---
title: "\"МУК 4.1.1218-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изоксафлютола и его метаболита rpa 202248 в воде; изоксафлютола (в виде RPA 202248) в почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изоксафлютола в воде методом газожидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1218-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1218-03"
---

## "МУК 4.1.1218-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изоксафлютола и его метаболита rpa 202248 в воде; изоксафлютола (в виде RPA 202248) в почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изоксафлютола в воде методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1218-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изоксафлютола и его метаболита rpa 202248 в воде; изоксафлютола (в виде RPA 202248) в почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изоксафлютола в воде методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Минздравом России 16.03.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

16 марта 2003 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИЗОКСАФЛЮТОЛА**
**И ЕГО МЕТАБОЛИТА RPA 202248 В ВОДЕ; ИЗОКСАФЛЮТОЛА**
**(В ВИДЕ RPA 202248) В ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ, А ТАКЖЕ**
**ИЗОКСАФЛЮТОЛА В ВОДЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.1218-03**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 июля 2003 года

1. <a id="p100006"></a>Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева; при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены с 1 июля 2003 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100011"></a>Вводная часть


<a id="p100012"></a>Фирма-производитель: Рон Пуленк.
<a id="p100013"></a>Торговое название: Мерлин, 75% в.г.
<a id="p100014"></a>Название действующего вещества по ИСО: изоксафлютол.
<a id="p100015"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: 5-циклопропил-1,2-оксазол-4-ил альфа, альфа, альфа-трифтор-2-мезил-ро-толилкетон.
<a id="p100016"></a>Синонимы: RPA 201772.
<a id="p100017"></a>Структурная формула: (не приводится).
<a id="p100018"></a>    Эмпирическая формула: C  H  F NO S.
                           15 12 3  4
<a id="p100019"></a>Молекулярная масса: 359,3.
<a id="p100020"></a>Химически чистый изоксафлютол представляет собой белый кристаллический порошок без запаха.
<a id="p100021"></a>Температура плавления: 140 °С.
                          -3
<a id="p100022"></a>    Давление паров: 1 х 10   мПа (при 25 °С).
<a id="p100023"></a>    Коэффициент   перераспределения   в   системе    октанол-вода:
K   log P = 2,32.
 ow
<a id="p100024"></a>Растворимость в воде при 10,2 °С - 5,3 мг/л, при 19,9 °С - 6,2 мг/л, при 30,3 °С - 11,8 мг/л.
<a id="p100025"></a>Растворимость в органических растворителях (г/л при 24 °С): ацетонитрил - 233, гексан - 0,1, дихлорметан - 346, метанол - 13,8, октанол - 0,76, толуол - 31,2, этилацетат - 142, ацетон - 293.
<a id="p100026"></a>Максимум поглощения в ультрафиолетовой области спектра находится на длине волны 268,7 нм.
<a id="p100027"></a>    Вещество  стабильно  при  нагревании  (14 дней при 54 °С) и на
свету,  но  быстро  разрушается  в  щелочной  среде  в  результате
гидролиза  (Т   составляет при рН 5 - 11,1 суток, при  рН 7 - 20,1
             50
дня, при рН 9 - 3,2 дня).
<a id="p100028"></a>Основной метаболит изоксафлютола - RPA 202248.
<a id="p100029"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-циано-3-цикло-пропил-1-(2-метилсульфонил-4-трифторметилфенил)-пропан-1,3-дион.
<a id="p100030"></a>Структурная формула: (не приводится).
<a id="p100031"></a>    Эмпирическая формула: C  H  F NO S.
                           15 12 3  4
<a id="p100032"></a>Молекулярная масса: 359,3.
<a id="p100033"></a>Химически чистый RPA 202248 представляет собой бесцветный кристаллический порошок без запаха.
<a id="p100034"></a>Температура плавления - 137,3 °С.
<a id="p100035"></a>    Коэффициент   перераспределения   в   системе    октанол-вода:
K   log P = -0,88.
 ow
<a id="p100036"></a>Растворимость в воде при 25 °С - 326 мг/л.
<a id="p100037"></a>RPA 202248 - кислота с рКа 1,64.
<a id="p100038"></a>Максимум поглощения в ультрафиолетовой области спектра находится на длине волны 302,0 нм.
<a id="p100039"></a>Второй метаболит изоксафлютола - RPA 203328.
<a id="p100040"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-метилсульфонил-4-трифторбензойная кислота.
<a id="p100041"></a>Структурная формула: (не приводится).
<a id="p100042"></a>    Эмпирическая формула: C H F O S.
                           9 7 3 4
<a id="p100043"></a>Молекулярная масса: 268,2.
<a id="p100044"></a>Химически чистый RPA 203328 представляет собой бесцветный кристаллический порошок без запаха.
<a id="p100045"></a>Температура плавления - 157,1 °С.
<a id="p100046"></a>    Коэффициент   перераспределения   в    системе   октанол-вода:
K   log P = 0,61 при рН 3,0 и менее 0 при рН 7,0.
 ow
<a id="p100047"></a>    Растворимость в воде при 25 °С - 8460 мг/л.
<a id="p100048"></a>    RPA 203328 - кислота с рКа 2,4.
<a id="p100049"></a>    Краткая    токсикологическая    характеристика:   изоксафлютол
относится  к малоопасным по оральной токсичности соединениям (ЛД
                                                                50
для  крыс составляет более  5000 мг/кг) с низкой дермальной  (ЛД
                                                                50
для  кроликов  более    2000 мг/кг) и ингаляционной (ЛК   для крыс
                                                       50
составляет   более  5230 мг/куб. м)   токсичностью.   Кумулятивные
свойства изоксафлютола выражены слабо:  не раздражает кожу и слабо
раздражает   слизистую   оболочку   глаз.   Аллергенное   действие
изоксафлютола не выявлено.
<a id="p100050"></a>МДУ в зерне кукурузы - 0,05 мг/кг.
<a id="p100051"></a>Область применения препарата. Изоксафлютол - гербицид системного действия, проникающий через корни и листья растений и ингибирующий биосинтез каротиноидов. Хорошо подавляет развитие широколистных и злаковых сорняков в посевах кукурузы при довсходовом или допосевном внесении с нормой расхода 75 - 140 г д.в./га.
<a id="p100052"></a>Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Мерлин, 75% в.г., в качестве гербицида в посевах кукурузы с нормой расхода 0,10 - 0,15 кг/га при однократной обработке за сезон.
<a id="p100053"></a>По данным фирмы-регистранта, метаболиты изоксафлютола токсикологического значения не имеют.


## 2. <a id="p100054"></a>Методика определения остаточных количеств изоксафлютола и его метаболита RPA 202248 в воде; изоксафлютола (в виде RPA 202248) в почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изоксафлютола в воде методом газожидкостной хроматографии



### <a id="p100055"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100056"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100057"></a>Методика основана на определении изоксафлютола и его метаболита R в воде, а также изоксафлютола в виде его метаболита RPA 202248 в других средах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, перевода изоксафлютола в его метаболит (при необходимости), очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и на концентрирующих патронах.
<a id="p100058"></a>Методика определения изоксафлютола в воде с помощью газожидкостной хроматографии основана на использовании детектора с постоянной скоростью рекомбинации ионов и неподвижной фазы OV-210. При этом изоксафлютол путем гидролиза превращается в RPA 202248 и экстрагируется из воды органическим растворителем. Затем за счет метанолиза RPA 202248 переводится в RPA 203328, который после очистки экстракта перераспределением действующего вещества между несмешивающимися фазами метилируется и хроматографируется в виде метилового эфира 2-метилсульфонил-4-трифторбензойной кислоты.
<a id="p100059"></a>Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

##### <a id="p100060"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100061"></a>Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1, [2.](#p100070)

<a id="p100062"></a>Таблица 1

<a id="p100063"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**


<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="12%"><col width="22%"><col width="15%"><col width="18%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый</td><td colspan="5">Метрологические параметры, р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>объект</td><td>Предел обнаружения, мг/кг (мг/л)</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л)</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S</td><td>Доверительный интервал среднего результата, %, +/-</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,002</td><td>0,002 - 0,02</td><td>83,4</td><td>1,06</td><td>2,22</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,05</td><td>76,0</td><td>1,02</td><td>0,48</td></tr>
<tr><td>Зерно</td><td>0,025</td><td>0,025 - 0,250</td><td>81,0</td><td>1,9</td><td>0,89</td></tr>
<tr><td>Зеленая масса</td><td>0,050</td><td>0,050 - 0,500</td><td>74,8</td><td>4,7</td><td>2,22</td></tr>
</table>


<a id="p100069"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100070"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИЗОКСАФЛЮТОЛА**<br>
**В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ**

</div>

**(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**


<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="20%"><col width="20%"><col width="22%"><col width="23%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Добавлено, мг/кг (мг/л)</td><td>Обнаружено, мг/кг (мг/л)</td><td>Доверительный интервал, +/-</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Вода</td><td>0,005</td><td>0,00406</td><td>0,000257</td><td>81,2</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>0,0084</td><td>0,00068</td><td>84,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0165</td><td>0,001388</td><td>82,5</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,043</td><td>0,002151</td><td>86,0</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>83,4</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Почва</td><td>0,005</td><td>0,0038</td><td>0,000068</td><td>75,2</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>0,0075</td><td>0,000010</td><td>75,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0152</td><td>0,000152</td><td>76,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0383</td><td>0,000989</td><td>76,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>76,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно</td><td>0,025</td><td>0,0198</td><td>0,000555</td><td>79,2</td></tr>
<tr><td>0,050</td><td>0,0404</td><td>0,001416</td><td>80,8</td></tr>
<tr><td>0,100</td><td>0,0864</td><td>0,001883</td><td>86,4</td></tr>
<tr><td>0,250</td><td>0,1986</td><td>0,007931</td><td>79,4</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>81,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зеленая масса</td><td>0,050</td><td>0,037</td><td>0,00136</td><td>74</td></tr>
<tr><td>0,100</td><td>0,0746</td><td>0,00299</td><td>74,6</td></tr>
<tr><td>0,250</td><td>0,1892</td><td>0,005074</td><td>75,7</td></tr>
<tr><td>0,500</td><td>0,3774</td><td>0,004442</td><td>75,5</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>74,8</td></tr>
</table>



##### <a id="p100080"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100081"></a>В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании кукурузы.


### <a id="p100082"></a>2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование



##### <a id="p100083"></a>2.2.1 Реактивы, материалы и растворы

<a id="p100084"></a>    Изоксафлютол,  аналитический стандарт
    с содержанием д.в. 98,6%, фирма Рон Пуленк
    RPA 202248, аналитический стандарт
    с содержанием д.в. 99,3%, фирма Рон Пуленк
<a id="p100085"></a> Азот, осч ГОСТ 9293-74
<a id="p100086"></a>    Ацетон, осч                                  ТУ 6-09-3513-86
<a id="p100087"></a>    Ацетонитрил для ВЭЖХ, УФ 210, с массовой
    долей ацетонитрила 99,9%, воды - не более
    0,01% и оптической прозрачностью 100% не
    менее 210 нм; ЗАО "Предприятие Химресурс",
    тел./факс: (095) 358-34-12
<a id="p100088"></a>    N-нитрозо-N-метилмочевина, ч                 ТУ 6-09-11-982-77
<a id="p100089"></a>    Бумага индикаторная универсальная            ТУ 6-09-1181-76
<a id="p100090"></a>    Вода бидистиллированная, деионизированная
<a id="p100091"></a>    Вода дистиллированная                        ГОСТ 7602-72
    н-Гексан, хч                                 ТУ 6-09-4521-77
<a id="p100092"></a>    Гелий, осч
<a id="p100093"></a> Калий марганцово-кислый, чда ГОСТ 20490-75
<a id="p100094"></a>    Калия гидроксид                              ГОСТ 24363-80
<a id="p100095"></a>    Калия гидроксид, 40%-ный водный раствор
<a id="p100096"></a>    Картриджи (концентрирующие патроны) Sep-Pak
    Diol (2 ОН) (5 г) - Уотерс, кат. N 54690
<a id="p100097"></a> Кислота соляная, концентрированная ГОСТ 857-88
<a id="p100098"></a>    Кислота серная, концентрированная            ГОСТ 857-88
<a id="p100099"></a> Метилен хлористый ГОСТ 19433-88
<a id="p100100"></a>    Метиламин гидрохлорид (соляно-кислый)        ТУ 6-09-2088-77
<a id="p100101"></a> Мочевина, чда [ГОСТ 6691-77](https://bukva.ai/docs/gost-6691-77)
<a id="p100102"></a>    Неподвижная фаза для ГЖХ: 5% OV-210 (0,16 -
    0,20 мм) на Газохроме-Q, Хемапол, Чехия
<a id="p100103"></a> Натрий серно-кислый, безводный, хч [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100104"></a> Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77
<a id="p100105"></a>    Натрий хлористый, насыщенный водный
    раствор
<a id="p100106"></a>    Натрия гидроксид, очищенный                  ГОСТ 11078-78
<a id="p100107"></a>    Натрия гидроксид, 2%-ный водный раствор
<a id="p100108"></a> Натрия нитрит [ГОСТ 4168-79](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4168-79)
<a id="p100109"></a>    Патроны концентрирующие "Диапак"-Диол
    (2-ОН, 0,6 г) АО "БиоХимМак", МГУ, Москва    ТУ 4215-002-
                                                 05451931-94
<a id="p100110"></a>    Спирт метиловый                              ГОСТ 6995-77
<a id="p100111"></a> Спирт этиловый, ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67)
<a id="p100112"></a>    Трифторуксусная кислота, ч                   ТУ 6-09-3877-80
<a id="p100113"></a> Фильтры бумажные, "красная лента" ТУ 6-09-1678-86
<a id="p100114"></a>    Фильтры для очистки растворителей,
    диаметром 20 мм с отверстиями 20 мкм,
    фирма Уотерс
<a id="p100115"></a> Хлористый метилен ГОСТ 19433-88
<a id="p100116"></a>    Хлороформ, ч                                 ГОСТ 20015-88
<a id="p100117"></a> Этиловый эфир уксусной кислоты [ГОСТ 223000-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)
<a id="p100118"></a>    Эфир диэтиловый, медицинский                 ОСТ 84-2006-88


##### <a id="p100119"></a>2.2.2 Приборы и оборудование


<a id="p100120"></a>    Хроматограф жидкостный "Уотерс 510" с
    ультрафиолетовым детектором с изменяемой
    длиной волны и чувствительностью не ниже
    0,0025 единицы адсорбции на шкалу или
    другой аналогичного типа
<a id="p100121"></a>    Колонка хроматографическая стальная, длиной
    250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм,
    содержащая неподвижную фазу Zorbax SB-С18,
    зернением 5 мкм или другая с аналогичными
    характеристиками
<a id="p100122"></a>    Хроматограф газовый с детектором постоянной
    скорости рекомбинации ионов "Цвет-550 М" с
    пределом детектирования по Линдану не выше
          -14
    4 х 10    или другой аналогичного типа
<a id="p100123"></a>    Алонж прямой с отводом для вакуума (для
    работы с концентрирующими патронами
<a id="p100124"></a>    Диапак-Диол (2 ОН))
<a id="p100125"></a>    Баня водяная                                 ТУ 46-22-603-75
<a id="p100126"></a>    Баня песчаная
<a id="p100127"></a>    Ванна ультразвуковая
<a id="p100128"></a>    Весы аналитические ВЛА-200                   ГОСТ 34104-80Е
    или аналогичные
<a id="p100129"></a>    Весы лабораторные общего назначения, с
    наибольшим пределом взвешивания до 500 г и
 пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г ГОСТ 19491-74
<a id="p100130"></a> Воронки делительные на 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82Е
<a id="p100131"></a>    Воронки конические, стеклянные диаметром
 50 - 60 мм ГОСТ 25336-82Е
<a id="p100132"></a>    Встряхиватель механический                   ТУ 64-673М
    или аналогичный
<a id="p100133"></a>    Колбы конические, плоскодонные на 250        ГОСТ 9737-70
    и 500 мл
<a id="p100134"></a>    Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл              ГОСТ 1770-74
<a id="p100135"></a>    Концентраторы грушевидные и круглодонные,
    объемом 50, 100 и 250 мл, КТУ-100-14/19      ГОСТ 10394-75
<a id="p100136"></a>    Испаритель ротационный вакуумный ИР-1М       ТУ 25-11-917-74
    или аналогичный
<a id="p100137"></a>    Микрошприц для жидкостного хроматографа на
    50 - 100 мкл, фирма "Гамильтон", или анало-
    гичный
<a id="p100138"></a>    Микрошприц для газового хроматографа на
 10 мкл, МШ-10 или аналогичный [ГОСТ 20292-74Е](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
<a id="p100139"></a>    Насос водоструйный                           ГОСТ 10696-75
<a id="p100140"></a>    Палочки стеклянные                           ГОСТ 25366-80Е
<a id="p100141"></a> Пипетки мерные на 0,2; 1,0; 2,0; 5,0 мл [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
<a id="p100142"></a>    Пробирки мерные с притертыми пробками,
    КШ 14/23                                     ГОСТ 1770-74
<a id="p100143"></a>    Стаканы стеклянные на 100 - 500 мл           ГОСТ 25366-80Е
<a id="p100144"></a>    Термометр лабораторный шкальный  ТЛ-2,
    цена деления 0,2 °С, пределы измерения
    40 - 110 °С                                  ГОСТ 16590-71
<a id="p100145"></a>    Цилиндры мерные, вместимостью 10; 50;
    100 мл                                       ГОСТ 1770-74Е


### <a id="p100146"></a>2.3. Подготовка к определению



##### <a id="p100147"></a>2.3.1 Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

<a id="p100148"></a>Колонку с неподвижной фазой Zorbax SB-C18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при t = 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин. в течение 3 - 4 ч.

##### <a id="p100149"></a>2.3.2 Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии

<a id="p100150"></a>Готовую насадку (5% OV-210 на Газохроме-Q) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 230 °С в течение 8 - 10 ч.

##### <a id="p100151"></a>2.3.3 Приготовление стандартных растворов

<a id="p100152"></a>Взвешивают 100 мг RPA 202248 в мерной колбе объемом 100 мл. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный раствор N 1, концентрация RPA 202248 - 1,0 мг/мл). Затем 1 мл стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой в мерную колбу объемом 100 мл и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор N 2, концентрация RPA 202248 - 10 мкг/мл). Стандартные растворы N 1 и 2 можно хранить в холодильнике в течение 3-х месяцев. Методом последовательного разведения ацетонитрилом из раствора N 2 готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 мкг/мл вещества и используют эти растворы для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец при отработке методики.
<a id="p100153"></a>Аналогично готовят стандартные растворы изоксафлютола N 1 (1 мг/мл) и 2 (10 мкг/мл).
<a id="p100154"></a>Для отработки методики определения остаточных количеств изоксафлютола и RPA 202248 в воде методом ВЭЖХ готовят смешанный стандарт, содержащий оба вещества в равной концентрации. В мерную колбу объемом 100 мл помещают по 1 мл стандартных растворов изоксафлютола и RPA 202248 с концентрацией 1 мг/мл и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор с концентрацией изоксафлютола и RPA 202248 - 10 мкг/мл). Для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец при отработке методики методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы с концентрацией изоксафлютола и RPA 202248 2,0; 0,8; 0,4; 0,2 мкг/мл.

##### <a id="p100155"></a>2.3.4 Приготовление растворов для жидкостной хроматографии


###### <a id="p100156"></a>2.3.4.1 Очистка бидистиллированной воды.

<a id="p100157"></a>Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцово-кислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.

###### <a id="p100158"></a>2.3.4.2 Очистка ацетонитрила.

<a id="p100159"></a>Ацетонитрил перегоняют на стеклянной установке для дистилляции, собирая фракцию, кипящую при температуре 81,6 °С.
<a id="p100160"></a>2.3.4.3. Приготовление 0,2%-ного водного раствора трифторуксусной кислоты.
<a id="p100161"></a>В мерную колбу объемом 1000 мл наливают 300 мл очищенной воды, прибавляют туда же 2 мл концентрированной трифторуксусной кислоты и тщательно перемешивают, после чего доводят раствор до метки очищенной водой.

###### <a id="p100162"></a>2.3.4.4 Приготовление подвижной фазы для ВЖХА.

<a id="p100163"></a>В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 500 мл ацетонитрила и 500 мл 0,2%-ного водного раствора трифторуксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.

###### <a id="p100164"></a>2.3.4.5 Приготовление раствора для разведения проб.

<a id="p100165"></a>В плоскодонную колбу объемом 100 мл помещают 80 мл ацетонитрила и 20 мл 0,2%-ного водного раствора трифторуксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают. Полученный раствор используют для растворения проб перед вводом их в хроматограф.

##### <a id="p100166"></a>2.3.5 Построение калибровочного графика (ВЖХ)

<a id="p100167"></a>Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из полученных четырех растворов RPA 202248 (с концентрацией 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2 мкг/мл), измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации RPA 202248 (мкг/мл).
<a id="p100168"></a>Для построения калибровочного графика для смешанного стандарта вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из полученных четырех растворов изоксафлютола и RPA 202248 (с концентрацией 2,0; 0,8; 0,4; 0,2 мкг/мл), измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации каждого компонента смешанного стандарта - изоксафлютола и RPA 202248.

##### <a id="p100169"></a>2.3.6 Подготовка концентрирующего патрона Диапак-Диол (2 ОН) (0,6 г) для очистки экстракта

<a id="p100170"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума.
<a id="p100171"></a>Патрон Диапак-Диол устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100172"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 мл метанола и 5 мл смеси гексана с ацетоном в соотношении 50:50. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!

##### <a id="p100173"></a>2.3.7 Подготовка картриджа Sep-Pak Diol (2 ОН) (5 г) для очистки экстракта

<a id="p100174"></a>Все процедуры происходят без использования вакуума при нормальном атмосферном давлении.
<a id="p100175"></a>Кондиционирование: картридж промывают последовательно 20 мл метанола и 20 мл смеси гексана с ацетоном в соотношении 50:50. Элюат отбрасывают.
<a id="p100176"></a>Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!

##### <a id="p100177"></a>2.3.8 Проверка хроматографического поведения RPA 202248 на картриджах и концентрирующих патронах

<a id="p100178"></a>В круглодонную колбу объемом 50 мл вносят по 1 мл стандартного раствора RPA 202248 с концентрацией 1 мкг/мл и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100179"></a>Добавляют 1 мл ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 1 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор наносят на картридж. Концентратор тщательно обмывают 2 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50:50, и смесь также вносят на картридж. Картридж промывают последовательно 10 мл гексана и 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50:50 со скоростью 2 мл/мин. Элюат отбрасывают. Затем RPA 202248 элюируют с картриджа пятью порциями по 2 мл метанола. Каждую фракцию упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Каждую фракцию анализируют отдельно, для чего сухой остаток после упаривания растворяют в смеси: ацетонитрил +0,2%-ный водный раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 80:20 и аликвоту объемом 20 мкл вводят в хроматограф.
<a id="p100180"></a>Рассчитывают содержание RPA 202248 в каждой фракции и определяют полноту элюирования вещества с картриджа или патрона и необходимый для очистки объем элюата.
<a id="p100181"></a>Примечание: Хроматографическое поведение RPA 202248 на картриджах и патронах обязательно проверяют при отработке методики и каждый раз при использовании новых партий картриджей и патронов.


##### <a id="p100182"></a>2.3.9 Приготовление 1 М раствора гидроксида натрия в метаноле

<a id="p100183"></a>Взвешивают 4 г гидроксида натрия в мерной колбе на 100 мл, растворяют навеску в метиловом спирте и доводят объем до метки метанолом (необходимо добиться полного растворения щелочи).

##### <a id="p100184"></a>2.3.10 Получение N-нитрозо-N-метилмочевины

<a id="p100185"></a>При отсутствии коммерческого препарата N-нитрозометилмочевины осуществляют его синтез. Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу! В круглодонную колбу со шлифом вместимостью 1 л, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 мл воды и кипятят 3 ч с обратным холодильником на водяной бане. По истечении срока раствор в колбе охлаждают до комнатной температуры и добавляют в него 110 г нитрита натрия. Затем раствор охлаждают в бане со льдом, содержащим поваренную соль, до 0 °С. Охлажденный раствор медленно (Осторожно! Вспенивание.) при перемешивании переливают в стакан емкостью 2 л, содержащий смесь 600 г льда и 60 мл концентрированной серной кислоты, охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью, следя за тем, чтобы температура внутри стакана не поднималась выше 2 °С. Всплывшие кристаллы нитрозометилмочевины немедленно отфильтровывают через фильтр в воронке Бюхнера под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.
<a id="p100186"></a>Внимание! Нитрозометилмочевину хранят во влажном состоянии в темной склянке с пластмассовой пробкой в морозильнике, так как под действием света и тепла она может взорваться.

##### <a id="p100187"></a>2.3.11 Приготовление раствора диазометана

<a id="p100188"></a>Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!
<a id="p100189"></a>В коническую колбу на 100 мл вносят 20 мл 40%-ного раствора гидроксида калия и 50 мл диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2 - 4 °С. В охлажденную смесь порциями при перемешивании на магнитной мешалке или путем встряхивания вносят 5 г нитрозометилмочевины. Реакционную смесь выдерживают на холоде 10 мин. Затем эфирный слой сливают в чистую коническую колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 - 15 гранул гидроксида калия и колбу оставляют в бане со льдом на 2,5 - 3,0 ч для осушения раствора.
<a id="p100190"></a>Раствор диазометана в эфире годен к употреблению при хранении в морозильнике в течение 1 - 2 суток. При хранении сосуды с диазометаном нельзя плотно закрывать!

##### <a id="p100191"></a>2.3.12 Метилирование аналитического стандарта и анализируемого образца

<a id="p100192"></a>К остатку, полученному после превращения стандартного раствора изоксафлютола в RPA 203328, к сухому остатку при анализе образцов, в концентраторы добавляют 2 мл эфирного раствора диазометана и выдерживают смесь при комнатной температуре 30 мин. Эфир отдувают прохладным воздухом досуха.
<a id="p100193"></a>2.3.13. Модификация аналитического стандарта изоксафлютола для построения калибровочного графика и калибровки прибора перед анализом серии образцов
<a id="p100194"></a>Отбирают 1 мл стандартного раствора изоксафлютола N 2 (10 мкг/мл) в концентратор и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 10 мл этанола, добавляют 2%-ный раствор гидроксида натрия до рН 9,0 - 10,0 и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. При этом изоксафлютол гидролизуется до RPA 202248. По истечении срока в концентратор добавляют 8 - 10 мл дистиллированной воды и упаривают спирт на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С до водного остатка.
<a id="p100195"></a>Водную фракцию переносят в делительную воронку, добавляют 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия и 70 мл дистиллированной воды, подкисляют до рН <= 1 концентрированной соляной кислотой (~ 2 мл) и трижды экстрагируют RPA 202248 хлористым метиленом порциями по 50 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
<a id="p100196"></a>Сухой остаток из концентратора переносят в мерную пробирку с притертой пробкой, тщательно обмывая концентратор тремя порциями диэтилового эфира по 5 мл. Эфир упаривают в токе теплого воздуха. В пробирку добавляют 5 мл 1 М раствора гидроксида натрия в метаноле и растворяют сухой остаток, выдерживая пробирку в ультразвуковой ванне в течение 2 мин., после чего пробирку плотно закрывают и нагревают в песчаной бане в течение 1 ч при температуре 110 °С (недопустимо присутствие воды, т.к. любое ее количество ингибирует метанолиз). По истечении срока пробирку охлаждают до комнатной температуры. В остывшую пробирку добавляют 5 мл дистиллированной воды и переносят содержимое в делительную воронку. Пробирку ополаскивают водой еще 3 раза по 5 мл. Водную фазу подкисляют до рН <= 1 концентрированной соляной кислотой (~ 2 мл), добавляют 6 г хлористого натрия и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 15 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
<a id="p100197"></a>Сухой остаток метилируют, следуя [пункту 2.3.12.](#p100191)
<a id="p100198"></a>После метилирования сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл гексана, раствор переносят в мерную колбу объемом 10 мл, обмывая концентратор гексаном, и доводят объем колбы до метки гексаном. Концентрация полученного раствора соответствует 1 мкг изоксафлютола в 1 мл. Методом последовательного разведения гексаном готовят растворы с концентрацией изоксафлютола 1,0; 0,5; 0,25; 0,1 мкг/мл. Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 2 мкл каждого из полученных четырех растворов, измеряют высоту пиков, рассчитывают среднее значение высоты пика для каждой концентрации и строят график зависимости высоты пика от концентрации изоксафлютола (мкг/мл).
<a id="p100199"></a>Указанные в [п. 2.3.13](#p100193) операции проводят перед постановкой методики в лаборатории и при анализе очередной серии образцов воды.


### <a id="p100200"></a>2.4. Отбор проб


<a id="p100201"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна кукурузы в початках подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Замороженные образцы зеленой массы хранят в морозильной камере при температуре не выше 18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Початки обрушивают, зерно измельчают на лабораторной мельнице.


### <a id="p100202"></a>2.5. Описание определения



##### <a id="p100203"></a>2.5.1 Вода


###### <a id="p100204"></a>2.5.1.1 Высокоэффективная жидкостная хроматография.

<a id="p100205"></a>Пробу воды объемом 200 мл помещают в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 1,0 мл концентрированной соляной кислоты и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 50 мл, интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. После разделения фаз в воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия, осушитель обмывают еще 10 мл этилацетата и объединяют с экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,0 мл смеси: ацетонитрил + 0,2%-ный раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 80:20 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.

###### <a id="p100206"></a>2.5.1.2 Газожидкостная хроматография.

<a id="p100207"></a>Образец воды объемом 100 мл помещают в коническую колбу на 250 мл, добавляют 2%-ный водный раствор гидроксида натрия до рН 9 - 10 (~ 2,5 мл) и помещают на механический встряхиватель на 1 ч. После встряхивания воду переносят в делительную воронку, добавляют 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия, подкисляют до рН <= 1 концентрированной соляной кислотой (~ 2 мл) и трижды экстрагируют RPA 202248 хлористым метиленом порциями по 50 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
<a id="p100208"></a>Сухой остаток из концентратора переносят в мерную пробирку с притертой пробкой, тщательно обмывая концентратор тремя порциями диэтилового эфира по 5 мл. Эфир упаривают в токе теплого воздуха. В пробирку добавляют 5 мл 1 М раствора гидроксида натрия в метаноле и растворяют сухой остаток, выдерживая пробирку в ультразвуковой ванне в течение 2 мин., после чего пробирку плотно закрывают и нагревают в песчаной бане в течение 1 ч при температуре 110 °С (недопустимо присутствие воды, т.к. любое ее количество ингибирует метанолиз). По истечении срока пробирку охлаждают до комнатной температуры. В остывшую пробирку добавляют 5 мл дистиллированной воды и переносят содержимое в делительную воронку. Пробирку ополаскивают водой еще 3 раза по 5 мл. Водную фазу подкисляют до рН <= 1 концентрированной соляной кислотой (~ 2 мл), добавляют 6 г хлористого натрия и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 15 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
<a id="p100209"></a>Сухой остаток метилируют, следуя [пункту 2.3.12.](#p100191)
<a id="p100210"></a>После метилирования сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл гексана и 2 мкл раствора вводят в хроматограф.

##### <a id="p100211"></a>2.5.2 Почва

<a id="p100212"></a>2.5.2.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец почвы массой 50 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, добавляют 20 мл дистиллированной воды, встряхивают колбу до полного смешивания и дают выстояться в течение 10 мин. Затем в колбу прибавляют 100 мл ацетонитрила и экстрагируют изоксафлютол и RPA 202248 на встряхивателе в течение 30 мин. Полученную смесь центрифугируют и супернатант фильтруют в делительную воронку объемом 250 мл через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя 100 и 75 мл ацетонитрила и экстрагируя на встряхивателе по 30 мин. с обязательным центрифугированием. Экстракты фильтруют и объединяют в делительной воронке объемом 250 мл. К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 30 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают, нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще раз 30 мл гексана. Гексан отбрасывают. Ацетонитрил собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия, осушитель промывают 10 мл ацетонитрила, объединяют смыв с экстрактом и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100213"></a>Сухой остаток растворяют в 3 мл ацетона, добавляют 30 мл дистиллированной воды, 1,5 - 2,0 мл 2%-ного раствора едкого натра (до рН 9), 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку. Полученную смесь выдерживают в течение 20 мин. при комнатной температуре. Экстракт в делительной воронке трижды промывают гексаном порциями по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку. RPA 202248 трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний этилацетатный экстракт собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

###### <a id="p100214"></a>2.5.2.2 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак-Диол.

<a id="p100215"></a>Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 1 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор наносят на картридж. Концентратор тщательно обмывают 2 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50:50, и смесь также вносят на картридж. Картридж промывают последовательно 10 мл гексана и 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50:50 со скоростью 2 мл/мин. Элюат отбрасывают. RPA 202248 элюируют с картриджа 10 мл метанола, элюат упаривают досуха при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в смеси: ацетонитрил + 0,2%-ный водный раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 80:20 и аликвоту объемом 20 мкл вводят в хроматограф.

##### <a id="p100216"></a>2.5.3 Зерно кукурузы

<a id="p100217"></a>2.5.3.1 Экстракция и предварительная очистка. Образец размолотого зерна массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 50 мл ацетонитрила и экстрагируют изоксафлютол и его метаболит в гомогенизаторе в течение 3 мин. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила и гомогенизируя в течение одной минуты. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 мл, отфильтровывая их через фильтр "красная лента". К объединенному экстракту добавляют 30 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают, нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще раз 30 мл гексана. Гексан отбрасывают. Ацетонитрил собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия, осушитель промывают 10 мл ацетонитрила, объединяют смыв с экстрактом и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100218"></a>Сухой остаток растворяют в 3 мл ацетона, добавляют 30 мл дистиллированной воды, 1,5 - 2,0 мл 2%-ного раствора едкого натра (до рН 9), 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку. Полученную смесь выдерживают в течение 20 мин. при комнатной температуре. Экстракт в делительной воронке трижды промывают гексаном порциями по 20 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Каждый раз после полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку, прибавляют туда 30 мл хлороформа. Делительную воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний хлороформовый слой отбрасывают. RPA 202248 трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний этилацетатный слой собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

###### <a id="p100219"></a>2.5.3.2 Очистка экстракта на картридже Sep-Pak Diol (2 ОН) (5 г).

<a id="p100220"></a>Сухой остаток растворяют в 2,5 мл ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 2,5 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Картридж промывают последовательно 20 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 50:50 и 10 мл метанола со скоростью 2 мл/мин. Элюаты отбрасывают. RPA 202248 элюируют с картриджа 10 мл метанола с той же скоростью, элюат упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в смеси: ацетонитрил + 0,2%-ный водный раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 80:20 и аликвоту объемом 20 мкл вводят в хроматограф.
<a id="p100221"></a>Возможна замена этой процедуры на очистку по [п. 2.5.2.2.](#p100214)

##### <a id="p100222"></a>2.5.4 Зеленая масса кукурузы

<a id="p100223"></a>2.5.4.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец зеленой массы весом 10 г измельчают, помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 75 мл ацетонитрила и встряхивают на встряхивателе в течение 15 мин. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл ацетонитрила и экстрагируя на встряхивателе по 15 мин. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 мл через фильтр "красная лента". К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл насыщенного раствора хлористого натрия и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний водный слой отбрасывают. К экстракту в делительной воронке добавляют 30 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают, нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще раз 30 мл гексана, гексан отбрасывают. Ацетонитрил собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия, осушитель промывают 10 мл ацетонитрила, объединяют смыв с экстрактом и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100224"></a>Сухой остаток растворяют в 3 мл ацетона, добавляют 30 мл дистиллированной воды, 1,5 - 2,0 мл 2%-ного раствора едкого натра (до рН 9), 20 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку. Полученную смесь выдерживают в течение 20 мин. при комнатной температуре. Экстракт трижды промывают гексаном порциями по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку, прибавляют туда 1,5 мл 2%-ного раствора едкого натра (до рН 9) и 30 мл хлороформа. Делительную воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний хлороформовый слой отбрасывают. К водному остатку добавляют еще 30 мл хлороформа и процедуру повторяют, хлороформ отбрасывают. RPA 202248 трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний этилацетатный экстракт собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

###### <a id="p100225"></a>2.5.4.2 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак-Диол.

<a id="p100226"></a>Далее поступают, как указано в [п. 2.5.2.2.](#p100214)


### <a id="p100227"></a>2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов



##### <a id="p100228"></a>2.6.1 Условия хроматографирования для метода ВЭЖХ

<a id="p100229"></a>Хроматограф "Уотерс" или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
<a id="p100230"></a>Колонка стальная Zorbax SB-C18, 4,6 мм х 25 см.
<a id="p100231"></a>Температура колонки: 25 °С.
<a id="p100232"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,2%-ный водный раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 50:50 (по объему).
<a id="p100233"></a>Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
<a id="p100234"></a>Рабочая длина волны: 300 нм.
<a id="p100235"></a>Чувствительность: 0,0025 ед. оптической плотности на шкалу.
<a id="p100236"></a>Объем вводимой пробы: 20 мкл.
<a id="p100237"></a>Время удерживания: изоксафлютола - 13,1 - 13,2 мин.; RPA 202248 - 9,9 - 11,0 мин.
<a id="p100238"></a>Линейный диапазон детектирования: 4 - 40 нг.

##### <a id="p100239"></a>2.6.2 Условия хроматографирования для метода ГЖХ

<a id="p100240"></a>    Хроматограф   "Цвет-550М"  с  детектором  постоянной  скорости
рекомбинации ионов с пределом детектирования по  Линдану  не  выше
      -14
4 х 10    г/куб. см.
                                         10           10
<a id="p100241"></a>    Рабочая  шкала  электрометра  64 х 10   и  32 х 10  . Скорость
движения ленты самописца 200 мм/ч.
<a id="p100242"></a>Колонка стеклянная, спиральная, длина 2 м, внутренний диаметр 2 мм. Носитель Газохром-Q, размер частиц 0,200 - 0,250 мм, неподвижная фаза 5% OV-210.
<a id="p100243"></a>Температура испарителя - 280 °С, термостата колонки - 190 °С, детектора - 340 °С.
<a id="p100244"></a>Газовый режим: азот - 30 мл/мин.
<a id="p100245"></a>Абсолютное время удерживания RPA 204248 - 4 мин. 06 сек.
<a id="p100246"></a>Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,2 - 2,0 нг.
<a id="p100247"></a>Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
<a id="p100248"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют.

##### <a id="p100249"></a>2.6.3 Обработка результатов анализа

<a id="p100250"></a>Содержание изоксафлютола рассчитывают по формуле:

                        S   х A х V
                         пр
<a id="p100251"></a>                   Х = ------------- х Р,
                       100 х S   х m
                              ст

    где:
    Х - содержание изоксафлютола в пробе, мг/кг или мг/л;
    S   - высота (площадь) пика стандарта, мм;
     ст
    S   - высота (площадь) пика образца, мм;
     пр
    А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
    V  - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
    m - масса анализируемого образца, г (мл);
    Р  -  содержание  изоксафлютола или RPA 202248 в аналитическом
стандарте, %.


## 3. <a id="p100252"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100253"></a>Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.


## 4. <a id="p100254"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100255"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95.](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95) ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".


## 5. <a id="p100256"></a>Разработчики


<a id="p100257"></a>Калинин В.А., Калинина Т.С., Довгилевич Е.В., Довгилевич А.В., Осипенкова О.В.
<a id="p100258"></a>Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1, УНКЦ "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". Телефон/факс: 976-43-26.



<a id="p100259"></a>

---