---
title: "\"МУК 4.1.1213-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воде, почве, в плодах огурцов, томатов, ягодах винограда, в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1213-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1213-03"
---

## "МУК 4.1.1213-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воде, почве, в плодах огурцов, томатов, ягодах винограда, в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1213-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воде, почве, в плодах огурцов, томатов, ягодах винограда, в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Минздравом России 16.03.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

16 марта 2003 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЗОКСИСТРОБИНА**
**(ICIA 5504) И ЕГО ГЕОМЕТРИЧЕСКОГО ИЗОМЕРА (R-230310) В ВОДЕ,**
**ПОЧВЕ, В ПЛОДАХ ОГУРЦОВ, ТОМАТОВ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, В ЗЕРНЕ**
**И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1213-03**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 июля 2003 года

1. <a id="p100006"></a>Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методики указаны в конце.
2. <a id="p100007"></a>Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены с 1 июля 2003 г.
5. <a id="p100010"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100011"></a>Вводная часть


<a id="p100012"></a>Фирма-производитель: Сингента АГ, Швейцария.
<a id="p100013"></a>Торговое название: Амистар Ф, СК (250 г/л), ICIA 5504, AZ5504.
<a id="p100014"></a>Название действующего вещества по ИСО: Азоксистробин.
<a id="p100015"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: метил (Е)-2-{2-[6-(2-циано-фенокси)пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат.
<a id="p100016"></a>Структурная формула: (не приводится).
<a id="p100017"></a>    Эмпирическая формула: C  H  N  O .
                           22 17 33 5
<a id="p100018"></a>Молекулярная масса: 403,4.
<a id="p100019"></a>Химически чистый Азоксистробин представляет собой бесцветное кристаллическое вещество без запаха.
                           -13
<a id="p100020"></a>    Давление паров 1,1 х 10   .
<a id="p100021"></a>Температура плавления 166 °С.
<a id="p100022"></a>Коэффициент распределения н-октанол-вода: Ko/w = 440, lg P o/w = 2,64.
<a id="p100023"></a>Растворимость в воде зависит от кислотности среды и составляет при 25 °С 6,2 (рН 5,2), 6,7 (рН 7,0), 5,9 (рН 9,2) мг/л.
<a id="p100024"></a>Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): ацетон - 86, ацетонитрил - 340, гексан - 0,057, дихлорметан - 400, метанол - 20, толуол - 55, этилацетат - 130, н-октанол - 1,40 г/л.
<a id="p100025"></a>Азоксистробин стабилен в водных растворах при рН 3 - 10 при комнатной температуре, в т.ч. при концентрациях менее 1 мкг/кг.
<a id="p100026"></a>Период полураспада в почве в полевых условиях от 3 до 39 дней. Основным путем разложения вещества в почве является фотолиз с образованием геометрического Z-изомера.
<a id="p100027"></a>    Краткая  гигиеническая характеристика: Азоксистробин относится
к  мало опасным  веществам по острой  оральной (ЛД   /крысы/ свыше
                                                  50
5000   мг/кг)   и    дермальной   (ЛД   /крысы/ свыше 2000  мг/кг)
                                     50
токсичности,  но  умеренно  опасным по ингаляционной (ЛД   /крысы/
                                                         50
0,698   -   0,962   мг/кг)   токсичности.  Не  обладает  побочными
токсикологическими эффектами, может вызвать слабое раздражение при
попадании на кожу и слизистую оболочку глаз.
<a id="p100028"></a>В России для Азоксистробина установлены следующие гигиенические нормативы:
<a id="p100029"></a>ДСД - 0,003 мг/кг массы тела человека;
<a id="p100030"></a>ПДК в воде - 0,01 мг/л;
<a id="p100031"></a>ОДК в почве - 0,4 мг/кг;
<a id="p100032"></a>МДУ в винограде, огурцах и томатах - 0,2 мг/кг;
<a id="p100033"></a>ВМДУ в зерне хлебных злаков - 0,2 мг/кг.
<a id="p100034"></a>Область применения: Азоксистробин - фунгицид из группы стробилуринов системного и контактного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и мучнистой настоящей росы, в т.ч. против рас возбудителя, устойчивых к Металаксилу и производным триазола. Зарегистрирован в России и странах СНГ в качестве фунгицида на томатах и огурцах открытого и защищенного грунта с нормой расхода 25% суспензионного концентрата 0,4 - 0,6 л/га, а также на виноградниках с нормой расхода 0,6 - 0,8 л/га при 1 - 2 - кратной обработке. Проходит регистрационные испытания на зерновых колосовых культурах с нормой расхода при двукратной обработке посевов до 1,0 л препарата на гектар.

<a id="p100035"></a>R-230310 - Z-геометрический изомер Азоксистробина.
<a id="p100036"></a>Название действующего вещества по ИСО: метил (Z)-2-{2-[6-(2-цианофенокси)-пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат.
<a id="p100037"></a>Структурная формула: (не приводится).
<a id="p100038"></a>R-230310 представляет собой кристаллический порошок желтого цвета.
<a id="p100039"></a>Физико-химические свойства близки к таковым Азоксистробина.
<a id="p100040"></a>Основной метаболит в процессе фотолиза основного вещества.
<a id="p100041"></a>Данные по токсикологии вещества фирмой не представлены.


## 2. <a id="p100042"></a>Методика определения Азоксистробина и его геометрического изомера в воде, почве, плодах огурцов и томатов, ягодах винограда, в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии



### <a id="p100043"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100044"></a>2.1.1 Принцип метода


<a id="p100045"></a>Методика основана на определении Азоксистробина и его геометрического изомера методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием ультрафиолетового детектора после их экстракции из образцов органическим растворителем, концентрирования экстракта упариванием в вакууме, переэкстракции и очистки на колонках с Флорисилом или концентрирующих патронах Диапак С, Диапак С8 и Диапак-Амин. Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.


##### <a id="p100046"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода


<a id="p100047"></a>Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 - 4.

<div align="right">

<a id="p100048"></a>Таблица 1

</div>


<a id="p100049"></a>**АЗОКСИСТРОБИН**


<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="14%"><col width="17%"><col width="15%"><col width="18%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый</td><td colspan="5">Метрологические параметры, p = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>объект</td><td>предел обнаружения, мг/кг (мг/л)</td><td>диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л)</td><td>среднее значение определения, %</td><td>стандартное отклонение, S</td><td>доверительный интервал среднего результата, %, +/-</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,05</td><td>94,4</td><td>2,5</td><td>5,23</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>86,1</td><td>2,05</td><td>4,28</td></tr>
<tr><td>Плоды огурцов</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>85,8</td><td>1,66</td><td>3,47</td></tr>
<tr><td>Плоды томатов</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>81,5</td><td>1,18</td><td>2,47</td></tr>
<tr><td>Ягоды винограда</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>77,0</td><td>1,86</td><td>3,89</td></tr>
<tr><td>Зерно</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>72,7</td><td>1,93</td><td>0,91</td></tr>
<tr><td>Солома</td><td>0,05</td><td>0,05 - 0,5</td><td>73,6</td><td>2,09</td><td>0,98</td></tr>
</table>


<div align="right">

<a id="p100058"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100059"></a>**МЕТАБОЛИТ АЗОКСИСТРОБИНА R-230310**

</div>



<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="14%"><col width="17%"><col width="15%"><col width="18%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый</td><td colspan="5">Метрологические параметры, p = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>объект</td><td>предел обнаружения, мг/кг (мг/л)</td><td>диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л)</td><td>среднее значение определения, %</td><td>стандартное отклонение, S</td><td>доверительный интервал среднего результата, %, +/-</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,05</td><td>98,2</td><td>2,84</td><td>5,95</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>86,8</td><td>2,57</td><td>5,38</td></tr>
<tr><td>Плоды огурцов</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>98,7</td><td>1,86</td><td>3,90</td></tr>
<tr><td>Плоды томатов</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>85,0</td><td>1,86</td><td>3,90</td></tr>
<tr><td>Ягоды винограда</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>74,5</td><td>1,82</td><td>3,81</td></tr>
<tr><td>Зерно</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>74,0</td><td>2,66</td><td>1,25</td></tr>
<tr><td>Солома</td><td>0,05</td><td>0,05 - 0,5</td><td>73,8</td><td>2,34</td><td>1,10</td></tr>
</table>


<div align="right">

<a id="p100068"></a>Таблица 3

</div>


<div align="center">

<a id="p100069"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗОКСИСТРОБИНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ПЛОДАХ**<br>
**ОГУРЦОВ И ТОМАТОВ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ**

</div>

**КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**


<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="25%"><col width="20%"><col width="18%"><col width="22%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Добавлено Азоксистробина, мг/кг (мг/л)</td><td>Обнаружено Азоксистробина, мг/кг (мг/л)</td><td>Доверительный интервал, +/-</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Вода</td><td>0,005</td><td>0,0046</td><td>0,0007</td><td>92,0</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>0,009</td><td>0,0015</td><td>90,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0198</td><td>0,0031</td><td>99,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0482</td><td>0,0067</td><td>96,4</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>94,4</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Почва</td><td>0,01</td><td>0,0086</td><td>0,001</td><td>86,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,019</td><td>0,002</td><td>95,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0394</td><td>0,0040</td><td>78,8</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0846</td><td>0,0103</td><td>84,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>86,1</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Плоды огурцов</td><td>0,01</td><td>0,0084</td><td>0,0014</td><td>84,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0166</td><td>0,0019</td><td>83,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,043</td><td>0,0042</td><td>86,0</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,09</td><td>0,0036</td><td>90,0</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>85,8</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Плоды томатов</td><td>0,01</td><td>0,0086</td><td>0,0017</td><td>86,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0166</td><td>0,0021</td><td>83,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0386</td><td>0,0014</td><td>77,2</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0818</td><td>0,0064</td><td>81,8</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>81,5</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Ягоды винограда</td><td>0,01</td><td>0,0074</td><td>0,0007</td><td>74,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0164</td><td>0,003</td><td>82,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0364</td><td>0,0027</td><td>72,8</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,079</td><td>0,0091</td><td>79,0</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>77,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно</td><td>0,01</td><td>0,0075</td><td>0,0003</td><td>75,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0145</td><td>0,0001</td><td>72,5</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0363</td><td>0,0003</td><td>72,6</td></tr>
<tr><td>0,10</td><td>0,0706</td><td>0,0005</td><td>70,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>72,7</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Солома</td><td>0,05</td><td>0,0359</td><td>0,0011</td><td>71,8</td></tr>
<tr><td>0,10</td><td>0,0732</td><td>0,0013</td><td>73,2</td></tr>
<tr><td>0,20</td><td>0,1493</td><td>0,0030</td><td>74,7</td></tr>
<tr><td>0,50</td><td>0,3789</td><td>0,0124</td><td>75,8</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>73,6</td></tr>
</table>


<div align="right">

<a id="p100106"></a>Таблица 4

</div>


<div align="center">

<a id="p100107"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ R-230310 В ВОДЕ,**<br>
**ПОЧВЕ, ПЛОДАХ ОГУРЦОВ И ТОМАТОВ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, ЗЕРНЕ**<br>
**И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР (5 ПОВТОРНОСТЕЙ**

</div>

**ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**


<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="17%"><col width="18%"><col width="23%"><col width="26%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Добавлено R-230310, мг/кг (мг/л)</td><td>Обнаружено R-230310, мг/кг (мг/л)</td><td>Доверительный интервал, +/-</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Вода</td><td>0,005</td><td>0,0046</td><td>0,0007</td><td>92,0</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>0,009</td><td>0,0009</td><td>90,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0214</td><td>0,0034</td><td>107,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0518</td><td>0,0056</td><td>103,6</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>98,2</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Почва</td><td>0,01</td><td>0,0102</td><td>0,001</td><td>102,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0172</td><td>0,003</td><td>86,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0408</td><td>0,0020</td><td>81,6</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0774</td><td>0,0021</td><td>77,4</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>86,8</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Плоды огурцов</td><td>0,01</td><td>0,0108</td><td>0,0018</td><td>108,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0184</td><td>0,0017</td><td>92,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0464</td><td>0,0029</td><td>92,8</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,1018</td><td>0,0089</td><td>101,8</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>98,7</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Плоды томатов</td><td>0,01</td><td>0,0098</td><td>0,001</td><td>98,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0176</td><td>0,0023</td><td>88,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0382</td><td>0,0010</td><td>76,4</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0774</td><td>0,0047</td><td>77,4</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>85,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Ягоды винограда</td><td>0,01</td><td>0,0078</td><td>0,0010</td><td>78,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,158</td><td>0,003</td><td>79,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0362</td><td>0,0031</td><td>72,4</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0684</td><td>0,0080</td><td>68,4</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>73,6</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно</td><td>0,01</td><td>0,0077</td><td>0,0002</td><td>77,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0148</td><td>0,0006</td><td>74,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>0,0371</td><td>0,0011</td><td>74,2</td></tr>
<tr><td>0,10</td><td>0,0710</td><td>0,0011</td><td>71,0</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>74,1</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Солома</td><td>0,05</td><td>0,0359</td><td>0,0011</td><td>71,8</td></tr>
<tr><td>0,10</td><td>0,0732</td><td>0,0024</td><td>73,2</td></tr>
<tr><td>0,20</td><td>0,1466</td><td>0,0011</td><td>73,3</td></tr>
<tr><td>0,50</td><td>0,3847</td><td>0,0053</td><td>76,9</td></tr>
<tr><td>среднее</td><td colspan="2"></td><td></td><td>73,8</td></tr>
</table>



##### <a id="p100144"></a>2.1.3 Избирательность метода


<a id="p100145"></a>В прилагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании огурцов и томатов, зерновых колосовых культур, а также при возделывании винограда.


### <a id="p100146"></a>2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование



##### <a id="p100147"></a>2.2.1 Реактивы, материалы и растворы


<a id="p100148"></a>Азоксистробин ICIA 5504, аналитический
стандарт с содержанием д.в. 99,7%, фирма
Зенека R-230310, аналитический стандарт
с содержанием д.в. 96,0%, фирма Зенека
<a id="p100149"></a>Ацетонитрил                                ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100150"></a>Бумага индикаторная, универсальная
<a id="p100151"></a>Вода бидистиллированная [<*>](#p100179), ГОСТ 7602-72
деионизированная
<a id="p100152"></a>Гексан, ч                                  ТУ 6-09-3375
<a id="p100153"></a>Гелий, осч
<a id="p100154"></a>Калий марганцово-кислый, чда ГОСТ 20490-75
<a id="p100155"></a>Кислота соляная, концентрированная ГОСТ 857-88
<a id="p100156"></a>Кислота соляная, 0,1 М водный раствор
<a id="p100157"></a>Концентрирующие патроны Диапак-С8          ТУ 4215-002-05451931-94
(0,6 г), АО БиоХимМак (117899, Москва,
Воробьевы горы, МГУ)
<a id="p100158"></a>Концентрирующие патроны Диапак-С           ТУ 4215-002-05451931-94
(0,6 г) АО БиоХимМак (117899, Москва,
Воробьевы горы, МГУ)
<a id="p100159"></a>Концентрирующие патроны Диапак-Амин        ТУ 4215-002-05451931-94
(0,6 г), АО БиоХимМак (117899, Москва,
Воробьевы горы, МГУ)
<a id="p100160"></a>Метилен хлористый ГОСТ 19433-88
<a id="p100161"></a>Натрий бикарбонат, хч [ГОСТ 4201-79](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79)
<a id="p100162"></a>Натрия бикарбонат, 5%-ный водный раствор
<a id="p100163"></a>Натрий серно-кислый, безводный, хч [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100164"></a>Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77
<a id="p100165"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ (колонка
Kromasil 100-5С8, анализ образцов воды,
почвы, плодов огурцов и томатов,
ягод винограда):
<a id="p100166"></a>    ацетонитрил - 400 мл;
<a id="p100167"></a>    вода - 600 мл
<a id="p100168"></a>Смесь для растворения образцов перед
хроматографированием:
<a id="p100169"></a>    ацетонитрил - 250 мл;
<a id="p100170"></a>    вода - 750 мл
<a id="p100171"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ (колонка Zorbax
SB С-18, анализ образцов зерна и соломы,
также возможно использование этой колонки
для анализа образцов воды, почвы, плодов
огурцов и томатов, ягод винограда):
<a id="p100172"></a>    ацетонитрил - 500 мл;
<a id="p100173"></a>    вода - 500 мл
<a id="p100174"></a>Флорисил для колоночной хроматографии,
60 - 100 меш, фирма Мерк
<a id="p100175"></a>Фильтры бумажные, "красная лента" ТУ 6-09-1678-86
<a id="p100176"></a>Фильтры для очистки растворителей
диаметром 20 мм с отверстиями 20 мкм,
фирма Уотерс
<a id="p100177"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты [<**>](#p100180) [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)

<a id="p100178"></a>

---

<a id="p100179"></a><*> Бидистиллят кипятят 6 ч с марганцово-кислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.
<a id="p100180"></a><**> Этиловый эфир уксусной кислоты кипятят 1 ч с прокаленным сульфатом магния и затем перегоняют.


##### <a id="p100181"></a>2.2.2 Приборы и оборудование


<a id="p100182"></a>Хроматограф жидкостный Уотерс 510 с
ультрафиолетовым детектором с изменяемой
длиной волны и чувствительностью не
выше 0,0025 единиц адсорбции на шкалу
или другой аналогичного типа
<a id="p100183"></a>Колонка хроматографическая стальная
длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм,
содержащая Kromasil 100-5C8, зернением 5 мкм
<a id="p100184"></a>Колонка хроматографическая стальная
длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм,
Zorbax SB С-18 зернением 5 мкм
<a id="p100185"></a>Аллонж прямой с отводом для вакуума
для работы с концентрирующими патронами
<a id="p100186"></a>Ванна ультразвуковая
<a id="p100187"></a>Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные         ГОСТ 34104-80Е
<a id="p100188"></a>Весы лабораторные общего назначения с ГОСТ 19491-74
наибольшим пределом взвешивания до 500 г
и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г
<a id="p100189"></a>Воронки делительные на 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82Е
<a id="p100190"></a>Воронки конические стеклянные ГОСТ 25336-82Е
диаметром 30 - 33 мм
<a id="p100191"></a>Встряхиватель механический или аналогичный         ТУ 64-673М
<a id="p100192"></a>Колбы конические, плоскодонные на 250 и 500 мл     ГОСТ 9737-70
<a id="p100193"></a>Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл                    ГОСТ 1770-74
<a id="p100194"></a>Концентраторы грушевидные КТУ-100-14/19            ГОСТ 10394-72
<a id="p100195"></a>Микрошприц для жидкостного
хроматографа на 50 - 100 мкл
<a id="p100196"></a>Насос водоструйный                                 ГОСТ 10696-75
<a id="p100197"></a>Пипетки мерные на 0,2; 1,0; 5,0; 10,0 [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
и 25,0 мл
<a id="p100198"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М             ТУ 25-11-917-74
или аналогичный
<a id="p100199"></a>Стаканы стеклянные на 100 - 500 мл                 ГОСТ 25366-80Е


### <a id="p100200"></a>2.3. Подготовка к определению



##### <a id="p100201"></a>2.3.1 Подготовка и кондиционирование колонки

для жидкостной хроматографии

<a id="p100202"></a>Колонку Kromasil 100-5C8 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °С и скорости потока соответствующей подвижной фазы 0,5 - 1 мл/мин. в течение 3 - 4 ч.
<a id="p100203"></a>Колонку Zorbax SB С-18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока соответствующей подвижной фазы 1 мл/мин. в течение 3 - 4 ч.


##### <a id="p100204"></a>2.3.2 Приготовление стандартных растворов


<a id="p100205"></a>Взвешивают 50 мг Азоксистробина в мерной колбе объемом 50 мл. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный раствор N 1, концентрация Азоксистробина - 1 мг/мл).
<a id="p100206"></a>Взвешивают 50 мг геометрического изомера Азоксистробина R-230310 в мерной колбе объемом 50 мл, растворяют в ацетонитриле, доводят до метки ацетонитрилом (стандартный раствор N 2, концентрация геометрического изомера Азоксистробина R-230310 - 1 мг/мл). Стандартные растворы N 1 и 2 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.
<a id="p100207"></a>В мерную колбу объемом 100 мл помещают по 1 мл стандартных растворов N 1 и 2, доводят до метки ацетонитрилом, в результате чего получают объединенный стандартный раствор N 3 с концентрацией Азоксистробина и геометрического изомера R-230310 - 10 мкг/мл (каждого). Из объединенного стандартного раствора N 3 методом последовательного разведения готовят объединенные стандартные растворы Азоксистробина и геометрического изомера R-230310 в ацетонитриле (или в подвижной фазе ацетонитрил-вода в соотношении 25:75 для проведения анализов на колонке Kromasil 100-5C8) с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 мкг/мл соответственно и используют эти растворы для хроматографического исследования, построения калибровочной кривой и внесения в контрольные образцы.


##### <a id="p100208"></a>2.3.3 Приготовление растворов для жидкостной хроматографии


<a id="p100209"></a>Для приготовления подвижной фазы при анализе образцов воды, почвы, плодов огурцов и томатов используют свежеперегнанные ацетонитрил и дистиллированную воду.
<a id="p100210"></a>В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 400 мл ацетонитрила и 600 мл очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, затем пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. для удаления растворенных газов. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.
<a id="p100211"></a>Для растворения сухого остатка после экстракции и очистки образцов воды, почвы, плодов огурцов и томатов применяют смесь ацетонитрила с водой в соотношении 25:75 по объему (для проведения анализов на колонке Kromasil 100-5C8). Для этого в плоскодонную колбу объемом 200 мл помещают 50 мл ацетонитрила и 150 мл воды, смесь тщательно перемешивают.
<a id="p100212"></a>Для приготовления подвижной фазы при анализе образцов зерна и соломы также используют свежеперегнанные ацетонитрил и воду, очищенную перегонкой над перманганатом калия.
<a id="p100213"></a>В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 500 мл ацетонитрила и 500 мл очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, затем пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. для удаления растворенных газов. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.


##### <a id="p100214"></a>2.3.4 Построение калибровочного графика


<a id="p100215"></a>Для построения калибровочного графика последовательно вводят в хроматограф 5 раз по 20 мкл каждого из полученных четырех растворов с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 мкг/мл. Измеряют высоту или площадь пиков, рассчитывают среднее значение высоты пика или его площади для каждой концентрации и строят график зависимости высоты пика или площади от концентрации Азоксистробина и его геометрического изомера (мкг/мл).


##### <a id="p100216"></a>2.3.5 Подготовка колонки с Флорисилом для очистки экстракта


<a id="p100217"></a>В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 4 г дезактивированного Флорисила. Сверху на Флорисил насыпают 1 г безводного сульфата натрия. Колонку готовят непосредственно перед очисткой образца, предварительно промыв ее 20 мл гексана. Образец вносят на влажную колонку!
<a id="p100218"></a>*Примечание.* Для дезактивации Флорисил выдерживают 4 ч в сушильном шкафу при температуре 120 °С. Затем к 95 г прокаленного Флорисила при постоянном перемешивании в стеклянной колбе с притертой пробкой добавляют постепенно 5 г очищенной воды.


##### <a id="p100219"></a>2.3.6 Проверка хроматографического поведения Азоксистробина

<div align="center">

и его геометрического изомера на колонке с Флорисилом

</div>


<a id="p100220"></a>В концентратор объемом 100 мл помещают 1 мл стандартного раствора с концентрацией Азоксистробина и геометрического изомера R-230310 - 1 мкг/мл (каждого) и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси этилацетат-гексан в соотношении 2:8 и вносят на колонку с Флорисилом. Колонку промывают 20 мл смеси этилацетат-гексан в соотношении 2:8 и элюат отбрасывают. Азоксистробин и R-230310 элюируют с колонки последовательно шестью порциями по 5 мл смеси этилацетата с гексаном в соотношении 7:3, каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100221"></a>Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил-вода (25:75) в ультразвуковой ванне и 20 мкл раствора вводят в хроматограф.
<a id="p100222"></a>Затем фракции, содержащие Азоксистробин и R-230310, объединяют, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток вновь растворяют в 1 мл ацетонитрила или смеси ацетонитрил-вода в соотношении 25:75 и вводят в хроматограф 20 мкл пробы. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюата.
<a id="p100223"></a>*Примечание.* Хроматографическое поведение Азоксистробина или его метаболита на колонке обязательно проверяют при отработке методики и каждый раз при использовании новой партии Флорисила.


##### <a id="p100224"></a>2.3.7 Подготовка концентрирующего патрона

Диапак-С8 (0,6 г) для очистки экстракта

<a id="p100225"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 2 мл/мин. Для проведения очистки используют очищенную воду, перегнанную над перманганатом калия.
<a id="p100226"></a>Патрон Диапак-С8 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100227"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 и 10 мл воды. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
<a id="p100228"></a>2.3.7.1. Проверка хроматографического поведения Азоксистробина и его геометрического изомера на концентрирующем патроне Диапак С8.
<a id="p100229"></a>Из стандартного раствора, содержащего по 1 мкг/мл Азоксистробина и его геометрического изомера в ацетонитриле, отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Пропускают раствор через картридж под вакуумом. Элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила и хроматографируют для проверки возможного смыва анализируемого вещества.
<a id="p100230"></a>Концентратор тщательно обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:5 и смесь также вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила и хроматографируют. Описанную выше процедуру необходимо проводить, чтобы убедиться в отсутствии "проскока" анализируемых веществ при нанесении пробы на картридж.
<a id="p100231"></a>Азоксистробин и его геометрический изомер элюируют с картриджа 15 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1 порциями по 5 мл, обмывая каждый раз колбу. Элюат после внесения каждой порции упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Азоксистробин и его геометрический изомер, и объединяют их. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюата.


##### <a id="p100232"></a>2.3.8 Подготовка концентрирующего патрона

Диапак-Амин (0,6 г) для очистки экстракта

<a id="p100233"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 2 мл/мин.
<a id="p100234"></a>Патрон Диапак-Амин устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100235"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 9:1. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
<a id="p100236"></a>2.3.8.1. Проверка хроматографического поведения Азоксистробина и его геометрического изомера на концентрирующем патроне Диапак-Амин.
<a id="p100237"></a>Из стандартного раствора, содержащего по 1 мкг/мл Азоксистробина и его геометрического изомера в ацетонитриле, отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Пропускают раствор через картридж под вакуумом. Элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила и хроматографируют для проверки возможного смыва анализируемого вещества.
<a id="p100238"></a>Азоксистробин и его геометрический изомер элюируют с картриджа 15 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 1:3 порциями по 5 мл, элюат после внесения каждой порции упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Азоксистробин и его геометрический изомер, и объединяют их. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюата.


##### <a id="p100239"></a>2.3.9 Подготовка концентрирующего патрона

Диапак-С (0,6 г) для очистки экстракта

<a id="p100240"></a>Патрон Диапак С устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
<a id="p100241"></a>Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 9:1. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
<a id="p100242"></a>Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 2 мл/мин.
<a id="p100243"></a>2.3.9.1. Проверка хроматографического поведения Азоксистробина и его геометрического изомера на концентрирующем патроне Диапак-С.
<a id="p100244"></a>Из стандартного раствора, содержащего по 1 мкг/мл Азоксистробина и его геометрического изомера в ацетонитриле, отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Пропускают раствор через картридж под вакуумом. Элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила и хроматографируют для проверки возможного смыва анализируемого вещества.
<a id="p100245"></a>Азоксистробин и его геометрический изомер элюируют с картриджа 15 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 1:3 порциями по 5 мл, элюат после внесения каждой порции упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Азоксистробин и его геометрический изомер, и объединяют их. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюата.


### <a id="p100246"></a>2.4. Отбор проб


<a id="p100247"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы плодов огурцов и томатов, а также ягод винограда анализируют в день отбора или замораживают и хранят в морозильной камере при -18 °С до дня анализа. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Перед анализом зерно и солому измельчают на лабораторной мельнице.


### <a id="p100248"></a>2.5. Описание определения



##### <a id="p100249"></a>2.5.1 Вода


<a id="p100250"></a>Пробу воды объемом 100 мл помещают в делительную воронку емкостью 250 мл, добавляют 5 г хлорида натрия, интенсивно перемешивают до полного растворения соли. Азоксистробин и R-230310 трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз воронку в течение 1 - 2 мин. После разделения фаз в воронке нижний слой сливают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл смеси ацетонитрил-вода (25:75) в ультразвуковой ванне, после чего 20 мкл раствора вводят в хроматограф.


##### <a id="p100251"></a>2.5.2 Почва


<a id="p100252"></a>2.5.2.1. Экстракция. Образец почвы массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, добавляют 10 мл дистиллированной воды и дают выстояться 10 мин. Затем в колбу прибавляют 50 мл смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и встряхивают колбу на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Экстракт переносят в центрифужный стакан и центрифугируют при 2500 об./мин. 5 мин. Супернатант фильтруют в делительную воронку объемом 250 мл через фильтр "красная лента". Азоксистробин и метаболит Азоксистробина R-230310 экстрагируют еще раз, используя 50 мл смеси ацетонитрил-вода (9:1), встряхивая в течение 0,5 ч. Экстракты объединяют.
<a id="p100253"></a>2.5.2.2. Предварительная очистка. К полученному экстракту в делительной воронке добавляют 5 г хлорида натрия, интенсивно встряхивают и оставляют на 10 мин. По истечению этого времени и после разделения слоев в делительной воронке нижний водный слой с остатком нерастворившегося хлорида натрия отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают в концентратор, пропуская его через 10 г безводного сульфата натрия, увлажненного 5 мл этилового эфира уксусной кислоты. Затем осушитель обмывают 10 мл ацетонитрила, полученный экстракт упаривают при температуре не выше 30 °С досуха.
<a id="p100254"></a>2.5.2.3. Очистка экстракта на колонке. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси этилацетат-гексан в соотношении 2:8 и вносят на колонку с Флорисилом. Затем ополаскивают концентратор 5 мл смеси этилацетат-гексан (2:8) и также вносят на колонку. После этого колонку промывают 15 мл смеси этилацетат-гексан (2:8) и элюат отбрасывают. Азоксистробин и R-230310 элюируют с колонки 20 мл смеси этилацетата с гексаном в соотношении 7:3. Элюат собирают в концентратор и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100255"></a>Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил-вода (25:75), помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и 20 мкл раствора вводят в хроматограф.


##### <a id="p100256"></a>2.5.3 Плоды огурцов и томатов


<a id="p100257"></a>Навеску 20 г измельченных плодов огурцов и томатов помещают в плоскодонную стеклянную колбу на 250 мл, добавляют 50 мл ацетонитрила и встряхивают смесь в течение 0,5 ч. Затем пробу центрифугируют и экстракт (супернатант) фильтруют в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 50 мл ацетонитрила. Экстракты объединяют в делительной воронке. Далее поступают, как описано в [п. п. 2.5.2.2](#p100253) и [2.5.2.3](#p100254) "Очистка экстракта на колонке".


##### <a id="p100258"></a>2.5.4 Ягоды винограда


<a id="p100259"></a>Навеску 20 г измельченных ягод винограда помещают в плоскодонную стеклянную колбу на 250 мл, добавляют 50 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 7:3 и встряхивают смесь в течение 0,5 ч. Экстракт фильтруют в делительную воронку 250 мл. Экстракцию повторяют еще дважды, используя по 50 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 7:3 и встряхивая смесь каждый раз по 30 мин. Экстракты объединяют. К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 5 г хлорида натрия, интенсивно встряхивают и оставляют до полного разделения слоев. Нижний водный слой отбрасывают. К оставшемуся в делительной воронке экстракту прибавляют 20 мл гексана, интенсивно встряхивают и оставляют смесь до полного разделения слоев. Затем нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор через слой безводного сульфата натрия, осушитель обмывают 10 мл ацетонитрила. Полученный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100260"></a>Сухой остаток растворяют в 5 мл этилацетата, прибавляют в концентратор 50 мл гексана и помещают смесь с сухую делительную воронку. Азоксистробин и изомер R-230310 извлекают ацетонитрилом, используя 20, 20 и 10 мл растворителя и встряхивая делительную воронку по 2 мин. Нижний ацетонитрильный слой объединяют в концентраторе и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Затем сухой остаток растворяют в 2 мл смеси этилацетат-гексан в соотношении 2:8 и проводят очистку на колонке с Флорисилом, как указано в [пункте 2.5.2.3](#p100254) "Очистка экстракта на колонке". После очистки на колонке, упаривания и растворения сухого остатка 20 мкл экстракта вводят в хроматограф.


##### <a id="p100261"></a>2.5.5 Зерно колосовых культур


<a id="p100262"></a>2.5.5.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец размолотого зерна массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл и прибавляют 10 - 20 мл ацетонитрила, и выдерживают 15 мин. После выдерживания прибавляют 75 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1 и экстрагируют 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин. на механическом встряхивателе. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1 и экстрагируя 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин. на механическом встряхивателе. Экстракты центрифугируют при 4000 об./мин., фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли через фильтр "красная лента". Объединенный экстракт тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин. при комнатной температуре. Затем переносят содержимое колбы в делительную воронку объемом 250 мл (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) и отбрасывают выделившийся водный слой (нижний).
<a id="p100263"></a>К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл гексана и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают верхний гексановый слой. Нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл и возвращают в делительную воронку. Ацетонитрильный экстракт промывают еще раз 50 мл гексана. Гексан (верхний слой) отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию фильтруют в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия. Осушитель дополнительно обмывают 10 мл ацетонитрила, который переносят в концентратор. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100264"></a>К сухому остатку в концентраторе добавляют 50 мл хлористого метилена последовательно порциями по 20, 20 и 10 мл, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят экстракт в делительную воронку объемом 250 мл. Туда же добавляют 100 мл 5%-ного раствора гидрокарбоната натрия и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз нижний органический слой (хлористый метилен) собирают в химический стакан объемом 100 мл. К верхнему водному слою с образовавшейся эмульсией добавляют 30 мл хлористого метилена, перемешивают и выдерживают 5 мин. при комнатной температуре. Нижний выделившийся слой хлористого метилена объединяют с основным экстрактом в химическом стакане и помещают объединенный экстракт в чистую делительную воронку. Верхний водный слой отбрасывают.
<a id="p100265"></a>К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл 0,1 М раствора соляной кислоты и осторожно встряхивают делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз верхний водный слой отбрасывают. Нижний органический слой (хлористый метилен) фильтруют в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия. В случае образования эмульсии к верхнему водному слою добавляют 30 мл хлористого метилена и встряхивают делительную воронку 1 мин., после полного разделения фаз нижний органический слой объединяют с экстрактом в концентраторе. Осушитель обмывают 10 мл хлористого метилена и объединяют с экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100266"></a>2.5.5.2. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак С8. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Элюат отбрасывают. Концентратор тщательно обмывают 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:5 и смесь также вносят на картридж. Элюат отбрасывают.
<a id="p100267"></a>В концентратор добавляют 10 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:1, тщательно обмывают стенки концентратора и вносят раствор на картридж. Элюат, содержащий Азоксистробин и его геометрический изомер, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100268"></a>2.5.5.3. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак-Амин. Сухой остаток растворяют в 1 мл этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Элюат отбрасывают. Азоксистробин и его геометрический изомер элюируют с картриджа 10 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 1:3. Элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
<a id="p100269"></a>*Примечание.* Хроматографическое поведение Азоксистробина и его геометрического изомера на концентрирующих патронах обязательно проверяют при отработке методики и каждый раз при использовании новой партии патронов.


##### <a id="p100270"></a>2.5.6 Солома зерновых колосовых культур


<a id="p100271"></a>2.5.6.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец соломы массой 5 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 20 мл ацетонитрила и выдерживают в течение 15 мин. при комнатной температуре. Затем прибавляют 75 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1, и экстрагируют 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин. на механическом встряхивателе. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 75 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1 и экстрагируют 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли через фильтр "красная лента". Объединенный экстракт тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин. при комнатной температуре. Затем переносят содержимое колбы в делительную воронку объемом 250 мл (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) и отбрасывают выделившийся нижний водный слой.
<a id="p100272"></a>К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл гексана и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 500 мл и возвращают в делительную воронку, гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт промывают еще раз 50 мл гексана, гексан отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт фильтруют в концентратор через слой безводного сульфата натрия, осушитель обмывают 10 мл ацетонитрила и объединяют с экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100273"></a>К сухому остатку в концентраторе добавляют 50 мл хлористого метилена порциями по 20, 20 и 10 мл, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят экстракт в делительную воронку объемом 250 мл. Туда же добавляют 100 мл 5%-ного раствора гидрокарбоната натрия и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз нижний органический слой (хлористый метилен) собирают в химический стакан объемом 100 мл. К верхнему водному слою с образовавшейся эмульсией добавляют 30 мл хлористого метилена, перемешивают и выдерживают 5 мин. при комнатной температуре. Нижний выделившийся слой хлористого метилена объединяют с основным экстрактом в химическом стакане и помещают объединенный экстракт в чистую делительную воронку. Верхний водный слой отбрасывают.
<a id="p100274"></a>К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл 0,1 М раствора соляной кислоты и осторожно встряхивают делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз верхний водный слой отбрасывают. Нижний органический слой (хлористый метилен) фильтруют в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия. В случае образования эмульсии к верхнему водному слою добавляют 30 мл хлористого метилена и встряхивают делительную воронку 1 мин., после полного разделения фаз нижний органический слой объединяют с экстрактом в концентраторе. Осушитель обмывают 10 мл хлористого метилена и объединяют с экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С и далее очищают на концентрирующем патроне Диапак С.
<a id="p100275"></a>2.5.6.2. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак С. Сухой остаток растворяют в 1 мл этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Элюат отбрасывают. Азоксистробин и его геометрический изомер элюируют с картриджа 10 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 1:3, элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
<a id="p100276"></a>2.5.6.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С8 и Диапак-Амин. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила (помещают на 20 с в ультразвуковую ванну), тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 9 мл очищенной воды и очищают на концентрирующем патроне Диапак С8, как указано в [п. 2.5.5.2](#p100266). После очистки элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора (помещают на 20 с в ультразвуковую ванну), добавляют 9 мл гексана и очищают на концентрирующем патроне Диапак-Амин, как указано в [п. 2.5.5.3](#p100268).
<a id="p100277"></a>Элюат после очистки упаривают досуха, растворяют в 2,5 мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
<a id="p100278"></a>*Примечание.* При хроматографическом исследовании образцов соломы в случае обнаружения в образцах балластного пика, близкого по времени удерживания к пикам анализируемых веществ, можно проводить анализ при длине волны 220 нм. В этих условиях величины поглощения Азоксистробина и его геометрического изомера увеличиваются по сравнению с поглощением на длине волны 255 нм, а поглощение балластных пиков уменьшается.


### <a id="p100279"></a>2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов анализа



##### <a id="p100280"></a>2.6.1 Условия хроматографирования


<a id="p100281"></a>Хроматограф "Waters" или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
<a id="p100282"></a>Колонка стальная Kromasil 100-5C8 25 х 2,1.
<a id="p100283"></a>Температура колонки 35 °С.
<a id="p100284"></a>Подвижная фаза ацетонитрил-вода (40:60) по объему.
<a id="p100285"></a>Подвижная фаза для растворения образцов ацетонитрил-вода (25:75) по объему.
<a id="p100286"></a>Скорость потока элюента 1 мл/мин.
<a id="p100287"></a>Рабочая длина волны 255 нм.
<a id="p100288"></a>Чувствительность 0,0025 ед. оптической плотности на шкалу.
<a id="p100289"></a>Объем вводимой пробы 20 мкл.
<a id="p100290"></a>Время удерживания Азоксистробина - 8,65 - 9,17 мин.; геометрического изомера R-230310 - 6,25 - 6,53 мин.
<a id="p100291"></a>Линейный диапазон детектирования 2 - 20 нг.

<a id="p100292"></a>Альтернативные условия

<a id="p100293"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм.
<a id="p100294"></a>Zorbax SB С-18, зернение 5 мкм.
<a id="p100295"></a>Температура колонки 25 °С.
<a id="p100296"></a>Подвижная фаза ацетонитрил-вода (50:50) по объему.
<a id="p100297"></a>Скорость потока элюента 1 мл/мин.
<a id="p100298"></a>Рабочая длина волны 255 нм (220 нм).
<a id="p100299"></a>Чувствительность 0,0025 ед. оптической плотности на шкалу.
<a id="p100300"></a>Объем вводимой пробы 20 мкл.
<a id="p100301"></a>Время удерживания Азоксистробина - 11,82 - 12,55 мин.; геометрического изомера R-230310 - 8,97 - 9,52 мин.
<a id="p100302"></a>Линейный диапазон детектирования 2 - 20 нг.


##### <a id="p100303"></a>2.6.2 Обработка результатов анализа


<a id="p100304"></a>    Содержание Азоксистробина или R-230310 в пробе рассчитывают по
формуле:

                           S   х A х V
                            пр
<a id="p100305"></a>                      Х = ------------- х P,
                          100 х S   х m
                                 ст

    где:
    Х - содержание  Азоксистробина или R-230310 в пробе, мг/кг или
мг/л;
    S   - высота (площадь) пика стандарта, мм;
     ст
    S   - высота (площадь) пика образца, мм;
     пр
    А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
    V - объем  экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
    m - масса анализируемого образца, г (мл);
    Р - содержание  Азоксистробина  или  R-230310 в  аналитическом

<div align="center">

стандарте, %.

</div>



## 3. <a id="p100306"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100307"></a>Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.


## 4. <a id="p100308"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100309"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95) ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".


## 5. <a id="p100310"></a>Разработчики


<a id="p100311"></a>Калинин В.А., профессор, к.с-х.н., Довгилевич Е.В., к.б.н., Устименко Н.В., к.б.н., Довгилевич А.В., к.х.н.
<a id="p100312"></a>Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1, УНКЦ "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". Телефон/факс: 976-43-26.



<a id="p100313"></a>

---