---
title: "\"МУК 4.1.1217-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлубензурона в воде, почве, пастбищных травах и люцерне методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1217-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1217-03"
---

## "МУК 4.1.1217-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлубензурона в воде, почве, пастбищных травах и люцерне методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1217-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлубензурона в воде, почве, пастбищных травах и люцерне методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Минздравом России 16.03.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

16 марта 2003 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИФЛУБЕНЗУРОНА**
**В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ПАСТБИЩНЫХ ТРАВАХ И ЛЮЦЕРНЕ МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1217-03**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 июля 2003 года

1. <a id="p100006"></a>Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. А.В. Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.
2. <a id="p100007"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены с 1 июля 2003 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100011"></a>Вводная часть


<a id="p100012"></a>Фирма производитель: Uniroyal Chemical Ltd (Великобритания).
<a id="p100013"></a>Торговое наименование: Димилин.
<a id="p100014"></a>Действующее вещество: дифлубензурон.
<a id="p100015"></a>1 -(4-хлорфенил)-3-(2,6-дифторбензоил)мочевина (IUPAC).
<a id="p100016"></a>N - {[(4-хлорфенил)амино]карбонил}-2,6-дифторбензамид (С.А.).

<a id="p100017"></a>Структурная формула: (не приводится).
<a id="p100018"></a>    Эмпирическая формула C  H ClF N O .
                          14 9   2 2 2
<a id="p100019"></a>    Мол. масса: 310,7.
<a id="p100020"></a>    Бесцветное  кристаллическое  вещество (технический - кристаллы
от белых до желтых).
<a id="p100021"></a>    Температура плавления: 228 °С (техн.: 210 - 230 °С).
                                      -4
<a id="p100022"></a>    Давление паров при 25 °С: 1,2 х 10   мПа.
<a id="p100023"></a>    Коэффициент распределения н-октанол/вода: K   log P = 3,89.
                                               ow
<a id="p100024"></a>    Растворимость  (г/л)  при  20  °С:  н-гексан - 0,063, толуол -
0,29, дихлорметан - 1,8, метанол - 1,1, вода - 0,08 мг/л (при рН 7
и 25 °С).
<a id="p100025"></a>    Вещество  стабильно  в  кислых средах (20 °С, рН 5 - 7, DT   >
                                                              50
150  дней),  разлагается  в  щелочных  растворах (при рН 9 DT   42
                                                             50
дня).
<a id="p100026"></a>Гигиенические нормативы:
<a id="p100027"></a>ОДК в почве - 0,2 мг/кг;
<a id="p100028"></a>ПДК в воде водоемов - 0,01 мг/куб. дм.
<a id="p100029"></a>Область применения препарата. Дифлубензурон используется для уничтожения широкого диапазона насекомых-вредителей, питающихся листьями лесных и плодовых деревьев, а также плодами.
<a id="p100030"></a>Уничтожает некоторых главных вредителей хлопка, бобов, сои, цитрусовых, чая, овощных культур и грибов. Также позволяет уничтожать личинки летающих насекомых, в т.ч. москитов, кузнечиков и миграционной саранчи. Эффективен против яблоневой плодожорки, американской белой бабочки, листоверток и др.


## 2. <a id="p100031"></a>Методика определения дифлубензурона в воде, почве, пастбищных травах и люцерне методом ВЭЖХ



### <a id="p100032"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100033"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100034"></a>Методика основана на определении дифлубензурона методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами, а также на колонке с силикагелем.


##### <a id="p100035"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100036"></a>Метрологическая характеристика метода представлена в [табл. 1](#p100038), [2](#p100045).

<a id="p100037"></a>Таблица 1

<a id="p100038"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**


| Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % (для каждого объекта, n = 24) | Относительное стандартное отклонение S, % | Доверительный интервал среднего, n = 24, Р = 0,95 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Вода | 0,0005 | 0,0005 - 0,002 | 93,1 | 5,22 | 2,09 |
| Почва | 0,01 | 0,01 - 0,4 | 86,1 | 6,38 | 2,55 |
| Пастбищные травы | 0,01 | 0,01 - 0,4 | 84,0 | 6,08 | 2,43 |
| Люцерна | 0,01 | 0,01 - 0,4 | 87,8 | 7,27 | 2,91 |


<a id="p100044"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100045"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИФЛУБЕНЗУРОНА В ВОДЕ,**<br>
**ПОЧВЕ, ПАСТБИЩНЫХ ТРАВАХ И ЛЮЦЕРНЕ (N = 6**

</div>

**ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**


<table>
<colgroup><col width="17%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="18%"><col width="22%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Внесено, мг/кг</td><td>Найдено, мг/кг</td><td>Стандартное отклонение, S +/-</td><td>Доверительный интервал, % (Р = 0,95, n = 6)</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Вода</td><td>0,0005</td><td>0,00047</td><td>-5 2,07 х 10</td><td>3,31</td><td>94,3</td></tr>
<tr><td>0,001</td><td>0,00093</td><td>-5 5,63 х 10</td><td>4,50</td><td>92,5</td></tr>
<tr><td>0,002</td><td>0,00185</td><td>-4 1,29 х 10</td><td>5,16</td><td>92,7</td></tr>
<tr><td>0,005</td><td>0,00465</td><td>-4 2,33 х 10</td><td>3,73</td><td>93,0</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>93,1</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Почва</td><td>0,01</td><td>0,0084</td><td>-4 4,97 х 10</td><td>3,98</td><td>84,1</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0171</td><td>-4 8,80 х 10</td><td>3,52</td><td>85,6</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0353</td><td>-3 3,14 х 10</td><td>6,28</td><td>88,3</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0864</td><td>-3 8,29 х 10</td><td>6,63</td><td>86,4</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>86,1</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Пастбищные травы</td><td>0,01</td><td>0,0084</td><td>-4 7,94 х 10</td><td>6,35</td><td>88,7</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0156</td><td>-4 7,72 х 10</td><td>3,09</td><td>78,1</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0337</td><td>-3 2,41 х 10</td><td>4,82</td><td>84,3</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0849</td><td>-3 6,48 х 10</td><td>5,18</td><td>84,9</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>84,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Люцерна</td><td>0,01</td><td>0,0088</td><td>-4 7,68 х 10</td><td>6,15</td><td>88,3</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0175</td><td>-3 1,39 х 10</td><td>5,56</td><td>87,4</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0362</td><td>-3 2,78 х 10</td><td>5,56</td><td>90,5</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0850</td><td>-3 7,50 х 10</td><td>6,00</td><td>85,0</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>87,8</td></tr>
</table>



##### <a id="p100067"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100068"></a>Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.


### <a id="p100069"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100070"></a>Ацетон, ч.д.а ГОСТ 2603-79
<a id="p100071"></a>Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или х.ч.   ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100072"></a>Бикарбонат натрия, х.ч. [ГОСТ 4201-79](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79)
<a id="p100073"></a>Бумажные фильтры "красная лента"           ТУ 6.091678-86
<a id="p100074"></a>Вода бидистиллированная, деионизированная ГОСТ 6709-72
Дифлубензурон, аналитический стандарт с
содержанием д. в. 99,9%
<a id="p100075"></a>Дихлорметан, х.ч.                          ТУ 2631-019-44493179-98
<a id="p100076"></a>Диэтиловый эфир, ч.                        ОСТ 84-2006-88
<a id="p100077"></a>Железо (II) серно-кислое, х.ч. [ГОСТ 4148-78](https://bukva.ai/docs/gost-4148-78)
<a id="p100078"></a>Калий углекислый, х.ч. [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76)
<a id="p100079"></a>Калия перманганат ГОСТ 20490-75
<a id="p100080"></a>Кальция хлорид, х.ч.                       ГОСТ 4161-77
<a id="p100081"></a>Кислота ортофосфорная, имп. (Ferak,
Германия) или х.ч. ГОСТ 6552-80
<a id="p100082"></a>Кислота серная, х.ч. ГОСТ 4204-77
<a id="p100083"></a>Натрий серно-кислый безводный, ч.
свежепрокаленный [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100084"></a>Натрий хлористый, ч.д.а ГОСТ 4233-77
<a id="p100085"></a>Натрия гидроксид, х.ч. ГОСТ 4328-77
<a id="p100086"></a>н-Гексан, х.ч., свежеперегнанный           ТУ 2631-003-05807999-98
<a id="p100087"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь
ацетонитрил - вода (56:44, по объему)
<a id="p100088"></a>Силикагель для колоночной хроматографии
Л 40/100 мю m (Chemapol, Чехословакия)
Стекловата
<a id="p100089"></a>Флорисил 150 - 250 мю m (Merck, Германия)
<a id="p100090"></a>Фосфора пентоксид, ч.                      МРТУ 6-09-5759-69
<a id="p100091"></a>Элюент N 1 для колоночной хроматографии:
смесь гексан - диэтиловый эфир (80:20, по
объему)
<a id="p100092"></a>Элюент N 2 для колоночной хроматографии:
смесь гексан - диэтиловый эфир (55:45, по
объему).


### <a id="p100093"></a>2.3. Приборы и посуда


<a id="p100094"></a>Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters"
с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный
дегазатором, автоматическим пробоотборником и
термостатом колонки, или аналогичный
<a id="p100095"></a>Колонка Symmetry-С18 (250 х 4,6 мм), зернение
5 мкм (Waters, USA), или аналогичная
<a id="p100096"></a>Предколонка Waters Symmetry С18
<a id="p100097"></a>Весы аналитические ВЛА-200                         ГОСТ 34104-80Е
или аналогичные
<a id="p100098"></a>Установка ультразвуковая "Серьга"                  ТУ 3.836.008
<a id="p100099"></a>Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная
зерновая ЛМЗ                                       ТУ 1-01-0593-79
<a id="p100100"></a>Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М             ТУ 25-11-917-74
или аналогичный
<a id="p100101"></a>Бидистиллятор
<a id="p100102"></a>Насос водоструйный                                 МРТУ 42 861-64
<a id="p100103"></a>Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС        ГОСТ 10384-72
<a id="p100104"></a>Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС         ГОСТ 10384-72
<a id="p100105"></a>Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
<a id="p100106"></a>Воронки делительные ВД-3-500                       ГОСТ 8613-75
<a id="p100107"></a>Цилиндры мерные на 100, 250 и 1000 куб. см         ГОСТ 1774-74
<a id="p100108"></a>Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 куб. см         ГОСТ 1770-74
<a id="p100109"></a>Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см                     ГОСТ 22292-74.


### <a id="p100110"></a>2.4. Отбор проб


<a id="p100111"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы растительных материалов хранятся до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, пробы пастбищных трав и люцерны измельчают на лабораторной мельнице. Пробы воды хранят при температуре не выше 4° С в течение 3 суток, при температуре -18 °С - в течение месяца.


### <a id="p100112"></a>2.5. Подготовка к определению



##### <a id="p100113"></a>2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей

<a id="p100114"></a>Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего их сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
<a id="p100115"></a>Диэтиловый эфир (1 л) предварительно встряхивают с 20 мл свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа в 55 мл воды с добавлением 1,5 г концентрированной серной кислоты).
<a id="p100116"></a>Затем диэтиловый эфир последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
<a id="p100117"></a>    Ацетон  перегоняют  над  перманганатом калия и поташем (на 1 л
ацетона 10 г KMnO  и 2 г K CO ).
                 4        2  3
<a id="p100118"></a>Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.


##### <a id="p100119"></a>2.5.2 Кондиционирование колонки

<a id="p100120"></a>Перед началом анализа колонку Symmetry-C18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 ч.


##### <a id="p100121"></a>2.5.3 Приготовление растворов

<a id="p100122"></a>    Для приготовления  0,02 М  раствора  ортофосфорной кислоты 2 г
98%-ной  (или  2,25  г  87%-ной)  кристаллической H PO  помещают в
                                                   3  4
мерную  колбу  объемом  1  л, растворяют в 600 мл дистиллированной
воды   и  доводят  объем  до  метки  дистиллированной  водой.  Для
приготовления   0,1 М  раствора   NaHCO   9,3  г  кристаллического
                                       3
бикарбоната  натрия помещают в мерную колбу на 1 л, растворяют при
перемешивании  в  600  мл  дистиллированной  воды  и доводят объем
раствора  до метки. Для получения 50%-ного водного ацетона в колбе
емкостью  1  л  смешивают 500 мл ацетона с 500 мл дистиллированной
воды,  используя мерные цилиндры. Для приготовления подвижной фазы
смешивают  560  мл ацетонитрила с 440 мл бидистиллированной воды в
колбе  на  1000 мл, смесь фильтруют, при необходимости дегазируют.
Для  приготовления элюента N 1 в колбе на 1000 мл смешивают 800 мл
н-гексана  и 200 мл диэтилового эфира. Для приготовления элюента N
2  в  колбе  на  1000  мл  смешивают  550  мл  н-гексана  и 450 мл
диэтилового  эфира. Для приготовления 20%-ного раствора хлористого
натрия  20 г кристаллического NaCl помещают в мерную колбу на 1 л,
растворяют  при  перемешивании  в  800  мл дистиллированной воды и
доводят объем раствора до метки.


##### <a id="p100123"></a>2.5.4 Приготовление стандартного и градуировочных растворов

<a id="p100124"></a>Берут точную навеску дифлубензурона (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил - бидистиллированная вода, 56:44, по объему). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.


##### <a id="p100125"></a>2.5.5 Построение градуировочного графика

<a id="p100126"></a>Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация дифлубензурона в растворе) в хроматограф вводят по 20 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе (мкг/мл).


##### <a id="p100127"></a>2.5.6 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

<a id="p100128"></a>В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан - диэтиловый эфир (80:20, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой флорисила высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан - диэтиловый эфир (55:45, по объему) и 30 мл смеси гексан - диэтиловый эфир (80:20, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.


##### <a id="p100129"></a>2.5.7 Проверка хроматографического поведения дифлубензурона на колонке с силикагелем

<a id="p100130"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора дифлубензурона с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл элюента N 1, затем 40 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ [(п. 2.5.3)](#p100121) и анализируют на содержание дифлубензурона по [п. 2.6.5](#p100149).
<a id="p100131"></a>Фракции, содержащие дифлубензурон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по [п. 2.6.5](#p100149). Рассчитывают содержание дифлубензурона в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
<a id="p100132"></a>Примечание: Профиль вымывания дифлубензурона может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.


##### <a id="p100133"></a>2.5.8 Подготовка приборов и средств измерения

<a id="p100134"></a>Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.


### <a id="p100135"></a>2.6. Проведение определения



##### <a id="p100136"></a>2.6.1 Определение дифлубензурона в воде

<a id="p100137"></a>К образцу предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл добавляют 10 г NaCl и перемешивают до растворения соли. Полученный раствор переносят в делительную воронку емкостью 250 мл и экстрагируют дифлубензурон гексаном трижды порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз в течение 2 - 3 мин. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 - 15 мл гексана. После этого экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С.
<a id="p100138"></a>Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.


##### <a id="p100139"></a>2.6.2 Определение дифлубензурона в почве

<a id="p100140"></a>Образец воздушно-сухой почвы массой 10 г помещают в коническую колбу емкостью 250 мл с притертой пробкой, добавляют 40 мл 50%-ного водного ацетона и экстрагируют в течение 15 мин. на ультразвуковой бане. Суспензию фильтруют на стеклянной воронке через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют дважды с 30 мл 50%-ного водного ацетона. Объединенные экстракты упаривают до водного остатка (50 - 55 мл) на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С.
<a id="p100141"></a>Водный остаток переносят в делительную воронку объемом 250 мл, добавляют 50 мл 20%-ного раствора NaCl и дифлубензурон экстрагируют гексаном трижды по 30 мл, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 - 3 мин. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 - 15 мл гексана. Полученный раствор упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [пункту 2.6.4](#p100147).
<a id="p100142"></a>Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.


##### <a id="p100143"></a>2.6.3 Определение дифлубензурона в пастбищных травах и люцерне

<a id="p100144"></a>Навеску массой 10 г измельченных на ножевой мельнице пастбищных трав или люцерны помещают в коническую колбу емкостью 100 мл и экстрагируют дифлубензурон 40 мл водного ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют дважды порциями по 30 мл. Объединенный экстракт концентрируют на роторном испарителе при температуре 40 °С до объема 50 - 55 мл.
<a id="p100145"></a>Дифлубензурон переэкстрагируют трижды хлористым метиленом порциями по 30 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2 - 3 мин. Верхний водный слой отбрасывают. Объединенный экстракт промывают в делительной воронке трижды 0,1 М раствором бикарбоната натрия порциями по 30 мл и один раз 50 мл 0,02 М раствора ортофосфорной кислоты, встряхивая воронку в течение 2 - 3 мин. (при всех промывках верхний водный слой отбрасывают). Органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 - 15 мл хлористого метилена. Полученный раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [пункту 2.6.4](#p100147).
<a id="p100146"></a>*Примечание.* Для высушенных растительных проб целесообразно проводить экстракцию дифлубензурона тремя порциями дихлорметана по 30 мл каждая на ультразвуковой бане (продолжительность каждой экстракции - 15 мин.), минуя стадию переэкстракции из водного раствора.


##### <a id="p100147"></a>2.6.4 Очистка на колонке с силикагелем

<a id="p100148"></a>Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. п. 2.6.2](#p100139) и [2.6.3](#p100143) экстрактов растительного материала или почвы, количественно переносят тремя 3-миллилитровыми порциями смеси гексан - диэтиловый эфир (80:20, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку [(п. 2.5.6)](#p100127). Промывают колонку 50 мл элюента N 1, который отбрасывают. Дифлубензурон элюируют 40 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 50 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.


##### <a id="p100149"></a>2.6.5 Условия хроматографирования

<a id="p100150"></a>Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки, или другой с аналогичными характеристиками.
<a id="p100151"></a>Колонка Symmetry-С18 (250 х 4,6 мм), зернение 5 мкм (Waters, USA), или аналогичная.
<a id="p100152"></a>Температура колонки 30 °С.
<a id="p100153"></a>Предколонка Waters Symmetry-C18 для защиты аналитической колонки.
<a id="p100154"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода в соотношении 56:44 (по объему).
<a id="p100155"></a>Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
<a id="p100156"></a>Рабочая длина волны 260 нм.
<a id="p100157"></a>Объем вводимой пробы 20 мкл. Время удерживания дифлубензурона (11,6 +/- 0,1) мин.
<a id="p100158"></a>Линейный диапазон детектирования 0,05 - 2,00 мкг/мл.


##### <a id="p100159"></a>2.6.6 Обработка результатов анализа

    Количественное   определение   проводят   методом   абсолютной
градуировки,  содержание  дифлубензурона в образце воды, почвы или
растений (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:

                             S  х C х V
                              2
<a id="p100160"></a>                         Х = ----------,
                               S  х P
                                1
    где:
    S   -  площадь  пика  дифлубензурона  в стандартном  растворе,
     1
кв. мм;
    S   -  площадь  пика  дифлубензурона  в  анализируемой  пробе,
     2
кв. мм;
    V   -  объем  пробы,  подготовленной  для  хроматографического
анализа, мл;
    Р - навеска анализируемого образца, г (для воды - объем, мл);
    С - концентрация стандартного раствора дифлубензурона, мкг/мл.
<a id="p100161"></a>Содержание остаточных количеств дифлубензурона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.
<a id="p100162"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор дифлубензурона 2 мкг/мл, разбавляют.


## 3. <a id="p100163"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100164"></a>При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования до 400 В.


## 4. <a id="p100165"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100166"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95) "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".


## 5. <a id="p100167"></a>Разработчики


<a id="p100168"></a>Юзихин О.С, Черменская Т.Д., Цибульская И.А., Долженко В.И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений. 196608, Санкт-Петербург, Пушкин, шоссе Подбельского, д. 3. Телефон: 470-41-98.



<a id="p100169"></a>

---