гигиенические нормативы для спироксамина:
<a id="p100026"></a>ПДК в почве (мг/кг) - 0,4
<a id="p100027"></a>ОДУ в воде водоемов (мг/куб. дм) - 0,0025
<a id="p100028"></a>МДУ в зерне хлебных злаков (мг/кг) - 0,2
<a id="p100029"></a>ВМДУ в винограде - 0,1
<a id="p100030"></a>Область применения: Фалькон, КЭ - комбинированный фунгицид широкого спектра действия на посевах зерновых культур и виноградниках, содержит спироксамина 250 мг/л + тебуконазола 167 г/л + триадименола 43 г/л.


## 2. <a id="p100031"></a>Методика определения остаточных количеств спироксамина в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде методом газожидкостной хроматографии



### <a id="p100032"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100033"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100034"></a>Методика основана на извлечении спироксамина из проб растворителем с последующей очисткой перераспределением между двумя не смешивающимися жидкостями и на колонке с окисью алюминия или флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с термоионным детектором.

##### <a id="p100035"></a>2.1.2 Избирательность метода

<a id="p100036"></a>Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб, сочетанием селективного детектора и условий хроматографирования. В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).

##### <a id="p100037"></a>2.1.3 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100038"></a>Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 - 2.

<a id="p100039"></a>Таблица 1

<a id="p100040"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА**


| Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % (n = 24) | Относительное стандартное отклонение, %, +/- | Доверительный интервал среднего при n = 5 и р = 0,95, %, +/- |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Вода | 0,002 | 0,002 - 0,02 | 86 | 6,2 | 5,4 |
| Почва | 0,2 | 0,2 - 2 | 85 | 9,1 | 7,9 |
| Зерно | 0,1 | 0,1 - 1 | 80 | 9,8 | 8,6 |
| Солома и зеленая масса растений | 0,1 | 0,1 - 0,2 | 75 | 11,5 | 10,0 |
| Виноград | 0,05 | 0,05 - 0,5 | 85 - ягоды 88 - сок | 5,2 4,8 | 4,7 4,4 |


<a id="p100047"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100048"></a>**СРЕДНЕЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ И ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ**<br>
**ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО ДЛЯ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ**

</div>

СПИРОКСАМИНА ПРИ P = 0,95 и N = 5


<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="18%"><col width="18%"><col width="18%"><col width="23%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Внесено спироксамина, мг/кг (л)</td><td>Определено спироксамина, мг/кг (л)</td><td>Доверительный интервал, +/-</td><td>Средняя полнота определения, %</td></tr>
<tr><td>1</td><td>2</td><td>3</td><td>4</td><td>5</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Вода</td><td>0,002</td><td>0,00174</td><td>0,00011</td><td>87</td></tr>
<tr><td>0,004</td><td>0,0034</td><td>0,00018</td><td>85</td></tr>
<tr><td>0,008</td><td>0,00695</td><td>0,00040</td><td>87</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0172</td><td>0,00068</td><td>86</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Почва</td><td>0,2</td><td>0,165</td><td>0,0145</td><td>83</td></tr>
<tr><td>0,4</td><td>0,325</td><td>0,0275</td><td>82</td></tr>
<tr><td>1</td><td>0,92</td><td>0,0465</td><td>92</td></tr>
<tr><td>2</td><td>1,71</td><td>0,132</td><td>85</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно</td><td>0,1</td><td>0,071</td><td>0,013</td><td>71</td></tr>
<tr><td>0,25</td><td>0,193</td><td>0,0185</td><td>77</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>0,42</td><td>0,027</td><td>84</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,89</td><td>0,049</td><td>89</td></tr>
<tr><td>Зеленая масса растений и</td><td>0,1</td><td>0,072</td><td>0,0135</td><td>72</td></tr>
<tr><td rowspan="3">солома</td><td>0,25</td><td>0,178</td><td>0,019</td><td>71</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>0,38</td><td>0,035</td><td>76</td></tr>
<tr><td>1,0</td><td>0,81</td><td>0,075</td><td>81</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Виноград - ягоды</td><td>0,05</td><td>0,0438</td><td>0,002</td><td>87,5</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0915</td><td>0,003</td><td>91,5</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,0162</td><td>0,008</td><td>80,8</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>0,4085</td><td>0,010</td><td>81,7</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Виноград - сок</td><td>0,05</td><td>0,0423</td><td>0,003</td><td>85,5</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0870</td><td>0,002</td><td>87,0</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1738</td><td>0,008</td><td>86,9</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>0,4595</td><td>0,009</td><td>91,9</td></tr>
</table>


<a id="p100057"></a>Минимально детектируемое количество спироксамина для хроматографа "Цвет" серии 500 с термоионным детектором - 2,5 нг, для импортных хроматографов (HP 5840, PYE UNICAM 204) - 0,5 нг.
<a id="p100058"></a>Граница суммарной погрешности измерения - 12%.
<a id="p100059"></a>Линейный диапазон детектирования ("Цвет-550") - 2,5 - 25 нг, для импортных хроматографов - 1 - 20 нг.


### <a id="p100060"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100061"></a>    Спироксамин (KWG 4168) аналитический
    стандарт, 99,0% (Байер АГ, Германия)
    Алюминия оксид II степени активности
    по Брокману                                   ТУ 6-09-3916-75
    Флорисил для хроматографии (0,150 -
    0,250 мм), фирмы Merck, имп.
    Азот газообразный высокой чистоты             ТУ 6-16-40-14-88
    Гелий очищенный марки Б в баллонах с
    редуктором                                    МРТУ 6-09-374-86
    Ацетон, х.ч.                                  ТУ 6-09-3513-82
    н-Гексан, ч., свежеперегнанный                ТУ 6-09-3375-78
    Натрий сернокислый безводный, ч.д.а.,
 свежепрокаленный [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
    Гидроксид натрия, х.ч., 0,25 М и 1 М водные
 растворы ГОСТ 4328-77
    Хлористый метилен, х.ч.                       ТУ 6-09-2662-77
 Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
    Насадки для колонок: 5% SP-2100 на хромосорбе
    W (0,20 - 0,25 мм), имп.
    5% SE-30 на хроматоне N-Super
    (0,16 - 0,20 мм), имп.
    Неподвижная жидкая фаза OV-17, Супелко Инк,
    США
    Неподвижная жидкая фаза PS-400, Alltech
    Associates, Inc., США
    Неподвижная жидкая фаза SE-30, Супелко Инк,
    США
    Хромосорб 750 зернением 100 - 120 меш, Serva,
    Германия
    Хроматон N-AW DMCS зернением 0,2 - 0,25 мм,
    Хемапол, Чехия
    Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,6 г)
    Калий фосфорнокислый, однозамещенный
 и 0,1 М водный раствор [ГОСТ 4198-75](https://bukva.ai/docs/gost-4198-75)
    Раствор ацетон-0,1 М КН РО  в соотношении
                           2  4
    1:1 по объему
 Спирт этиловый [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67)
    Хлороформ, ч.д.а.                             ГОСТ 20015-74
 Этилацетат, х.ч. [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)
    Бумага фильтровальная                         ТУ 6.091678-86
    Универсальная индикаторная бумага
    или рН-метр                                   ГОСТ 13681-93
    Стекловата


### <a id="p100062"></a>2.3. Приборы, аппаратура, посуда


<a id="p100063"></a>    Газовый хроматограф Цвет 550 или

<div align="center">

    аналогичный с термоионным детектором и

</div>

    стеклянной насадочной колонкой, длиной
    1,8 - 2 м, внутренним диаметром 2 - 3 мм
    Аппарат для встряхивания                      ТУ 6-921-1084-73
    Баня водяная                                  ТУ 64-1-2850-76
    Ванна ультразвуковая "Серьга"                 ТУ 3.836.008
    Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные    ГОСТ 34104-80
 Весы технические ВЛКТ-500 или аналогичные ГОСТ 24104-80
 Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
    Воронки делительные на 250 и 500 мл           ГОСТ 8613-75
    Испаритель вакуумный ротационный ИР-1М
    или аналогичный                               ТУ 25-11917-74
    Колбы круглодонные вместимостью 50, 100,
 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82
 Колбы плоскодонные вместимостью 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82
    Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 мл      ГОСТ 1770-74
    Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная
    зерновая ЛМЗ                                  ТУ 1-01-0593-79
 Микропипетки [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
    Микрошприц МШ-10, МШ-10М                      ТУ 2-833-106
    Насос стеклянный вакуумный водоструйный       ГОСТ 10696-75
 Палочки стеклянные ГОСТ 25336-82
    рН-метр                                       ГОСТ 13681-93
    Пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 мл           ГОСТ 22292-74
 Стаканы химические ГОСТ 25336-82Е
    Хроматографические стеклянные колонки,
    длиной 300 и 350 мм, диаметром 12 мм
    Цилиндры мерные вместимостью 10, 100 и
    1000 мл                                       ГОСТ 1774-74
    Пробирки с притертыми пробками на 10, 20 мл   ГОСТ 1770-74
    Алонж прямой с отводом для вакуума для
    работы с концентрирующими патронами


### <a id="p100064"></a>2.4. Подготовка к определению



##### <a id="p100065"></a>2.4.1 Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии

<a id="p100066"></a>Готовую насадку (5% PS-400 или 3% OV-17 на хромосорбе 750, или 5% SE-30 на хроматоне N, или 5% SP-2100 на хромосорбе W) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 250 °С в токе газа-носителя в течение 10 - 12 ч.

##### <a id="p100067"></a>2.4.2 Подготовка растворителей и приготовление растворов

<a id="p100068"></a>Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.
<a id="p100069"></a>Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя помещают в круглодонную колбу, испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °С досуха, обмывают стенки колбы 1 мл ацетона и хроматографируют по [п. 2.6.1.](#p100094) При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

<div align="center">

<a id="p100070"></a>    0,1  М  раствор КН РО . Навеску 13,6 г однозамещенного фосфата

</div>

                      2  4
калия  помещают в мерную колбу на 1 л. Добавляют в колбу 600 - 700
мл дистиллированной воды. Перемешивают содержимое колбы до полного
растворения  соли,  после  чего  доводят  объем  раствора до метки
дистиллированной  водой. рН раствора должен быть в диапазоне 4,5 -
5,0. Содержимое колбы перемешивают.
<a id="p100071"></a>1 М раствор NaOH. Навеску 40 г гидроокиси натрия помещают в мерную колбу на 1 л. Добавляют в колбу 200 - 300 мл дистиллированной воды. Перемешивают содержимое колбы до полного растворения гидроокиси натрия. После охлаждения раствора до комнатной температуры доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Содержимое колбы перемешивают.
<a id="p100072"></a>0,25 М раствор NaOH. Навеску 5 г гидроксида натрия помещают в мерную колбу на 0,5 л, добавляют 200 мл дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. После охлаждения раствора доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Содержимое колбы перемешивают.
<a id="p100073"></a>    Раствор  ацетон-0,1  М  КН РО   в соотношении 1:1 по объему. В
                              2  4
мерную  колбу  на 1 л помещают 500 мл ацетона, затем доводят объем
раствора  до  метки,  наливая  в ту же колбу 0,1 М раствор КН РО .
                                                             2  4
Содержимое колбы перемешивают.

##### <a id="p100074"></a>2.4.3 Приготовление стандартного и градуировочных растворов

<a id="p100075"></a>Взвешивают 100 мг аналитического стандарта спироксамина, переносят в мерную колбу объемом 100 мл, доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор с концентрацией спироксамина 1 мг/мл).
<a id="p100076"></a>Градуировочные растворы с концентрациями 1; 2; 2,5; 5; 10; 25 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему.
<a id="p100077"></a>Стандартный раствор устойчив при хранении в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 3 месяцев, градуировочные растворы - 1 месяц.
<a id="p100078"></a>Для построения градуировочного графика - зависимости высоты (мм) или площади (мв х с) пика на хроматограмме от концентрации раствора (мкг/мл), в хроматограф вводят по 1 - 2 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных определений для каждого раствора).
<a id="p100079"></a>Градуировочные растворы используют также для внесения в контрольные образцы с целью определения полноты извлечения спироксамина.

##### <a id="p100080"></a>2.4.4 Подготовка окиси алюминия и хроматографических колонок для очистки экстрактов

<a id="p100081"></a>Сорбент прокаливают в муфельной печи при температуре 350 °С в течение не менее 16 ч, остужают в эксикаторе до комнатной температуры и помещают в плоскодонную колбу. Добавляют 3% дистиллированной воды (по весу), закрывают колбу пробкой и энергично встряхивают сначала в течение 5 мин. вручную, а затем два часа на механическом встряхивателе. Колбу оставляют на 48 ч, периодически, через каждые 2 ч, в течение рабочего дня энергично встряхивая ее содержимое 5 - 10 мин.
<a id="p100082"></a>В нижнюю часть колонки для очистки экстрактов помещают тампон из стекловаты. Заполняют колонку на 1/4 этилацетатом. Навеску сорбента (14 г) смешивают в химическом стакане с 15 - 20 мл этилацетата. Заполняют колонку полученной суспензией. Дополнительно в верхнюю часть колонки над сорбентом помещают слой безводного сульфата натрия (1 - 1,5 г). Уровень растворителя над слоем сульфата натрия должен составлять 10 - 15 мм. Пропускают через колонку 20 мл этилацетата.
<a id="p100083"></a>Для каждой приготовленной партии сорбента проверяют объем удерживания спироксамина на хроматографической колонке. Для этого уровень растворителя в хроматографической колонке понижают почти до верхнего слоя сорбента. При помощи стеклянной или автоматической пипетки вносят 1 мл стандартного раствора спироксамина с концентрацией 10 мкг/мл. Дают раствору впитаться, приоткрывая кран колонки и осторожно сливая растворитель, так чтобы слой растворителя над верхним краем сорбента составлял ~ 0,5 см. Элюируют спироксамин из колонки этилацетатом со скоростью 2 мл/мин., отбирая фракции объемом 10 мл в цилиндры на 10 мл. Всего отбирают 6 - 7 фракций. Из цилиндров растворы переливают в круглодонные колбы на 50 мл (каждую фракцию помещают в отдельную колбу). Каждый цилиндр ополаскивают 1 - 2 мл этилацетата, который также вносят в соответствующую колбу. Выпаривают растворитель досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, тщательно обмывая стенки колб, и хроматографируют. Суммарный объем первых фракций, в которых не обнаружен спироксамин, представляет собой объем растворителя, который необходимо отбросить при элюировании спироксамина из колонки при очистке проб. Суммарный объем фракций, в которых обнаружен спироксамин, представляет собой объем растворителя, который необходим для элюирования спироксамина из колонки при очистке проб.
<a id="p100084"></a>Для очистки проб винограда (ягоды, сок) используют хроматографические колонки длиной 300 мм и диаметром 12 мм. В нижнюю часть колонки помещают тампон из стекловаты, заполняют колонку флорисилом (4 г) и дополнительно в верхнюю часть колонки вносят слой безводного сульфата натрия высотой 10 мм. После этого колонку промывают 10 мл чистого н-гексана.

##### <a id="p100085"></a>2.4.5 Подготовка концентрирующего патрона Диапак С16 (0,6 г) для очистки виноградного сока

<a id="p100086"></a>Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, подсоединенного к водоструйному насосу. Сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Льюер объемом не менее 10 мл (используется как емкость для элюентов). Для активации и кондиционирования патрона через него последовательно пропускают 5 мл хлористого метилена, 10 мл ацетона, 10 мл 0,1 н NaOH. Элюат отбрасывают. Скорость потока через патрон не должна превышать 1 - 2 мл/мин. После кондиционирования патрона нельзя допускать высыхания поверхности картриджа и попадания в него пузырьков воздуха. После кондиционирования патрон сразу же используется для работы или герметично закрывается прилагаемыми к нему заглушками с обоих концов для последующего использования.

##### <a id="p100087"></a>2.4.6 Подготовка приборов и средств измерения

<a id="p100088"></a>Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.


### <a id="p100089"></a>2.5. Отбор и подготовка проб


<a id="p100090"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.
<a id="p100091"></a>Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или бумажной таре при комнатной температуре. Замороженные образцы зеленой массы и винограда хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.
<a id="p100092"></a>Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18 °С.


### <a id="p100093"></a>2.6. Проведение определения



##### <a id="p100094"></a>2.6.1 Экстракция

<a id="p100095"></a>Вода. Пробу анализируемой воды (250 мл) помещают в делительную воронку на 250 мл, подщелачивают 1 н NaOH до рН 7,5 - 8,5, добавляют 30 мл хлороформа. Воронку встряхивают 2 мин., дают разделиться слоям. После полного разделения слоев хлороформ (нижний слой) сливают в круглодонную колбу на 250 мл, фильтруя через фильтр "белая лента" со слоем безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, каждый раз используя по 30 мл хлороформа. Фильтр с сульфатом натрия промывают 20 мл хлороформа. Воду отбрасывают. Объединенный экстракт выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 - 3 мл этилового спирта и выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Операцию с этанолом повторяют еще дважды. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют по п. 2.7.1.
<a id="p100096"></a>В случае наличия на хроматограммах проб, мешающих определению коэкстрактивных соединений проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по [п. 2.6.3.](#p100106)
<a id="p100097"></a>    Почва.  Навеску  почвы (25 г) помещают в плоскодонную колбу на

<div align="center">

250  мл,  приливают  100  мл  раствора  ацетона  в  0,1 М КН РО  в

</div>

                                                            2  4
соотношении  1:1  (по  объему).  Колбу  со  смесью  встряхивают на
механическом  встряхивателе  в  течение  30  мин. Содержимое колбы
фильтруют  в  круглодонную  колбу  на  500  мл через фильтр "белая
лента"  методом  декантации. Экстракцию повторяют дважды, один раз
используя  100  мл раствора ацетона в 0,1 М КН РО  и встряхивая 30
                                              2  4
мин., а затем - 50  мл  той   же   смеси,   встряхивая   10   мин.
Объединенный   экстракт   выпаривают   на   вакуумном  ротационном
испарителе  при температуре  бани  не   выше   40  °С   до  объема
примерно 150 мл (до прекращения  энергичного  отгона  растворителя
в  приемную   колбу  ротационного   испарителя).   Далее  проводят
очистку экстракта по [п. 2.6.2.](#p100101)
<a id="p100098"></a>Зерно, зеленая масса и солома. Навеску растительного материала (20 г) помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, добавляют 150 мл ацетона. Колбу с пробой встряхивают на механическом встряхиватели в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют в стакан методом декантации через фильтр "белая лента" в круглодонную колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют при тех же условиях. Колбу с пробой и осадок на фильтре промывают 50 мл ацетона. Объединенный экстракт упаривают до объема 3 - 4 мл на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Далее проводят очистку экстракта по [п. 2.6.2.](#p100101)
<a id="p100099"></a>Виноград. Ягоды винограда. Навеску ягод винограда 50 г измельчают, помещают в коническую колбу на 250 мл, добавляют 100 мл раствора ацетон-хлористый метилен в соотношении 1:1 и экстрагируют спироксамин в ультразвуковой ванне 10 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр (белая лента). К оставшемуся остатку добавляют 50 мл смеси ацетон-хлористый метилен и повторяют экстракцию в ультразвуковой ванне еще 10 мин. Экстракт отфильтровывают. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку на 500 мл и производят очистку по [п. 2.6.2.](#p100101)
<a id="p100100"></a>Виноградный сок. 50 мл сока помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, добавляют 70 мл смеси ацетон-хлористый метилен (1:1) и затем 10 мл 1 М раствора NaOH (до рН 8 - 9). Колбу помещают в ультразвуковую ванну и экстрагируют спироксамин в течение 10 мин. Затем содержимое колбы переносят в делительную воронку на 500 мл, дают жидкости полностью расслоиться и нижнюю органическую фазу сливают в круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия (30 г). С верхним водно-щелочным слоем (рН 8 - 9) повторяют экстракцию 50 мл той же смеси ацетон-хлористый метилен (1:1) в течение 10 мин. в ультразвуковой ванне. После расслоения жидкостей в делительной воронке нижний органический слой сливают в ту же круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия, который затем промывают 10 мл той же смеси. Водно-щелочной слой отбрасывают. Объединенный органический экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона. Дополнительная очистка на колонке с флорисилом осуществляется так же, как для ягод винограда или используют патроны Диапак С16 [(п. 2.6.4).](#p100109)

##### <a id="p100101"></a>2.6.2 Очистка экстрактов

<a id="p100102"></a>Почва. Экстракт подщелачивают 1 н NaOH до рН 7,5 - 8,5 и помещают в делительную воронку на 500 мл. Колбу ополаскивают 30 мл хлороформа, который также переливают в делительную воронку. Воронку встряхивают 2 мин., дают разделиться слоям. После полного разделения слоев хлороформ (нижний слой) сливают в круглодонную колбу на 250 мл, фильтруя через фильтр "белая лента" со слоем безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, каждый раз используя по 30 мл хлороформа. Фильтр с сульфатом натрия промывают 20 мл хлороформа. Водный слой отбрасывают. Объединенный экстракт выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 - 3 мл этилового спирта и выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Операцию с этанолом повторяют еще дважды. Далее проводят очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по [п. 2.6.3.](#p100106)
<a id="p100103"></a>    Зерно,  зеленая  масса и солома. После охлаждения до комнатной
температуры  в  колбу  к  экстракту  добавляют 50 мл 0,1 М КН РО .
                                                             2  4
Содержимое  колбы  тщательно  перемешивают  в  течение  3 - 5 мин.
Раствор  фильтруют  через  фильтр "синяя лента" в коническую колбу
емкостью  200  мл. Колбу и осадок на фильтре промывают 50 мл 0,1 М
КН РО . Фильтрат подщелачивают 1 н раствором NaOH до рН 7,5 - 8,5.
  2  4
Время  от добавления к экстракту раствора КН РО  до подщелачивания
                                            2  4
не  должно  превышать  90  мин.  После  подщелачивания  к раствору
приливают  30  мл  хлороформа,  встряхивают  в  течение  2 мин.  и
переносят  в делительную воронку. Слой хлороформа пропускают через
фильтр  с  сульфатом  натрия (2 - 3 г) в круглодонную колбу на 250
мл.  Экстракцию хлороформом повторяют еще 2 раза. Фильтр промывают
20  мл  хлороформа.  Фракции  хлороформа  объединяют,  отгоняют на
вакуумном ротационном испарителе при температуре бани 40 °С. Сухой
остаток  растворяют в 2 - 3 мл этилового спирта и упаривают досуха
на  вакуумном  ротационном  испарителе при температуре бани 40 °С.
Операцию с этанолом повторяют дважды. Сухой остаток  растворяют  в
1 - 2 мл ацетона и хроматографируют по п. 2.7.1.
<a id="p100104"></a>При наличии на хроматограммах проб мешающих определению коэкстрактивных соединений проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по [п. 2.6.3.](#p100106)
<a id="p100105"></a>Виноград. В делительную воронку с объединенным фильтратом добавляют 40 - 50 мл 0,25 М раствора NaOH (до рН 8 - 9). Воронку встряхивают в течение 3 мин. Нижнюю органическую фазу сливают через слой безводного сернокислого натрия (30 г) в круглодонную колбу. Верхний водный слой (рН 8 - 9) экстрагируют 50 мл хлористого метилена, встряхивая воронку в течение 3 мин. После полного расслоения жидкостей, органическую фазу сливают в ту же круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия (30 г). Водный слой отбрасывают, а объединенный органический экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и далее проводят очистку на колонке с флорисилом по [п. 2.6.3.](#p100106)

##### <a id="p100106"></a>2.6.3 Очистка экстрактов на колонке с окисью алюминия и флористом

<a id="p100107"></a>Вода, почва, зеленая масса, солома, зерно. Растворяют сухой остаток в 1 мл ацетона. Перед внесением пробы уровень растворителя в колонке понижают почти до верхнего края сорбента. Пипеткой количественно вносят анализируемую пробу в колонку и дают ей впитаться. Обмывают стенки колбы 1 мл ацетона, который также вносят в колонку. Дают пробе впитаться, приоткрывая кран колонки и внимательно следя за тем, чтобы уровень жидкости в колонке не опускался ниже верхнего слоя сорбента. Элюируют спироксамин из колонки, используя 40 мл этилацетата со скоростью 2 мл/мин. Первые 10 мл элюата отбрасывают, а последующие 30 мл собирают в круглодонную колбу на 100 мл. Растворитель выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Экстракт растворяют в 1 - 2 мл ацетона и хроматографируют по [п. 2.6.1.](#p100094)
<a id="p100108"></a>Виноград (ягоды, сок). Ацетоновый раствор количественно переносят в колонку с флорисилом. Стенки колбы обмывают 1 мл ацетона и также вносят в хроматографическую колонку. После впитывания раствора флорисилом элюируют спироксамин из колонки, используя 50 мл смеси ацетон-гексан в соотношении 7:3. Первые 10 мл элюата отбрасывают, а последующие 40 мл собирают в круглодонную колбу на 100 мл. Растворитель выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют, дозируя в хроматограф 1 - 2 мкл раствора.

##### <a id="p100109"></a>2.6.4 Альтернативный вариант очистки виноградного сока с помощью патрона Диапак С16

<a id="p100110"></a>К 50 мл виноградного сока добавляют по каплям 1 н раствор NaOH до рН 9 (контроль по индикаторной бумаге). Затем виноградный сок фильтруют в колбу на 100 мл через стеклянную воронку с ватным тампоном, предварительно промытым ацетоном. Остаток с ваты смывают 5 мл ацетона. Объединенный фильтрат пропускают через предварительно откондиционированный патрон Диапак С16 со скоростью 1 - 2 мл/мин. По окончании пропускания образца остаток раствора выдувается с картриджа током азота в течение 30 мин. Элюируют спироксамин с патрона 6 мл хлористого метилена, добавляя его порциями по 1 мл. Необходимо, чтобы первая порция элюента задержалась в патроне 1 - 2 мин. для установления равновесия в системе и более полного извлечения спироксамина. Элюат упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.


### <a id="p100111"></a>2.7. Условия хроматографирования


<a id="p100112"></a>Газовый хроматограф, оснащенный термоионным детектором (Цвет 500, НР-5840, PYE UNICAM 204 или аналогичные). Газ-носитель - гелий или азот высокой чистоты.
<a id="p100113"></a>    Газовый   хроматограф   Цвет-550М  с  термоионным  детектором.
Колонка  стеклянная 2 м х 3 мм, заполненная Хромосорбом W (0,200 -
0,250  мм) с 5% SP-2100 или хроматоном N-Super  (0,16 - 0,20 мм) с

<div align="center">

5%  SE.  Температура  колонки 220 °С, испарителя 240 °С, детектора

</div>

390  °С.  Скорость  потока  газа-носителя (гелий)  -  37  мл/мин.,
водорода  20  мл/мин., воздуха  300 мл/мин. Шкала электрометра 2 х
  9
10 .  Время  удерживания  5,0 +/- 0,1  мин.  (изомер  1),  6,0 +/-
0,1 мин.  (изомер 2).  При  скорости  газа-носителя 51,5 мл/мин. и
температуре колонки 230 °С время удерживания спироксамина 2,64 +/-
0,05 мин. (изомер 1) и 3,25 +/- 0,05 мин. (изомер 2).
<a id="p100114"></a>Условия хроматографирования для импортируемых хроматографов HP 5840 и PYE UNICAM 204 приведены в таблице:


<table>
<colgroup><col width="23%"><col width="20%"><col width="20%"><col width="18%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Характеристика</td><td colspan="4">Варианты</td></tr>
<tr><td>I</td><td>II</td><td>III</td><td>IV</td></tr>
<tr><td>Носитель</td><td>хромосорб 750</td><td>хроматон N-AW-DMCS</td><td>инертон супер</td><td>хромосорб 750</td></tr>
<tr><td>Размер частиц, мм</td><td>0,12 - 0,150</td><td>0,2 - 0,25</td><td>0,16 - 0,2</td><td>0,12 - 0,150</td></tr>
<tr><td>Неподвижная фаза</td><td>3% OV-17</td><td>5% SE-30</td><td>5% SE-30</td><td>5% PS-400</td></tr>
<tr><td>Длина колонки, м</td><td>1,8</td><td>1,8</td><td>1,5</td><td>2</td></tr>
<tr><td>Внутренний диаметр колонки, мм</td><td>2</td><td>2</td><td>2</td><td>2</td></tr>
<tr><td>Скорость потока, мл/мин.: гелия или азота водорода воздуха</td><td>12,3 3,4 60</td><td>16 3,4 60</td><td>25 35 350</td><td>30 35 350</td></tr>
<tr><td>Температура, °С: колонки инжектора детектора</td><td>190 250 300</td><td>200 250 300</td><td>210 250 300</td><td>190 250 300</td></tr>
<tr><td>Время удерживания, мин.: изомера I изомера II</td><td>10,7 +/- 0,5 12,9 +/- 0,5</td><td>8,3 +/- 0,3 10,2 +/- 0,3</td><td>7,5 +/- 0,3 8,8 +/- 0,3</td><td>4,7 +/- 0,3 5,7 +/- 0,3</td></tr>
</table>



### <a id="p100124"></a>2.8. Обработка результатов анализа


<a id="p100125"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание спироксамина в пробах рассчитывают по формуле:

                         C x V x V     S    S
                                  1     1    2
<a id="p100126"></a>                    X  = ---------- х {-- + --},
                     1     V  x P       c    c
                            2          S    S
                                        1    2

    где:
    Х - содержание спироксамина в пробе, мг/кг;
     с    с
    S ,  S   -  площадь  (высота)  пика спироксамина в стандартном
     1    2
растворе для изомеров 1 и 2, соответственно, мв х с (мм);
    S ,  S  - площадь  (высота)  пика спироксамина в анализируемой
     1    2
пробе для изомеров 1 и 2, соответственно, мв x с (мм);
    V - объем анализируемой пробы, мл;
    Р - навеска анализируемого образца, г;
    С - концентрация стандартного раствора спироксамина, мкг/мл;
    V   и  V   -  дозируемые  объемы стандартного и анализируемого
     1      2
растворов, мкл.
<a id="p100127"></a>Содержание остаточных количеств спироксамина в анализируемой пробе вычисляют как среднее из 3 параллельных определений.


## 3. <a id="p100128"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100129"></a>При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, сжатыми газами, а также инструкций по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования.


## 4. <a id="p100130"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100131"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95.](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95) ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".


## 5. <a id="p100132"></a>Разработчики


<a id="p100133"></a>Определение спироксамина в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе злаковых культур: Басова Ю.Г., Сабуров Г.Г., Андреева М.В., Маслаков С.Е. Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт лесного хозяйства.
<a id="p100134"></a>Определение спироксамина в винограде: Остроухова О.К., Блинова Т.Ф., Цибульская И.А., Долженко В.И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений (ВИЗР).



<a id="p100135"></a>

---