МУК 4.1.1139-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций квизалофоп-П-тефурила в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Минздравом России)

Г. Г. Онищенко

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ КВИЗАЛОФОП-П-ТЕФУРИЛА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Дата введения 1 января 2003 года

1. Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России.

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

1. Вводная часть

Фирма-производитель: Юнирояль Кэмикал Лтд. (Великобритания).

Торговое название: ПАНТЕРА.

Действующее вещество: квизалофоп-П-тефурил.

Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: Тетрагидрофурфуриловый эфир (R)-2[4-(6-хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовой кислоты.

Структурная формула (не приводится).

    C  H  ClN O                                        М. м. 428,9
     22 21   2 5

Кристаллическое вещество белого цвета без запаха. -8

    Давление паров: < 5,9 x 10   мм Hg при 25 °C.
    Растворимость  (г/л  при  25  °C):  в воде - 0,009, метаноле -

64,39, толуоле — 651,70, гексане — 12,43.

Температура плавления: 72,5 — 74,5 °C.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода — log — p 4,3222.

Агрегатное состояние в воздухе рабочей зоны — аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — более 50 1019 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD ) для кроликов — 50 более 2000 мг/кг.

Гигиенические нормативы

ОБУВ для воздуха рабочей зоны — 0,5 мг/куб. м;

ОБУВ для атмосферного воздуха — 0,005 мг/куб. м.

Область применения препарата

Квизалофоп-П-тефурил — новый послевсходовый гербицид,

2. Методика измерения концентраций квизалофоп-П-тефурила методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на определении квизалофоп-П-тефурила с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры «синяя лента».

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, а также пестицидов, применяемых при возделывании сахарной свеклы и картофеля.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода (P = 0,95)

Число параллельных определений 6

Предел обнаружения 5 нг (измерение по п. 2.7.1); в хроматографируемом объеме 1,0 нг (измерение по п. 2.7.2)

Предел обнаружения в воздухе 0,05 мг/куб. м (при отборе 10 л воздуха)

Диапазон определяемых 0,05 — 1,5 мг/куб. м концентраций

Среднее значение определения        97,1%
Стандартное отклонение (S)          6,89%
Относительное стандартное           2,82%

отклонение (DS)

Суммарная погрешность измерения не превышает 23%

2.2. Реактивы и материалы

Квизалофоп-П-тефурил с содержанием д.в. 99,8% (Юнирояль Кэмикал Лтд, Великобритания)

Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-4326-76

Вода бидистиллированная или деионизованная

предварительно промытые ацетонитрилом

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Perkin-Elmer (США) или аналогичный

Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, Hipersil ODS, зернением 5 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа

Жидкостный хроматограф Милихром с ультрафиолетовым детектором

Хроматографическая колонка стальная, длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная Сепароном С18, зернением 5 мкм

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-76 или аналогичный

Весы аналитические типа ВЛА-200                   ГОСТ 34104-80Е
Насос водоструйный                                ГОСТ 10696-75
Аспирационное устройство типа ЭА-1                ТУ 25-11-1414-78

или аналогичное

Барометр                                          ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2,             ГОСТ 215-73Е

цена деления 1 °C, пределы измерения 0 — 55 °C

Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 мл           ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные вместимостью 10, 50, 500 мл       ГОСТ 1770-74Е
Колбы грушевидные со шлифом вместимостью 100 мл   ГОСТ 10394-72

Стаканы химические вместимостью 100 мл ГОСТ 25336-82Е

Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл ГОСТ 20292-74

Воронки химические, конусные, ГОСТ 25336-82Е диаметром 34 — 40 мм

Фильтродержатели

Стеклянные палочки

2.4. Отбор проб

Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».

В течение 15 мин. последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух с объемным расходом 2,0 — 3,0 л/мин. аспирируют в течение 5 мин. через фильтр «синяя лента».

Фильтры с отобранными пробами, упакованные в полиэтиленовые пакеты, можно хранить в холодильнике при 4 — 6 °C в течение 5 дней.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

Отмеряют 300 мл воды, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют до метки ацетонитрил, перемешивают и дегазируют.

2.5.2 Кондиционирование колонки

Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (7:3, по объему) в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 100 мкл/мин. (измерение по п. 2.7.1) или 1 мл/мин. (измерение по п. 2.7.2).

2.5.3 Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор квизалофоп-П-тефурила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,0100 г вещества в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10 и 15 мкг/мл (измерение по п. 2.7.1) готовят из основного стандартного раствора квизалофоп-П-тефурила соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.1).

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2; 0,3 и 0,5 мкг/мл (измерение по п. 2.7.2) готовят из основного стандартного раствора квизалофоп-П-тефурила соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.1).

Рабочие растворы хранятся в холодильнике в течение 3 дней.

2.5.4 Построение градуировочного графика

2.5.4.1. Градуировочный график А (измерение по п. 2.7.1). Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 10 мкл рабочего стандартного раствора квизалофоп-П-тефурила с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 и 15,0 мкг/мл.

2.5.4.2. Градуировочный график В (измерение по п. 2.7.2). Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора квизалофоп-П-тефурила с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2; 0,3 и 0,5 мкг/мл.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты (или площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график (А или В) зависимости высоты (или площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации квизалофоп-П-тефурила в растворе в мкг/мл.

2.6. Описание измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл ацетонитрила, оставляют на 5 — 7 мин., периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетонитрила объемом 10 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 1 (измерение по п. 2.7.1) или 10 мл (измерение по п. 2.7.2) подвижной фазы для ВЭЖХ и хроматографируют.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1 Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия)

Колонка стальная, длина 64 мм, внутренний диаметр 2 мм, заполнение Сепарон С18, зернение 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза ацетонитрил-вода (7:3, по объему).

Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.

Рабочая длина волны: 236 нм.

Чувствительность: 0,4 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 10 мкл.

Время выхода квизалофоп-П-тефурила: около 6 мин.

Линейный диапазон детектирования: 5 — 150 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 15 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

2.7.2 Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

Колонка стальная, длина 25 см, внутренний диаметр 4,6 мм, заполнение Hipersil ODS, зернение 5 мкм

    Температура колонки                     комнатная
    Подвижная фаза                          ацетонитрил-вода (7:3,

                                        по объему)

    Скорость потока элюента                 1 мл/мин.
    Рабочая длина волны                     236 нм
    Чувствительность                        0,05 ед.

                                        абсорбции на шкалу

    Объем вводимой пробы                    20 мкл
    Время выхода квизалофоп-П-тефурила      около 12 мин.
    Линейный диапазон детектирования        1,0 - 10 нг

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание квизалофоп-П-тефурила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                            C x W

X = -----, V

где:

X — содержание квизалофоп-П-тефурила в пробе воздуха, мг/куб. м;

C — концентрация квизалофоп-П-тефурила в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

W — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

V — объем пробы воздуха, отобранного для анализа, приведенного к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °C), куб. дм.

                                P

V = 0,386 x ------- x u t, 273 + T

где:

T — температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °C;

P — атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u — расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;

t — длительность отбора пробы, мин.

3. Требования техники безопасности

При выполнении измерений концентраций квизалофоп-П-тефурила следует соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях в соответствии с «Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР» (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на прибор.

4. Разработчики

Ракитский В.Н., член-корр. РАМН, проф., Юдина Т.В., Федорова Н.Е. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл., ул. Семашко, д. 2).

Телефон: (095) 586-12-76.

---