--- title: "\"МУК 4.1.1137-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила по его основному метаболиту квизалофоп-свободной кислоте в воде, почве, в семенах и масле льна, сои, подсолнечника и в соломке льна методом газожидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.1137-02" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1137-02" --- ## "МУК 4.1.1137-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила по его основному метаболиту квизалофоп-свободной кислоте в воде, почве, в семенах и масле льна, сои, подсолнечника и в соломке льна методом газожидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.1137-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила по его основному метаболиту квизалофоп-свободной кислоте в воде, почве, в семенах и масле льна, сои, подсолнечника и в соломке льна методом газожидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Минздравом России) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 января 2003 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО** #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ** **КВИЗАЛОФОП-П-ТЕФУРИЛА ПО ЕГО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ** **КВИЗАЛОФОП-СВОБОДНОЙ КИСЛОТЕ В ВОДЕ, ПОЧВЕ, В СЕМЕНАХ** **И МАСЛЕ ЛЬНА, СОИ, ПОДСОЛНЕЧНИКА И В СОЛОМКЕ ЛЬНА**
**МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1137-02** Дата введения 1 января 2003 года 1. Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). 2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России. 3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко. 4. Введены впервые. ## 1. Вводная часть Фирма-производитель: Юнироял Кемикал Ко. Инк. Торговое наименование препарата: ПАНТЕРА, КЭ. Действующее вещество (д.в.): квизалофоп-П-тефурил. Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[4-(6-=хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовой кислоты тетрагидрофурфуриловый эфир. Структурная формула (не приводится). C H N ClO М. м. 428 22 21 2 5 Кристаллический порошок белого цвета без запаха. -8 Давление паров: < 5,9 x 10 мм Hg при 25 °C. Растворимость (мг/л при 25 °C): в воде - 3,753, метаноле - 6439, толуоле - 65170, н-гексан - 1243. Температура плавления: 72,5 - 74,5 °C. Коэффициент распределения в системе октанол/вода: log - p 4,3222. Основным продуктом гидролитического разложения (метаболитом) квизалофоп-П-тефурила является 2-[4-(6-хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовая кислота. Токсикологическая характеристика: ДСД для массы тела человека 0,004 - мг/кг.
Гигиенические нормативы
ОДК для почвы - 0,1 мг/кг;
ОДУ для воды водоемов - 0,002 мг/куб. дм;
МДУ в семенах подсолнечника и сои - 0,04 мг/кг;
МДУ в масле подсолнечника и сои - 0,06 мг/кг.
ПАНТЕРА, КЭ - послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями при возделывании овощных и технических культур. ## 2. Методика определения остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила по его основному метаболиту квизалофоп-свободной кислоте в воде, почве, в семенах и масле льна, сои, подсолнечника и в соломке льна с применением газожидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на количественном определении квизалофоп-свободной кислоты - основного метаболита (продукта гидролиза) квизалофоп-П-тефурила. Метод включает извлечение квизалофоп-свободной кислоты и остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила из анализируемого объекта органическим растворителем, проведение щелочного гидролиза квизалофоп-П-тефурила до квизалофоп-свободной кислоты, очистку пробы перераспределением веществ в системе несмешивающихся растворителей, дериватизацию квизалофоп-свободной кислоты (метилирование диазометаном) до квизалофоп-П-метила и очистку экстракта на колонке с оксидом алюминия. Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением газожидкостной хроматографии (ГЖХ) и использованием детектора постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР), детектора по захвату электронов (ДЭЗ) или термоионного детектора (ТИД), насадочной или капиллярной колонки с неподвижными фазами типа OV-17 или SE-30. ##### 2.1.2 Избирательность метода Прочие пестициды, применяемые в интенсивной сельскохозяйственной технологии, определению не мешают. Очистка экстрактов, а также использование селективных детекторов позволяют устранить влияние мешающих анализу примесей. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1, [2](#p100049), [3](#p100061). Таблица 1 **МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**
Метрологические параметры, p = 0,95, n = 15Анализируемый объект
маслосеменасоломка льна
Предел обнаружения, мг/кг0,050,020,02
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг0,05 - 0,50,02 - 0,50,02 - 0,5
Среднее значение определения, %79,386,781,0
Стандартное отклонение S, %11,711,412,2
Относительное стандартное отклонение DS, %6,56,36,8
Доверительный интервал среднего результата, %79,3 +/- 13,986,7 +/- 13,481,0 +/- 14,6
Таблица 2 **ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ И ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ**
Анализируемый объектp = 0,95, n = 5
Добавлено, мг/кгОбнаружено, %Доверительный интервал, +/- %
Масло0,05 0,1 0,572 81 8515,9 14,8 13,0
Семена0,02 0,05 0,180 85 9515,7 14,4 12,1
Соломка льна0,02 0,05 0,175 82 8615,7 15,1 14,5
Таблица 3 **ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КВИЗАЛОФОП-П-ТЕФУРИЛА** В МОДЕЛЬНЫХ ПРОБАХ ВОДЫ И ПОЧВЫ (p = 0,95, n = 6) | Анализируемые объекты | Внесено, мг/куб. дм, мг/кг | Извлечено, % | Доверительный интервал среднего результата, % | | --- | --- | --- | --- | | Вода | 0,001 0,002 0,004 0,008 | 77,3 82,6 85,8 88,7 | +/- 4,6 +/- 4,1 +/- 3,5 +/- 3,2 | | Почва | 0,05 0,1 0,2 0,4 | 74,5 78,2 82,7 85,5 | +/- 5,3 +/- 4,9 +/- 4,4 +/- 3,8 | ### 2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование ##### 2.2.1 Реактивы, материалы и растворы Аналитический стандарт квизалофоп-П-тефурила Аналитический стандарт квизалофоп-свободной кислоты Аналитический стандарт квизалофоп-П-метила Азот газообразный, высокой чистоты ТУ 301-07-25-89 Ацетон, осч ТУ 2633-004-11291058-94 Ацетонитрил, хч ТУ 6-09-4326-76 Вода дистиллированная и перегнанная над KMnO и щелочью 4 Водород газообразный, высокой чистоты ТУ 301-07-27-90 н-Гексан, хч ТУ 6-09-3375-78 Гелий газообразный (сжатый) ТУ 51-940-80 очищенный марки "А" Диэтиловый эфир, ч [ГОСТ 6262-79](https://bukva.ai/docs/gost-6262-79) Кислота серная, осч [ГОСТ 14262-78](https://bukva.ai/docs/standart-gost-14262-78) Кислота соляная, осч 23-4 ТУ 6-09-01-794-90 Калия гидроксид, чда ГОСТ 24363-80 Натрий серно-кислый безводный, чда [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Натрий хлористый, чда ГОСТ 4233-77 N-нитрозометилмочевина ТУ 6-09-11-1643-82 Оксид алюминия для хроматографии, ч, размер частиц 100 - 200 мкм, 1-й степени активности по Брокману, нейтральный Стандартные растворы квилазофоп-П-тефурила в ацетоне с концентрацией 0,05 и 0,5 мг/мл для фортификации проб Стандартные растворы квизалофоп-свободной кислоты в ацетоне с концентрациями 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 8,0 мкг/мл для построения калибровочных графиков Стандартные растворы квизалофоп-П-метила в н-гексане с концентрацией 0,05; 0,5 мг/мл ##### 2.2.2 Приборы, аппаратура, посуда Газовый хроматограф с ДЭЗ, ДПР или ТИД Колонка хроматографическая набивная стеклянная длиной 1,0 м и внутренним диаметром 4,0 мм с неподвижной фазой 5% OV-17 на Inerton Super-AW, 0,16 - 0,20 мм Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 15 м и внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой NBW-30 (типа OV-101) толщиной 1 мкм Колонка хроматографическая набивная стеклянная длиной 1,0 м и внутренним диаметром 3,0 мм с неподвижной фазой 5% SE-30 на хроматоне N-Super, 0,125 - 0,160 мм Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 5 м и внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30) толщиной 2,65 мкм Колонки хроматографические стеклянные длиной 300 мм и внутренним диаметром 10 мм для очистки экстрактов Аппарат для встряхивания или аналогичный ТУ 64-1-1081-73 Баня водяная ТУ 64-1-2850-76 Весы аналитические типа ВЛА-200 ГОСТ 34104-80 Весы лабораторные типа ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-80 Пробирки мерные конические на 10 мл ГОСТ 1770-74 Воронка Бюхнера ГОСТ 9147-80 Воронки делительные емкостью 500 и 1000 мл ГОСТ 25336-82 Воронки для фильтрования стеклянные ГОСТ 25336-82 Колба Бунзена емкостью 250 мл ГОСТ 25336-82 Колбы круглодонные емкостью 250 мл ГОСТ 25336-82 Колбы мерные емкостью 250, 1000 мл ГОСТ 1770-74 Колбы плоскодонные на 250, 500 мл ГОСТ 25336-82 Колбы мерные емкостью 10, 50, 100 мл ГОСТ 1770-74 Концентраторы грушевидные ГОСТ 10394 (конические) НШ 19, КГУ-100-14/19, ТС Мельница лабораторная (кофемолка) Микрошприц МШ 10А ТУ 64-1-2850 Насос стеклянный вакуумный водоструйный ГОСТ 10696-75 Пипетки мерные, емкостью 0,1, 1, 2, 5 и 10 мл [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Ротационный испаритель ИР-1М или аналогичного типа ТУ 25-11-917-76 Сито с диаметром отверстий 1,0 мм Стаканы стеклянные на 100 мл ГОСТ 6236 Термометр градуировочный ГОСТ 2823-73 (при погружении всей нижней части) Универсальная индикаторная бумага ТУ 6-09-1181-76 Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении Установка для упаривания органических растворителей в токе азота Установка ультразвуковая (УЗ-баня) "Серьга" УЗМ 002 или другая аналогичного типа. Выходная электрическая мощность генератора не менее 70 Вт; рабочая частота установки - 22 кГц +/- 7,5% Фильтры бумажные "красная лента" ТУ 6-09-1678-86 Фильтры бумажные "белая лента" ТУ 6-09-1678-86 Фильтры бумажные "синяя лента" ТУ 6-09-1678-86 Фильтр Шотта IV ГОСТ 9775-61 Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 5 и 10 мл Чашка фарфоровая ГОСТ 9147-80 ### 2.3. Подготовка к определению ##### 2.3.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей проводят очистку растворителей в соответствии с общепринятыми методиками. ##### 2.3.2 Подготовка и кондиционирование хроматографической набивной колонки Подготовленной насадкой заполняют стеклянную колонку и уплотняют ее под вакуумом. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют ее при рабочем расходе газа-носителя и температуре 280 °C в течение 8 - 10 ч. ##### 2.3.3 Приготовление стандартных растворов 2.3.3.1. Стандартные растворы квизалофоп-П-метила. Для приготовления маточного стандартного раствора навеску квизалофоп-П-метила массой 0,1 г растворяют в гексане в мерной колбе емкостью 200 мл. После растворения вещества раствор в колбе доводят до метки гексаном. Полученный раствор соответствует концентрации 0,5 мг/мл. Далее 1,0 мл гексанового раствора с концентрацией 0,5 мг/мл помещают в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят гексаном до метки. Полученный раствор имеет концентрацию 5,0 мкг/мл. Мерные колбы закрывают пробками и растворы тщательно перемешивают. Срок годности растворов не более 0,5 года при условии хранения в холодильнике. Данные растворы используют для определения времени удерживания квизалофоп-П-метила в целях дальнейшей идентификации вещества в анализируемых пробах и отработки условий хроматографирования. При изучении полноты определения квизалофоп-П-тефурила и квизалофоп-свободной кислоты для фортификации модельных проб используют ацетоновые растворы квизалофоп-П-тефурила с концентрацией 0,05 или 0,5 мг/мл. 2.3.3.2. Стандартные растворы квизалофоп-свободной кислоты. Для приготовления маточного стандартного раствора квизалофоп-свободной кислоты навеску массой 0,1 г растворяют в ацетоне в мерной колбе емкостью 200 мл. После растворения вещества раствор в колбе доводят до метки ацетоном. Полученный раствор соответствует концентрации 0,5 мг/мл. Далее 1,0 мл ацетонового раствора с концентрацией 0,5 мг/мл помещают в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят ацетоном до метки. Полученный раствор имеет концентрацию 5,0 мкг/мл. Из этого раствора получают методом дальнейших последовательных разведений ацетоном растворы следующих концентраций: 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 8,0 мкг/мл. Мерные колбы закрывают пробками и растворы тщательно перемешивают. Срок годности растворов не более 0,5 года при условии хранения в холодильнике. Полученные растворы используют для построения калибровочных графиков. ##### 2.3.4 Построение калибровочных графиков Для построения калибровочного графика осуществляется следующая процедура: по 1,0 мл приготовленных ацетоновых растворов квизалофоп-свободной кислоты (см. [п. 2.3.3.2](#p100143)) упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре и далее переходят к стадиям метилирования ([п. 2.5.4](#p100177)) и очистки ([п. 2.5.5](#p100179)). В результате получают растворы квизалофоп-П-метила различных концентраций в 1,0 мл гексана. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика от концентрации квизалофоп-свободной кислоты. 2.3.5. Подготовка и кондиционирование хроматографических колонок с оксидом алюминия 1 степени активности по Брокману для очистки экстрактов Оксид алюминия прогревают в фарфоровой чашке в термостате при 150 °C в течение 5 ч и охлаждают до комнатной температуры (1 степень активности по Брокману). Колбу с оксидом алюминия хранят герметично закрытой. Нижний зауженный конец стеклянной колонки закрывают тампоном из хлопковой ваты и заполняют (при легком встряхивании) 5,0 г оксида алюминия (высота слоя ~ 7,0 см). Над слоем оксида алюминия помещают слой безводного сульфата натрия высотой 2,0 см и перед использованием промывают колонку 20,0 мл гексана. ##### 2.3.6 Приготовление эфирного раствора диазометана В пенициллиновый флакон емкостью 5,0 мл помещают навеску нитрозометилмочевины 100 - 120 мг и флакон пломбируют резиновой пробкой. В другой флакон такого же объема наливают 2,0 мл диэтилового эфира. Флакон пломбируют резиновой пробкой и охлаждают в морозильной камере в течение 1 ч при температуре 8 - 10 °C. Затем готовят установку для получения диазометана (схема установки представлена на рис. 6 - не приводится). Резиновую пробку флакона с эфиром прокалывают медицинской иглой диаметром 1,0 мм таким образом, чтобы один конец находился над поверхностью эфира, а другой выходил наружу (для сброса излишнего давления диазометана). Два флакона после этого соединяют между собой гибкой полихлорвиниловой трубкой-перемычкой, на концах которой герметично вставлены медицинские иглы диаметром 2,0 мм. Одна игла находится в свободном объеме флакона с нитрозометилмочевиной, другая игла погружается в слой эфира на дно флакона-приемника. Затем пробка флакона с нитрозометилмочевиной прокалывается иглой медицинского шприца на 1,0 мл, и из шприца по каплям вносится 50%-ный водный раствор гидроокиси калия. Образовавшийся в ходе реакции диазометан пропускается через эфир до насыщения (появление желтизны спелого лимона). Процедуру обязательно проводят в работающем вытяжном шкафу. ### 2.4. Отбор проб Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.79, N 2051-79. Пробы воды при наличии взвеси фильтруют через бумажный фильтр белая лента и хранят в закрытой стеклянной таре при температуре 4 - 6 °C не более 3 дней. Пробы почвы просушивают до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре. Семена и соломку просушивают до воздушно-сухого состояния и хранят до анализа в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре. Пробы почвы перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пестиком разминают крупные комки, из проб пинцетом удаляют включения: корни растений, насекомых, камни, стекло, кости, уголь и другие. После этого пробы почвы растирают в ступке пестиком, просеивают через сито с диаметром отверстий 1,0 мм и после перемешивания отбирают усредненную аналитическую пробу. Перед анализом сухие пробы измельчают: семена - в лабораторной мельнице (кофемолке), соломку - ножницами и после перемешивания отбирают усредненную аналитическую пробу. ### 2.5. Описание определения ##### 2.5.1 Вода Аналитическую пробу воды объемом 500 куб. см помещают в делительную воронку емкостью 1000 мл и добавляют 5,0 мл 5%-ного водного раствора гидроокиси калия. Содержимое воронки перемешивают встряхиванием и оставляют на 60 мин. при температуре 4 - 6 °C. После этого в воронку добавляют 100 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки перемешивают, добавляют 100 мл н-гексана и энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний водно-солевой слой сливают в мерную колбу емкостью 1000 мл, а верхний гексановый слой отбрасывают. Водно-солевую фракцию возвращают в делительную воронку и процедуру очистки пробы повторяют еще раз с использованием 50 мл гексана. Делительную воронку промывают водопроводной и ополаскивают дистиллированной водой. В водно-солевую фракцию, находящуюся в колбе, добавляют при постоянном перемешивании по каплям концентрированную серную кислоту до уровня pH 1 - 2. Водно-солевую фракцию помещают в делительную воронку и добавляют 75 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (80:20 по объему). Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний водно-солевой слой сливают в мерную колбу емкостью 1000 мл, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя - 1,0 - 1,5 см), помещенный в воронке для фильтрования на бумажный фильтр "синяя лента", в круглодонную колбу емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют еще два раза с использованием последовательно 75 и 50 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (80:20 по объему). После этого водно-солевую фракцию отбрасывают. Объединенный гексано-эфирный экстракт, находящийся в колбе, помещают в ротационный вакуумный испаритель и упаривают растворители досуха при температуре 40 °C. Во флакон после его охлаждения до комнатной температуры вносят 1 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана ([п. 2.3.6](#p100151)), флакон закрывают пробкой и оставляют при комнатной температуре на 2 ч. После этого в работающем вытяжном шкафу в токе азота при комнатной температуре во флаконе упаривают досуха диэтиловый эфир и остаточные концентрации диазометана. Во флакон с сухим остатком вносят 0,5 мл ацетона и проводят количественное определение квизалофоп-П-тефурила по [п. 2.6](#p100181). ##### 2.5.2 Почва Аналитическую пробу почвы массой 20,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, добавляют 50 мл 1,0%-ного водного раствора гидроокиси калия и 50 мл ацетона. Содержимое колбы перемешивают встряхиванием и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане по 5 мин. два раза. Колбу с пробой закрывают и оставляют на 14 - 16 ч (на ночь) при комнатной температуре. После этого содержимое колбы встряхивают, подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане по 5 мин. два раза и фильтруют через бумажный фильтр "белая лента" под вакуумом на воронке Бюхнера в колбу Бунзена емкостью 250 мл. Оставшуюся часть пробы в колбе промывают 20 мл ацетона и экстракт также фильтруют. При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 50 мл 1,0%-ного водного раствора гидроокиси калия и 50 мл ацетона и встряхивают в течение 60 мин. Колбу с пробой закрывают и оставляют на 14 - 16 ч (на ночь) при комнатной температуре. После этого содержимое колбы встряхивают 30 мин. с использованием аппарата для встряхивания и фильтруют через бумажный фильтр "белая лента" под вакуумом на воронке Бюхнера в колбу Бунзена емкостью 250 мл. Оставшуюся часть пробы в колбе промывают 20 мл ацетона и экстракт также фильтруют. Объединенный экстракт количественно переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки перемешивают, добавляют 50 мл гексана и энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний слой сливают в мерную колбу емкостью 250 мл, а верхний гексановый слой отбрасывают. Водно-солевую фракцию возвращают в делительную воронку и процедуру очистки экстракта повторяют еще раз с использованием 50 мл гексана. Делительную воронку промывают водопроводной и ополаскивают дистиллированной водой. В водно-солевую фракцию, находящуюся в колбе, добавляют при постоянном перемешивании по каплям концентрированную серную кислоту до уровня pH 1 - 2. Водно-солевую фракцию переносят в делительную воронку и добавляют 50 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (80:20, по объему). Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний слой сливают в мерную колбу емкостью 250 мл, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя - 1,0 - 1,5 см), помещенный в воронке для фильтрования на бумажный фильтр "синяя лента", в круглодонную колбу емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют еще два раза с использованием последовательно 50 и 30 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (80:20 по объему). После этого водно-солевую фракцию отбрасывают. Колбу с объединенным гексано-эфирным экстрактом помещают в ротационный вакуумный испаритель и упаривают растворители досуха при температуре 40 °C. Во флакон после его охлаждения до комнатной температуры вносят 1 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана ([п. 2.3.6](#p100151)), флакон закрывают пробкой и оставляют при комнатной температуре на 2 ч. После этого в работающем вытяжном шкафу в токе азота при комнатной температуре во флаконе упаривают досуха диэтиловый эфир и остаточные концентрации диазометана. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и проводят количественное определение квизалофоп-П-тефурила по [п. 2.6](#p100181). ##### 2.5.3 Семена, масло и соломка льна 2.5.3.1. Экстракция семян. Навеску измельченных семян массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, заливают 100 мл ацетона и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 5 мин. Затем для отделения механических примесей от образовавшейся суспензии экстракт пропускают через коническую воронку с хлопковой ватой в химический стакан. Воронку и вату промывают 10 мл ацетона. Далее экстракт фильтруют с помощью воронки Бюхнера (фильтр "белая лента") с последующей промывкой фильтра 10 мл ацетона. Экстракт переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 100 мл 0,5%-ного водного раствора гидроокиси калия и выдерживают смесь в течение 1 ч. Далее в воронку добавляют 150 мл насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и добавляют 50 мл гексана. Воронку встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев нижний водный слой собирают в колбу, а гексановый слой отбрасывают. Делительную воронку тщательно промывают дистиллированной водой и переносят в нее водную фракцию, добавляют 50 мл гексана и процедуру повторяют еще раз. Водный слой собирают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл и подкисляют 2,0 - 2,5 мл концентрированной HCl (до pH 1,0 - 2,0), контролируя pH с помощью индикаторной бумаги, и пропускают через фильтр Шотта N 4. Затем водную фракцию переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл и добавляют 100 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1). Воронку встряхивают в течение минуты и после разделения слоев (выдерживать не менее 30 мин.) водный слой отбрасывают. В случае образования эмульсии в оставшийся органический слой добавляют несколько капель этилового спирта, осторожно перемешивают и пропускают через коническую воронку с ватой и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0 - 1,5 см) в грушевидную колбу емкостью 200 мл. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл гексана. Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 40 °C до объема 5 - 10 мл. Остаток экстракта переносят в коническую колбу или пенициллиновый флакон и упаривают досуха в токе азота при температуре 60 °C. Дальнейшие метилирование и очистку экстракта проводят в соответствии с [п. п. 2.5.4](#p100177) и [2.5.5](#p100179). 2.5.3.2. Экстракция масла. Образец масла массой 5,0 +/- 0,1 г помещают в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 120 мл гексана и хорошо перемешивают. Затем в делительную воронку добавляют 200 мл ацетонитрила, воронку интенсивно встряхивают в течение 1 мин. и выдерживают смесь не менее 30 мин. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой переносят в делительную воронку емкостью 1000 мл, добавляют 180 мл 0,5%-ного раствора гидроокиси калия и выдерживают смесь 1 ч при комнатной температуре. Затем в делительную воронку добавляют 100 мл насыщенного раствора хлорида натрия и хорошо перемешивают. Далее в делительную воронку добавляют 100 мл гексана, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев нижний водный слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, гексановый слой отбрасывают. Делительную воронку тщательно промывают, водную фракцию переносят в воронку и повторно проводят процедуру очистки с использованием 100 мл гексана. Далее водную фракцию подкисляют 3,0 - 3,5 мл концентрированной HCl (до pH 1,0 - 2,0). Делительную воронку тщательно промывают и переносят в нее подкисленную водную фракцию. В делительную воронку добавляют 100 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1). Воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев нижний водный слой отбрасывают, а органическую фазу пропускают через коническую воронку с ватой и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0 - 1,5 см) в грушевидную колбу емкостью 200 мл. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл гексана. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40 °C до объема 5 - 10 мл. Остаток экстракта переносят в коническую колбу или пенициллиновый флакон и упаривают досуха в токе азота при температуре 60 °C. Дальнейшие метилирование и очистку экстракта проводят в соответствии с [п. п. 2.5.4](#p100177) и [2.5.5](#p100179). 2.5.3.3. Экстракция соломки льна. Измельченный образец соломки льна массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, заливают 150 мл ацетона и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 5 мин. Затем экстракт отфильтровывают с помощью воронки Бюхнера (на фильтре "красная лента"). Фильтр промывают 10 мл ацетона. Экстракт переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 150 мл 0,5%-ного водного раствора гидроокиси калия и выдерживают смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Далее добавляют 75 мл насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и добавляют 50 мл гексана. Воронку встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев нижний водный слой собирают, а гексановый слой отбрасывают. Делительную воронку тщательно промывают дистиллированной водой и переносят в нее водную фракцию, добавляют 50 мл гексана и процедуру повторяют еще раз. Водный слой собирают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл и подкисляют 2,5 - 3,0 мл концентрированной HCl (до pH 1,0 - 2,0). После этого водную фракцию переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл и добавляют 100 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1). Воронку встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев водный слой отбрасывают, а органическую фазу пропускают через коническую воронку с ватой и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0 - 1,5 см) в грушевидную колбу емкостью 200 мл. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл гексана. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40 °C до объема 5 - 10 мл. Остаток экстракта переносят в коническую колбу или пенициллиновый флакон и упаривают досуха в токе азота при 60 °C. Дальнейшие метилирование и очистку экстракта проводят в соответствии с п. п. 2.5.4 и [2.5.5](#p100179). ##### 2.5.4 Метилирование К сухому остатку (из [п. п. 2.5.3.1](#p100172), [2.5.3.2](#p100174), [2.5.3.3](#p100176)) добавляют 1,0 мл эфира, насыщенного диазометаном, флакон закрывают и оставляют на 40 мин. при комнатной температуре. Затем эфир упаривают в токе азота досуха, растворяют сухой остаток в 2,0 мл гексана и экстракт подвергают очистке по п. 2.5.5. ##### 2.5.5 Очистка Гексановый экстракт (из [п. 2.5.4](#p100177)) количественно переносят на подготовленную колонку с оксидом алюминия 1-й степени активности по Брокману. После этого колонку промывают 20 мл н-гексана, который отбрасывают. Квизалофоп-П-метил элюируют 30 мл диэтилового эфира со скоростью не более 60 капель в минуту в грушевидную колбу-концентратор. Элюат упаривают в токе азота досуха при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл гексана и анализируют на содержание квизалофоп-П-метила в соответствии с п. 2.6. ### 2.6. Условия газохроматографического анализа ##### 2.6.1 Для набивной колонки с неподвижной фазой 5% OV-17
Газовый хроматограф "Hewlett-Packard 5890"
с ДЭЗ (порог чувствительности по линдану -10 не более 3 x 10 мг/с) или газовый хроматограф "Цвет-500" с ДПР (порог чувствительности по линдану -10 не более 5 x 10 мг/с) Колонка стеклянная спиральная длиной 1,0 м и внутренним диаметром 4,0 мм Носитель - Inerton Super-AW (0,16 - 0,20 мм) с неподвижной фазой 5% OV-17 -10 Рабочая шкала электрометра 2 x 10 А Скорость протяжки ленты самописца 0,3 см/мин. Скорость потока газа-носителя (азота в/ч ) 40 куб. см/мин. Температура колонки 280 °C испарителя 290 °C детектора 300 °C Объем вводимой пробы 2,0 мкл Время удерживания квизалофоп-П-метила 5,0 +/- 0,1 мин. Линейный диапазон определения 0,2 - 20 нг После выполнения 5 - 7 анализов набивную колонку следует прогреть при температуре 300 °C в течение 1 ч. ##### 2.6.2 Для набивной колонки с неподвижной фазой 5% SE-30 Газовый хроматограф "Цвет-500" с ТИД или ДПР Колонка хроматографическая набивная длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм с неподвижной фазой 5% SE-30 на хроматоне N-Super, 0,125 - 0,16 мм -10 Показания электрометра 32 x 10 Скорость движения ленты самописца 0,25 см/мин. Температура испарителя 260 °C колонки 260 °C детектора 310 °C Расход газа-носителя (азота в/ч) 40 куб. см/мин. Расход водорода и воздуха для ТИД 15 и 300 куб. см/мин. соответственно Объем вводимой пробы 2 мкл Время удерживания квизалофоп-П-метила 2,7 +/- 0,2 мин. Предел детектирования 0,5 нг Линейный диапазон детектирования 0,5 - 8,0 нг ##### 2.6.3 Для капиллярной колонки с неподвижной фазой NBW-30 (типа OV-101) Газовый хроматограф "Hewlett-Packard 589О" с ДЭЗ (порог чувствительности по линдану -10 не более 3 x 10 мг/с) или газовый хроматограф "Цвет-500" с ДПР (порог чувствительности по линдану -10 не более 5 x 10 мг/с) Колонка кварцевая капиллярная длиной 15 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой NBW-30 (типа OV-101) толщиной 1 мкм -10 Рабочая шкала электрометра 2 x 10 А Скорость потока азота в/ч 10 куб. см/мин. Скорость потока дополнительного 40 куб. см/мин. газа (азота в/ч) к детектору Температура колонки 250 °C испарителя 270 °C детектора 300 °C Объем вводимой пробы 2,0 мкл Время удерживания квизалофоп-П-метила 3,0 +/- 0,1 мин. Линейный диапазон определения 0,2 - 20 нг ##### 2.6.4 Для капиллярной колонки с неподвижной фазой SE-30 Газовый хроматограф с ТИД или ДЭЗ Колонка кварцевая капиллярная длиной 5 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30), 2,65 мкм Температура колонки программирование от 180 (3 мин.) до 280 °C (15 мин.) со скоростью 10 °C/мин. испарителя 260 °C детектора 300 °C Расход газов: газа-носителя (гелий марки "А") 7 куб. см/мин. водорода и воздуха к ТИД 30 и 300 куб. см/мин. соответственно дополнительного газа (гелий 60 куб. см/мин. марки "А") к ТИД дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ 40 куб. см/мин. Объем вводимой пробы 1 мкл Время удерживания квизалофоп-П-метила 11,7 +/- 0,1 мин. Предел детектирования 0,5 нг Линейный диапазон детектирования 0,5 - 8,0 нг Регистрацию хроматограмм при работе на газовом хроматографе "Hewlett-Packard 5890" проводили на электронном интеграторе "HP 3396" (параметры интегрирования: порог обнаружения пиков (Thrsh) = 4, ширина пика (PkWd) = 0,04). При использовании газового хроматографа "Цвет-500" может быть применен самописец КСП-4 (при обработке результатов вручную) или компьютерная система обработки данных типа "Мультихром". ### 2.7. Обработка результатов анализа Содержание квизалофоп-П-тефурила рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле: H x A x V x 1,2 1 X = ----------------, H x m 0 где: X - содержание квизалофоп-П-тефурила в пробе, мг/кг или мг/куб. дм; H - высота (площадь) пика анализируемого вещества, 1 мм (кв. мм); H - высота (площадь) пика стандартного раствора 0 квизалофоп-П-метила, мм (кв. мм); A - концентрация стандартного раствора квизалофоп-П-метила, мкг/мл; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m - объем (куб. см) или масса (г) аналитической пробы; 1,2 - коэффициент пересчета, учитывающий соотношение молекулярных масс квизалофоп-П-метила и квизалофоп-П-тефурила. При получении достоверных результатов измерений конечный результат записывается следующим образом: X = (х +/- ДЕЛЬТА), где: X - содержание остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила в анализируемой пробе; х - среднее из трех параллельных результатов измерений; ДЕЛЬТА - показатель погрешности измерений, соответствующий диапазону, в который попадает величина х. ## 3. Требования техники безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации на приборы. ## 4. Разработчики Долженко В.И., Крылов А.И., Николаев М.Я., Шеболдасова Н.М., Жаковская З.А., Тарарин П.А., Григорьева Л.В. (ВНИИ защиты растений, 189620, Санкт-Петербург - Пушкин, шоссе Подбельского, 3). ---