--- title: "\"МУК 4.1.1148-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флудиоксонила в воде, почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, зерне и соломе хлебных злаков, зерне кукурузы, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.1148-02" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1148-02" --- ## "МУК 4.1.1148-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флудиоксонила в воде, почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, зерне и соломе хлебных злаков, зерне кукурузы, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.1148-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флудиоксонила в воде, почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, зерне и соломе хлебных злаков, зерне кукурузы, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Минздравом России) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 января 2003 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУДИОКСОНИЛА В ВОДЕ,** **ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАСТЕНИЙ, КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ, ЗЕРНЕ** **И СОЛОМЕ ХЛЕБНЫХ ЗЛАКОВ, ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ** **ПОДСОЛНЕЧНИКА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ** **ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1148-02**
Дата введения
1 января 2003 года
1. Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). 2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России. 3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко. 4. Введены впервые. ## 1. Вводная часть Фирма-производитель: Сингента (Швейцария). Торговое название: МАКСИМ, ЦЕЛЕСТ. Действующее вещество: флудиоксонил. 4-(2,2-дифтор-1,3-бензодиоксил-4-ил)-1H-пиролл-3-карбонитрил. Структурная формула (не приводится). C H F N O М. м. 248,2 12 6 2 2 2 Бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления: 199,8 °C. Хорошо растворим в ацетоне, этаноле, метаноле, н-октаноле, плохо растворим в гексане; растворимость в воде: 1,5 - 1,8 мг/л. Краткая токсикологическая характеристика Острая пероральная токсичность (ЛД ) мыши, крысы - более 50 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (ЛД ) крысы - более 50 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (ЛК ) крысы - более 50 2600 мг/куб. м. Гигиенические нормативы ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/куб. дм (органолепт). ОДК в почве - 0,2 мг/кг. МДУ в зерне хлебных злаков и кукурузы - 0,02 мг/кг. ВМДУ в картофеле - 0,02 мг/кг (целест). МДУ в картофеле - 0,05 мг/кг (максим). ВМДУ в семенах и масле подсолнечника - 0,05 мг/кг (максим). Область применения препарата Флудиоксонил - контактный фунгицид широкого спектра действия с продолжительной активностью, рекомендуемый для предпосевной обработки семян озимой и яровой пшеницы, озимой ржи, кукурузы, подсолнечника и гороха против болезней всходов, а также клубней картофеля против комплекса болезней при хранении. В качестве протравителя семян выпускается в виде 2,5%-ного концентрата суспензии. ## 2. Методика определения остаточных количеств флудиоксонила в воде, почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, зерне и соломе хлебных злаков, зерне кукурузы, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на определении флудиоксонила с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из воды - дихлорметаном, из увлажненной почвы - метиловым спиртом, из картофеля - смесью метилового спирта с ацетоном (4:1), из зерна, соломы и зеленой массы - водным ацетоном, из семян и масла подсолнечника - ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе растворителей и на колонке с нейтральным оксидом алюминия при анализе проб почвы, подсолнечника и картофеля, а также силикагелем или флорисилом при анализе проб зерна, соломы и зеленой массы хлебных злаков или кукурузы. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания зерновых культур, подсолнечника и картофеля (хлор- и фосфорорганические пестициды, симм-триазины, фенилмочевины, тио- и дитиокарбаматы). ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода
Таблица 1
**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА <*>**
--- <*> В скобках указаны показатели для хроматографа типа Милихром.
Анализируемый объектМетрологические параметры, P = 0,95, n = 24
Предел обнаружения <**>, мг/куб. дм, мг/кгДиапазон определяемых концентраций мг/кг (куб. дм)Среднее значение определения, %Стандартное отклонение, S, %Доверительный интервал среднего результата, %
Вода(0,005)(0,005 - 0,1)95,02,0+/- 4,40
Почва(0,2)(0,2 - 4,0)75,01,7+/- 4,70
Картофель(0,02)(0,02 - 4,0)83,03,1+/- 8,60
Зерно хлебных злаков0,01 (0,02)0,01 - 0,1 (0,02 - 0,4)83,35,02+/- 2,34
Солома0,01 (0,05)0,01 - 0,1 (0,05 - 1,0)84,14,45+/- 2,07
Зерно кукурузы0,01 (0,02)0,01 - 0,1 (0,02 - 0,4)83,06,02+/- 3,57
Зеленая масса кукурузы0,01 (0,02)0,01 - 0,1 (0,02 - 0,4)83,64,98+/- 3,23
Зеленая масса подсолнечника Семена подсолнечника Масло подсолнечника0,02 0,02 0,020,02 - 0,2 0,02 - 0,2 0,02 - 0,282,0 83,1 84,03,7 4,9 6,3+/- 3,8 +/- 4,6 +/- 5,8
--- <**> Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 0,5 нг (хроматограф Perkin-Elmer), 2,5 нг (хроматограф Altex) и 5 нг (хроматограф Милихром).
Таблица 2
**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛУДИОКСОНИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, КАРТОФЕЛЕ,**
**ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ПШЕНИЦЫ, ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ**
**(6 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)** | Среда | Внесено флудиоксонила, мг/кг (куб. дм) | Обнаружено флудиоксонила, мг/кг | Полнота определения, % | | --- | --- | --- | --- | | Вода | 0,005 0,01 0,02 0,05 | 0,0049 +/- 0,0002 0,0089 +/- 0,0005 0,0196 +/- 0,0010 0,0500 +/- 0,0100 | 98,0 89,0 98,0 100,0 | | Почва | 0,5 1,0 2,0 4,0 | 0,295 +/- 0,015 0,700 +/- 0,036 1,480 +/- 0,077 3,840 +/- 0,200 | 59,0 70,0 74,0 96,0 | | Картофель | 0,02 0,04 0,08 0,2 | 0,0016 +/- 0,0002 0,0328 +/- 0,0033 0,0660 +/- 0,0067 0,1500 +/- 0,0140 | 80,0 82,0 82,5 75,0 | | Зерно пшеницы | 0,01 0,02 0,04 0,1 | 0,0079 +/- 0,0003 0,0170 +/- 0,0009 0,0351 +/- 0,0012 0,0812 +/- 0,0042 | 79,0 85,0 87,8 81,2 | | Солома пшеницы | 0,01 0,02 0,04 0,1 | 0,0089 +/- 0,0004 0,0168 +/- 0,0006 0,0320 +/- 0,0011 0,0834 +/- 0,0026 | 88,7 84,0 80,1 83,4 | | Зерно кукурузы | 0,01 0,02 0,04 0,1 | 0,0086 +/- 0,0009 0,0168 +/- 0,0010 0,0322 +/- 0,0019 0,0816 +/- 0,0054 | 86,3 83,9 80,4 81,6 | | Зеленая масса кукурузы | 0,01 0,02 0,04 0,1 | 0,0083 +/- 0,0006 0,0169 +/- 0,0010 0,0335 +/- 0,0029 0,0829 +/- 0,0056 | 83,0 84,5 85,2 82,5 | ### 2.2. Реактивы, растворы и материалы Флудиоксонил с содержанием д.в. 99,8% Алюминия оксид для хроматографии, II степени активности по Брокману, нейтральный Ацетон, чда ГОСТ 2603-79 Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-4326-76 Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над KMnO 4 н-Гексан, ч ТУ 6-09-3375-78 Дихлорметан, хч ТУ 6-09-2662-77 Железо серно-кислое, хч [ГОСТ 4148-78](https://bukva.ai/docs/gost-4148-78) Калия перманганат ГОСТ 20490-75 Калий углекислый, хч [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76) Кальция хлорид, хч ГОСТ 4161-77 Кислота серная, хч ГОСТ 4204-77 Натрия гидроксид, хч ГОСТ 4328-77 Натрия сульфат безводный, хч, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) предварительно прокаленный в муфельной печи при 600 °C в течение 4 часов Натрий углекислый ГОСТ 83-63 Натрия хлорид, хч ГОСТ 4233-77 Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-ацетон, 95:5, по объему Элюент N 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан-ацетон, 90:10, по объему Элюент N 3 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат, 90:10 по объему Силикагель для колоночной хроматографии, L 100 - 160 меш, Хемапол (Чехия), или аналогичный Смесь н-гексана и диэтилового эфира в объемном соотношении 4:1 Смесь ацетонитрила и воды в объемном соотношении 3:7 Спирт изопропиловый, хч ТУ 6-09-402 Спирт метиловый ГОСТ 6995-77 Спирт этиловый, 96% ТУ 6-09-1710-77 Стекловата Флорисил для колоночной хроматографии, 100 - 200 меш, Флука (Швейцария), или аналогичный Фильтры бумажные "белая лента", ТУ 6-09-2678-77 "синяя лента", обеззоленные
Фосфора пентоксид, ч МРТУ 6-09-5759-69
Хлороформ (Фармакопея, СССР) Эфир диэтиловый ГОСТ 6265-74 Этилацетат [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) ### 2.3. Приборы, аппаратура, посуда Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны Perkin-Elmer (США) или аналогичный Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Hipersil ODS, зернением 5 мкм Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Altex (США) или аналогичный Хроматографическая колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100А-С18, зернением 5 мкм Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа Жидкостный хроматограф Милихром с ультрафиолетовым детектором Колонка стальная (80 x 2 мм), содержащая Сепарон CGN-CN, зернением 5 мкм Колонка стальная (64 х 2 мм), содержащая Силасорб 600, зернением 5 мкм Аппарат для встряхивания или аналогичный ТУ 64-1-1081-73 Баня ультразвуковая, модель D-50, Branson Instr. Co., США, или аналогичная Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные ГОСТ 34104-80Е Весы лабораторные общего назначения, ГОСТ 19491-74 с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г Гомогенизатор МРТУ 42-1505-63 Мельница электрическая лабораторная ТУ 46-22-236-79 или аналогичная Насос водоструйный ГОСТ 10696-75 Печь муфельная Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-74 или аналогичный Шкаф сушильный ТУ 64-1-1411-76 Воронки делительные на 100, 250, 500 и 1000 мл ГОСТ 25336-82Е Воронки конические диаметром 30 - 37, 60 и ГОСТ 25336-82Е 100 - 120 мм Воронки Бюхнера РФ-3 вместимостью 120 мл ГОСТ 9147-73 Колбы Бунзена вместимостью 250 - 300 мл ГОСТ 9737-70 Колбы плоскодонные на 50, 250 и 500 мл ГОСТ 9737-70 Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 мл ГОСТ 1770-74 Колбы круглодонные на шлифе на 10, 50, 100, ГОСТ 9737-70 250 и 500 мл Колонка стеклянная, внутренним диаметром 10 мм, высотой 5 или 25 см Пипетки мерные на 0,1; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 мл [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Пробирки градуированные с притертыми ГОСТ 10515-75 пробками на 5, 10 и 25 мл Стаканы химические на 100, 500 и 1000 мл ГОСТ 10394-72 Стеклянные палочки Цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, ГОСТ 1770-74Е 200, 500 и 1000 мл ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы воды, почвы и картофеля хранят в стеклянной таре в сухом и защищенном от света месте не более 2 суток. Если пробы хранятся в холодильнике, то при подготовке к анализу следует выдержать их не менее часа при комнатной температуре. Образцы зерна и соломы хлебных злаков, а также зерна и зеленой массы кукурузы и семян подсолнечника можно хранить в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °C в течение месяца. Пробы зеленой массы подсолнечника хранят при температуре 0 - 4 °C в течение суток. Для более длительного хранения зеленую массу кукурузы и подсолнечника замораживают (лучше жидким азотом) и хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение 3 месяцев. Перед анализом зерно и семена измельчают на мельнице, солому и зеленую массу кукурузы и подсолнечника режут ножом или ножницами на кусочки не более 0,5 см, картофель натирают на крупной терке, воду (при наличии взвеси) фильтруют через неплотный бумажный фильтр, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 0,5 - 1 мм. ### 2.5. Подготовка к определению ##### 2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора углекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют. Диэтиловый эфир (1 л) предварительно встряхивают с 20 мл свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа в 55 мл воды с добавлением 1,54 г концентрированной серной кислоты), затем эфир последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, сушат над хлористым кальцием и перегоняют. Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. Оксид алюминия V степени активности по Брокману получают добавлением 12% воды к навеске оксида алюминия II степени активности. 2.5.2. Подготовка подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ (для анализа по [п. п. 2.7.1](#p100235) и [2.7.4](#p100268)) Отмеряют 500 мл ацетонитрила, прозрачного при 260 - 280 нм, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 500 мл бидистиллированной воды, фильтруют, дегазируют. ##### 2.5.3 Кондиционирование колонки Hipersil ODS и Кромасил 100А-С18 Промыть колонку для ВЭЖХ подвижной фазой N 1 в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизацию базовой линии (5 - 15 мин.). ##### 2.5.4 Подготовка подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ (для анализа по [п. 2.7.2](#p100246)) В мерную колбу на 100 мл наливают 50 - 70 мл хлороформа, вносят 0,5 мл метанола и доводят хлороформом до метки, фильтруют. ##### 2.5.5 Кондиционирование колонки Силасорб 600 Промыть колонку для ВЭЖХ подвижной фазой N 2 при скорости подачи растворителя 200 мкл/мин. до получения стабильной базовой линии. ##### 2.5.6 Подготовка подвижной фазы N 3 для ВЭЖХ (для анализа по [п. 2.7.3](#p100257)) В мерную колбу на 100 мл наливают по 4 мл изопропанола и метанола, доводят объем раствора в колбе до метки гексаном, фильтруют. ##### 2.5.7 Кондиционирование колонки Сепарон CGN-CN Промыть колонку для ВЭЖХ подвижной фазой N 3 при скорости подачи растворителя 200 мкл/мин. до получения стабильной базовой линии. ##### 2.5.8 Приготовление стандартных растворов 2.5.8.1. Серия N 1 (для измерения согласно [п. п. 2.7.1](#p100235) и [2.7.4](#p100268)). Стандартный раствор флудиоксонила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение 30 дней. Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл флудиоксонила, соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой N 1 для ВЭЖХ ([п. 2.5.1](#p100161)). Растворы хранятся в холодильнике в течение 3 дней. 2.5.8.2. Серия N 2 (для измерения согласно [п. 2.7.2](#p100246)). Стандартный раствор флудиоксонила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в подвижной фазе N 2 для ВЭЖХ ([п. 2.5.3](#p100169)) в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение 30 дней. Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой N 2 для ВЭЖХ. Растворы хранятся в холодильнике в течение 10 дней. 2.5.8.3. Серия N 3 (для измерения согласно [п. 2.7.3](#p100257)). Стандартный раствор флудиоксонила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в 96%-ном этиловом спирте в мерной колбе на 100 мл. Раствор можно хранить в холодильнике 3 месяца. Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; и 10 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл соответствующим последовательным разбавлением 96%-ным этиловым спиртом. Рабочие растворы можно хранить в холодильнике 1 месяц. ##### 2.5.9 Построение градуировочного графика 2.5.9.1. Градуировочный график N 1 (измерение по [п. 2.7.1](#p100235)). Для построения градуировочного графика N 1 в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора флудиоксонила с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,25 мкг/мл. 2.5.9.2. Градуировочный график N 2 и 3 (измерение по [п. 2.7.2](#p100246) и [п. 2.7.3](#p100257)). В инжектор хроматографа вводят по 10 мкл рабочего стандартного раствора флудиоксонила с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 мкг/мл (серия N 2 или N 3). 2.5.9.3. Градуировочный график N 4 (измерение по [п. 2.7.4](#p100268)). В инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора флудиоксонила с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный (N 1, N 2, N 3 или N 4) график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации флудиоксонила в растворе в мкг/мл. ##### 2.5.10 Подготовка колонок с оксидом алюминия, силикагелем и флорисилом для очистки экстракта 2.5.10.1. Заполнение колонки А оксидом алюминия. При анализе клубней картофеля используют стеклянную колонку высотой 5 см, внутренним диаметром 10 мм, с пористым фильтром, которую заполняют слоем оксида алюминия II степени активности по Брокману, нейтральным, высотой 2 см и промывают метиловым спиртом (5 мл). При анализе зеленой массы, семян и масла подсолнечника используют стеклянную колонку длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм. В нижнюю часть этой колонки вставляют тампон из стекловаты и медленно выливают в нее (при открытом кране) суспензию 10 г оксида алюминия V степени активности по Брокману в гексане. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 мл смеси гексан-этилацетат (90:10 по объему) со скоростью 1 - 2 кап./с, после чего она готова для работы. 2.5.10.2. Заполнение колонки Б силикагелем. Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 2 г силикагеля в 20 - 25 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 0,5 см. Колонку промывают 20 мл элюента N 1 состава (по объему) гексан-ацетон, 95:5, затем 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 кап./с. После этого колонка готова к работе. 2.5.10.3. Заполнение колонки В флорисилом. Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, насыпают в нее 5 г флорисила, промывают 30 мл ацетона, сушат сорбент потоком воздуха, используя разряжение, создаваемое водоструйным насосом. Затем колонку смачивают, пропуская через нее 30 мл гексана со скоростью 1 - 2 кап./с (для удаления пузырьков воздуха постукивают о стенки колонки стеклянной палочкой). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. После этого колонка готова к работе. ##### 2.5.11 Проверка хроматографического поведения флудиоксонила на колонке с оксидом алюминия В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора флудиоксонила с концентрацией 100 мкг/мл, отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл элюента N 3 и наносят на подготовленную колонку А. Промывают колонку 70 мл элюента N 3 со скоростью 1 - 2 кап./с. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ и анализируют на содержание флудиоксонила по [п. 2.7.4](#p100268). Фракции, содержащие флудиоксонил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 20 мл подвижной фазы N 1 и вновь анализируют по [п. 2.7.4](#p100268). Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента. ##### 2.5.12 Проверка хроматографического поведения флудиоксонила на колонках с силикагелем и флорисилом В круглодонную колбу на 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора флудиоксонила серии N 2 с концентрацией 100 мкг/мл (колонка Б) или 10 мкг/мл (колонка В), отдувают растворитель потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 2 - 3 мл элюента N 1 (колонка Б) или N 2 (колонка В) и наносят на колонку. Промывают колонку 70 мл элюента N 1 (колонка Б) или N 2 (колонка В) со скоростью 1 - 2 кап./с. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 10 мл подвижной фазы N 1 или 1 мл подвижной фазы N 2 и анализируют на содержание флудиоксонила соответственно по [п. 2.7.1](#p100235) или [п. 2.7.2](#p100246). Фракции, содержащие флудиоксонил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 10 или 1 мл подвижной фазы N 1 или N 2 и анализируют соответственно по [п. 2.7.1](#p100235) или [п. 2.7.2](#p100246). Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента. *Примечание.* Профиль вымывания может измениться при использовании новой партии сорбентов и растворителей. ### 2.6. Описание определения ##### 2.6.1 Вода 100 мл отобранного образца воды помещают в делительную воронку вместимостью 500 мл, добавляют в нее 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия, 25 мл дихлорметана и встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. После разделения смеси, отделяют нижний органический слой и пропускают его через химическую воронку диаметром 30 - 37 мм (отверстие прикрывают тампоном ваты), содержащую безводный сульфат натрия, собирая экстракт в грушевидную колбу вместимостью 100 мл. Оставшийся в делительной воронке водный слой подвергают повторной автоматической экстракции новой порцией дихлорметана объемом 25 мл и повторный экстракт после сушки над безводным сульфатом натрия присоединяют к ранее полученному. Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе до объема 5 мл, а затем количественно переносят его в грушевидную колбу вместимостью 10 мл и упаривают досуха. Остаток растворяют в 1 мл дихлорметана и анализируют на содержание флудиоксонила по [п. 2.7.3](#p100257). ##### 2.6.2 Почва 2.6.2.1. Экстракция. К 25 г отобранного образца почвы, помещенного в коническую колбу вместимостью 300 мл, добавляют 15 мл воды и 100 мл метанола и помещают на аппарат для встряхивания на 1 час. Затем полученную массу фильтруют через воронку Бюхнера, снабженную бумажным фильтром "синяя лента", промывают остаток на фильтре 25 мл чистого метанола. Фильтрат из колбы Бунзена количественно переносят в делительную воронку вместимостью 1 л и подвергают очистке по п. 2.6.2.2. 2.6.2.2. Очистка экстракта. К раствору в делительной воронке добавляют 50 мл насыщенного раствора хлорида натрия, 450 мл воды и подвергают экстракции 75 мл дихлорметана в течение 5 минут. После разделения смеси отделяют нижний органический слой, собирая его в коническую колбу вместимостью 500 мл. Водную фазу подвергают экстракции дихлорметаном порциями по 75 мл еще дважды. Объединенный экстракт, осушенный безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха, остаток растворяют в 5 мл метанола, раствор количественно переносят в грушевидную колбу вместимостью 10 мл и упаривают до объема 1 мл. Сконцентрированный метанольный раствор наносят с помощью пипетки на приготовленную очистительную колонку А с оксидом алюминия, колонку промывают 2 мл метанола и собранный элюат упаривают досуха в грушевидной колбе. Остаток растворяют в 1 мл дихлорметана и анализируют на содержание флудиоксонила по [п. 2.7.3](#p100257). ##### 2.6.3 Картофель 25 г измельченного образца семенного материала помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл, добавляют к нему 100 мл смеси метанола и ацетона (4:1) и встряхивают в течение 1 часа. Дают раствору отстояться и осторожно декантируют через химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром "синяя лента" в коническую колбу вместимостью 300 - 500 мл. Пробу картофеля подвергают экстракции еще дважды метанолом порциями по 50 мл. Отстоявшийся метанольный раствор также декантируют через химическую воронку в колбу с ранее полученным экстрактом. Оставшуюся в колбе для экстракции массу фильтруют через воронку Бюхнера, снабженную бумажным фильтром "синяя лента", промывая остаток на фильтре 25 мл метанола. Объединенный метанольный экстракт и промывку количественно переносят в делительную воронку вместимостью 1 л, далее проводят процедуру очистки экстракта в соответствии с [п. 2.6.2.2](#p100213). ##### 2.6.4 Зерно и солома хлебных злаков, зерно и зеленая масса кукурузы 2.6.4.1. Экстракция. Навеску 25 г измельченного зерна хлебных злаков или кукурузы, зеленой массы кукурузы (10 г соломы) помещают в коническую колбу на 250 мл, смачивают 30 мл воды и тщательно перемешивают. Добавляют в колбу 75 мл (для соломы 100 мл) ацетона и встряхивают 1 час. Отстоявшийся раствор сливают через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 500 мл. Процедуру экстракции повторяют еще дважды, используя по 50 мл ацетона для зерна и зеленой массы кукурузы, 100 и 75 мл ацетона для соломы. Объединенный экстракт концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (30 - 40 мл). К оставшемуся водному раствору добавляют примерно равный объем ацетона и помещают в морозильную камеру бытового холодильника на 1 час. Отфильтровывают выпавший осадок через бумажный фильтр, промывая его 20 мл охлажденной смеси ацетон-вода (1:1 по объему). Раствор сливают в круглодонную колбу на 250 мл упаривают до объема 30 - 40 мл. К оставшемуся водному раствору добавляют 50 мл дистиллированной воды, 10 мл насыщенного раствора NaCl, переносят в делительную воронку на 250 мл и экстрагируют трижды по 20 мл смеси гексан-эфир (4:1). Объединенную органическую фазу упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха. Остаток растворяют в 5 мл ацетона, добавляют 70 мл воды и 10 мл насыщенного раствора NaCl. Раствор переносят в делительную воронку на 250 мл и экстрагируют трижды по 20 мл хлороформа. Хлороформный экстракт сливают через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу на 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха. Далее проводят очистку экстрактов на колонке Б с силикагелем по п. 2.6.4.2 или на колонке В с флорисилом по [п. 2.6.4.3](#p100227). Очистка на колонке с флорисилом является более эффективной. 2.6.4.2. Очистка на колонке Б с силикагелем. Остаток в колбе, полученный по [п. 2.6.4.1](#p100223) с помощью 3 - 5 мл элюента N 1 количественно переносят пипеткой в колонку Б, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Промывают колонку 30 мл гексана, который отбрасывают, затем 35 мл основного элюента N 1. Первые 10 мл основного элюата отбрасывают, оставшиеся 25 мл собирают в круглодонную колбу на 50 - 100 мл и упаривают досуха. Остаток экстракта зерна и зеленой массы кукурузы растворяют в 10 мл, соломы - в 4-х мл подвижной фазы N 1 или в 1 мл подвижной фазы N 2 (для всех растительных объектов) и анализируют на содержание флудиоксонила соответственно по [п. 2.7.1](#p100235) или [2.7.2](#p100246). 2.6.4.3. Очистка на колонке В с флорисилом. Остаток в колбе по [п. 2.6.4.2](#p100226) с помощью 3 - 5 мл элюента N 1 количественно переносят пипеткой в колонку В, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Промывают колонку 20 мл гексана, 30 мл элюента N 1, затем 50 мл основного элюента N 2. Гексан, элюат N 1, а также 20 мл основного элюата N 2 отбрасывают, остальные 30 мл собирают в круглодонную колбу на 50 - 100 мл и упаривают досуха. Остаток экстракта зерна и зеленой массы кукурузы растворяют в 10 мл, соломы - в 4-х мл подвижной фазы N 1 или в 1 мл подвижной фазы N 2 (для всех растительных объектов) и анализируют на содержание флудиоксонила соответственно по [п. 2.7.1](#p100235) или [2.7.2](#p100246). ##### 2.6.5 Зеленая масса, семена и масло подсолнечника 2.6.5.1. Экстракция. Навеску (25 г) измельченной зеленой массы заливают 100 мл ацетонитрила и гомогенизируют в течение 5 минут при 8000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 50 мл ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту (около 30 мл), эквивалентную 5 г растительного материала. Навеску (10 г) размолотых семян помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл ацетонитрила и помещают в ультразвуковую баню на 5 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр и остаток на фильтре промывают 30 мл ацетонитрила. Из полученного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 60 мл), эквивалентную 5 г семян. К навеске (5 г) масла добавляют 20 мл гексана и переносят в делительную воронку, приливают 30 мл ацетонитрила и смесь встряхивают в течение 1 минуты. Собирают ацетонитрильную фазу, а гексановый раствор масла повторно экстрагируют 20 мл ацетонитрила. Ацетонитрильные фракции объединяют. 2.6.5.2. Очистка экстрактов. Аликвоты экстрактов зеленой массы и семян, и ацетонитрильный экстракт масла переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, добавляют 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 минуты. Гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фазу упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 40 °C. Сухой остаток дважды обрабатывают 10 мл порциями смеси ацетонитрил-вода (3:7 по объему) и полученный раствор переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. Добавляют 30 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (4:1 по объему) и встряхивают в течение 1 минуты. Собирают верхний слой (фаза гексан-эфир), содержащий флудиоксонил, и ацетонитрильный слой повторно обрабатывают 20 мл смеси гексан-диэтиловый эфир. Объединенный гексан-эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.5.3. 2.6.5.3. Очистка на колонке с оксидом алюминия. Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. 2.6.5.2](#p100232) экстрактов зеленой массы, семян и масла, количественно переносят тремя 1-мл порциями элюента N 3 в подготовленную для анализа подсолнечника хроматографическую колонку А. Флудиоксонил элюируют 50 мл смеси гексан-этилацетат (90:10 по объему), отбрасывая первые 15 мл элюента и собирая последующие 35 мл в грушевидную колбу емкостью 50 мл. Полученный раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °C. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ и анализируют на содержание флудиоксонила по [п. 2.7.4](#p100268). ### 2.7. Условия хроматографирования ##### 2.7.1 Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США) Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Hipersil ODS, зернением 5 мкм Температура колонки комнатная Подвижная фаза ацетонитрил-вода (1:1 по объему) Скорость потока элюента 1 мл/мин. Рабочая длина волны 268 нм Чувствительность 0,005 ед. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы 20 мкл Время выхода флудиоксонила 8 - 8,5 мин. Линейный диапазон детектирования 0,5 - 5 нг Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,25 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой N 1 для ВЭЖХ. ##### 2.7.2 Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия) Колонка стальная, длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Силасорб 600, зернением 5 мкм Температура колонки комнатная Подвижная фаза хлороформ-метанол (95,5:0,5 по объему) Скорость потока элюента 100 мкл/мин. Рабочая длина волны 268 нм Чувствительность 0,02 ед. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы 10 мкл Время выхода флудиоксонила около 6 мин. Линейный диапазон детектирования 5 - 100 нг Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой N 2 для ВЭЖХ. ##### 2.7.3 Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия) Колонка стальная длиной 80 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Сепарон CGN-CN, зернением 5 мкм Температура колонки комнатная Подвижная фаза н-гексан-метанол-изопропанол (92:4:4 по объему) Скорость потока элюента 100 мкл/мин. Рабочая длина волны 268 нм Чувствительность 0,02 ед. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы 10 мкл Время выхода флудиоксонила 6,7 мин. Линейный диапазон детектирования 5 - 100 нг Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют дихлорметаном. ##### 2.7.4 Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Altex (США) Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100А-С18, зернением 5 мкм Температура колонки комнатная Подвижная фаза ацетонитрил-вода (50:50 по объему) Скорость потока элюента 0,7 мл/мин.
Рабочая длина волны 268 нм
Чувствительность 0,02 ед. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы 50 мкл Время удерживания флудиоксонила около 9 мин. Линейный диапазон детектирования 2,5 - 25 нг Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой N 1 для ВЭЖХ. ### 2.8. Обработка результатов анализа Содержание флудиоксонила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: C V X = ---, m где:
X - содержание флудиоксонила в пробе, мг/кг; мг/л;
C - концентрация флудиоксонила в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику, мкг/мл; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
m - масса (или объем) анализируемого образца, г (мл). ## 3. Требования техники безопасности При выполнении измерений концентраций флудиоксонила следует соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях в соответствии с "[Правилами](https://bukva.ai/docs/pravila-2455-81) устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР" (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на прибор. ## 4. Разработчики Ракитский В.Н., член-кор. РАМН, проф.; Юдина Т.В., д.б.н.; Федорова Н.Е., д.б.н.; Ларькина М.В., к.б.н. (зерно и солома хлебных злаков, зерно и зеленая масса кукурузы). Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана). 141000, г. Мытищи Московской обл., ул. Семашко, д. 2, лаборатория аналитических методов контроля.
Телефон: (095) 586-1276.
Новицкий В.Ф., Марусич Н.И., Капуцкая В.К., Гинько Г.В. (вода, почва, картофель).
Белорусский научно-исследовательский санитарно-гигиенический институт. 220012, г. Минск, ул. Ф. Скорины, 8/47, тел.: 394-375.
Талалакина Т.Н., Макеев А.М., к.б.н. (зеленая масса, семена и масло подсолнечника).
Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии. 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел.: 592-92-20.
---