МУК 4.1.1137-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила по его основному метаболиту квизалофоп-свободной кислоте в воде, почве, в семенах и масле льна, сои, подсолнечника и в соломке льна методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 09.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.1137-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила по его основному метаболиту квизалофоп-свободной кислоте в воде, почве, в семенах и масле льна, сои, подсолнечника и в соломке льна методом газожидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.1137-02. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1137-02
(утв. Минздравом России)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 1 января 2003 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КВИЗАЛОФОП-П-ТЕФУРИЛА ПО ЕГО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ КВИЗАЛОФОП-СВОБОДНОЙ КИСЛОТЕ В ВОДЕ, ПОЧВЕ, В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ЛЬНА, СОИ, ПОДСОЛНЕЧНИКА И В СОЛОМКЕ ЛЬНА
МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.1137-02
Дата введения 1 января 2003 года
1. Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).
2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России.
3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
1. Вводная часть
Фирма-производитель: Юнироял Кемикал Ко. Инк.
Торговое наименование препарата: ПАНТЕРА, КЭ.
Действующее вещество (д.в.): квизалофоп-П-тефурил.
Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[4-(6-=хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовой кислоты тетрагидрофурфуриловый эфир.
Структурная формула (не приводится).
C H N ClO М. м. 428 22 21 2 5
Кристаллический порошок белого цвета без запаха. -8
Давление паров: < 5,9 x 10 мм Hg при 25 °C. Растворимость (мг/л при 25 °C): в воде - 3,753, метаноле -
6439, толуоле — 65170, н-гексан — 1243.
Температура плавления: 72,5 — 74,5 °C.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода: log — p 4,3222.
Основным продуктом гидролитического разложения (метаболитом) квизалофоп-П-тефурила является 2-[4-(6-хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовая кислота.
Токсикологическая характеристика: ДСД для массы тела человека 0,004 — мг/кг.
МДУ в семенах подсолнечника и сои — 0,04 мг/кг;
ПАНТЕРА, КЭ — послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями при возделывании овощных и технических культур.
2. Методика определения остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила по его основному метаболиту квизалофоп-свободной кислоте в воде, почве, в семенах и масле льна, сои, подсолнечника и в соломке льна с применением газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на количественном определении квизалофоп-свободной кислоты — основного метаболита (продукта гидролиза) квизалофоп-П-тефурила. Метод включает извлечение квизалофоп-свободной кислоты и остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила из анализируемого объекта органическим растворителем, проведение щелочного гидролиза квизалофоп-П-тефурила до квизалофоп-свободной кислоты, очистку пробы перераспределением веществ в системе несмешивающихся растворителей, дериватизацию квизалофоп-свободной кислоты (метилирование диазометаном) до квизалофоп-П-метила и очистку экстракта на колонке с оксидом алюминия.
Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением газожидкостной хроматографии (ГЖХ) и использованием детектора постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР), детектора по захвату электронов (ДЭЗ) или термоионного детектора (ТИД), насадочной или капиллярной колонки с неподвижными фазами типа OV-17 или SE-30.
2.1.2 Избирательность метода
Прочие пестициды, применяемые в интенсивной сельскохозяйственной технологии, определению не мешают. Очистка экстрактов, а также использование селективных детекторов позволяют устранить влияние мешающих анализу примесей.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1, 2, 3.
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
| Метрологические параметры, p = 0,95, n = 15 | Анализируемый объект | ||
| масло | семена | соломка льна | |
| Предел обнаружения, мг/кг | 0,05 | 0,02 | 0,02 |
| Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | 0,05 — 0,5 | 0,02 — 0,5 | 0,02 — 0,5 |
| Среднее значение определения, % | 79,3 | 86,7 | 81,0 |
| Стандартное отклонение S, % | 11,7 | 11,4 | 12,2 |
| Относительное стандартное отклонение DS, % | 6,5 | 6,3 | 6,8 |
| Доверительный интервал среднего результата, % | 79,3 +/- 13,9 | 86,7 +/- 13,4 | 81,0 +/- 14,6 |
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ И ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
| Анализируемый объект | p = 0,95, n = 5 | ||
| Добавлено, мг/кг | Обнаружено, % | Доверительный интервал, +/- % | |
| Масло | 0,05 0,1 0,5 | 72 81 85 | 15,9 14,8 13,0 |
| Семена | 0,02 0,05 0,1 | 80 85 95 | 15,7 14,4 12,1 |
| Соломка льна | 0,02 0,05 0,1 | 75 82 86 | 15,7 15,1 14,5 |
ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КВИЗАЛОФОП-П-ТЕФУРИЛА В МОДЕЛЬНЫХ ПРОБАХ ВОДЫ И ПОЧВЫ (p = 0,95, n = 6)
| Анализируемые объекты | Внесено, мг/куб. дм, мг/кг | Извлечено, % | Доверительный интервал среднего результата, % |
|---|---|---|---|
| Вода | 0,001 0,002 0,004 0,008 | 77,3 82,6 85,8 88,7 | +/- 4,6 +/- 4,1 +/- 3,5 +/- 3,2 |
| Почва | 0,05 0,1 0,2 0,4 | 74,5 78,2 82,7 85,5 | +/- 5,3 +/- 4,9 +/- 4,4 +/- 3,8 |
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование
2.2.1 Реактивы, материалы и растворы
Аналитический стандарт квизалофоп-П-тефурила
Аналитический стандарт квизалофоп-свободной кислоты
Аналитический стандарт квизалофоп-П-метила
Азот газообразный, высокой чистоты ТУ 301-07-25-89 Ацетон, осч ТУ 2633-004-11291058-94 Ацетонитрил, хч ТУ 6-09-4326-76
Вода дистиллированная и перегнанная над KMnO и щелочью 4
Водород газообразный, высокой чистоты ТУ 301-07-27-90 н-Гексан, хч ТУ 6-09-3375-78 Гелий газообразный (сжатый) ТУ 51-940-80
очищенный марки «А»
Диэтиловый эфир, ч ГОСТ 6262-79
Кислота серная, осч ГОСТ 14262-78
Кислота соляная, осч 23-4 ТУ 6-09-01-794-90 Калия гидроксид, чда ГОСТ 24363-80
Натрий серно-кислый безводный, чда ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, чда ГОСТ 4233-77
N-нитрозометилмочевина ТУ 6-09-11-1643-82
Оксид алюминия для хроматографии, ч, размер частиц 100 — 200 мкм, 1-й степени активности по Брокману, нейтральный
Стандартные растворы квилазофоп-П-тефурила в ацетоне с концентрацией 0,05 и 0,5 мг/мл для фортификации проб
Стандартные растворы квизалофоп-свободной кислоты в ацетоне с концентрациями 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 8,0 мкг/мл для построения калибровочных графиков
Стандартные растворы квизалофоп-П-метила в н-гексане с концентрацией 0,05; 0,5 мг/мл
2.2.2 Приборы, аппаратура, посуда
Газовый хроматограф с ДЭЗ, ДПР или ТИД
Колонка хроматографическая набивная стеклянная длиной 1,0 м и внутренним диаметром 4,0 мм с неподвижной фазой 5% OV-17 на Inerton Super-AW, 0,16 — 0,20 мм
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 15 м и внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой NBW-30 (типа OV-101) толщиной 1 мкм
Колонка хроматографическая набивная стеклянная длиной 1,0 м и внутренним диаметром 3,0 мм с неподвижной фазой 5% SE-30 на хроматоне N-Super, 0,125 — 0,160 мм
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 5 м и внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30) толщиной 2,65 мкм
Колонки хроматографические стеклянные длиной 300 мм и внутренним диаметром 10 мм для очистки экстрактов
Аппарат для встряхивания или аналогичный ТУ 64-1-1081-73 Баня водяная ТУ 64-1-2850-76 Весы аналитические типа ВЛА-200 ГОСТ 34104-80
Весы лабораторные типа ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-80
Пробирки мерные конические на 10 мл ГОСТ 1770-74
Воронки делительные емкостью 500 и 1000 мл ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования стеклянные ГОСТ 25336-82
Колба Бунзена емкостью 250 мл ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные емкостью 250 мл ГОСТ 25336-82
Колбы мерные емкостью 250, 1000 мл ГОСТ 1770-74
Колбы плоскодонные на 250, 500 мл ГОСТ 25336-82
Колбы мерные емкостью 10, 50, 100 мл ГОСТ 1770-74 Концентраторы грушевидные ГОСТ 10394
(конические) НШ 19, КГУ-100-14/19, ТС
Мельница лабораторная (кофемолка)
Микрошприц МШ 10А ТУ 64-1-2850 Насос стеклянный вакуумный водоструйный ГОСТ 10696-75
Пипетки мерные, емкостью 0,1, 1, 2, 5 и 10 мл ГОСТ 20292-74
Ротационный испаритель ИР-1М или аналогичного типа ТУ 25-11-917-76
Сито с диаметром отверстий 1,0 мм
Стаканы стеклянные на 100 мл ГОСТ 6236 Термометр градуировочный ГОСТ 2823-73
(при погружении всей нижней части)
Универсальная индикаторная бумага ТУ 6-09-1181-76
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении
Установка для упаривания органических растворителей в токе азота
Установка ультразвуковая (УЗ-баня) «Серьга» УЗМ 002 или другая аналогичного типа. Выходная электрическая мощность генератора не менее 70 Вт; рабочая частота установки — 22 кГц +/- 7,5%
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Фильтры бумажные «белая лента» ТУ 6-09-1678-86
Фильтры бумажные «синяя лента» ТУ 6-09-1678-86
Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 5 и 10 мл
2.3. Подготовка к определению
2.3.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей проводят очистку растворителей в соответствии с общепринятыми методиками.
2.3.2 Подготовка и кондиционирование хроматографической набивной колонки
Подготовленной насадкой заполняют стеклянную колонку и уплотняют ее под вакуумом. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют ее при рабочем расходе газа-носителя и температуре 280 °C в течение 8 — 10 ч.
2.3.3 Приготовление стандартных растворов
2.3.3.1. Стандартные растворы квизалофоп-П-метила. Для приготовления маточного стандартного раствора навеску квизалофоп-П-метила массой 0,1 г растворяют в гексане в мерной колбе емкостью 200 мл. После растворения вещества раствор в колбе доводят до метки гексаном. Полученный раствор соответствует концентрации 0,5 мг/мл. Далее 1,0 мл гексанового раствора с концентрацией 0,5 мг/мл помещают в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят гексаном до метки. Полученный раствор имеет концентрацию 5,0 мкг/мл.
Мерные колбы закрывают пробками и растворы тщательно перемешивают. Срок годности растворов не более 0,5 года при условии хранения в холодильнике.
Данные растворы используют для определения времени удерживания квизалофоп-П-метила в целях дальнейшей идентификации вещества в анализируемых пробах и отработки условий хроматографирования.
При изучении полноты определения квизалофоп-П-тефурила и квизалофоп-свободной кислоты для фортификации модельных проб используют ацетоновые растворы квизалофоп-П-тефурила с концентрацией 0,05 или 0,5 мг/мл.
2.3.3.2. Стандартные растворы квизалофоп-свободной кислоты. Для приготовления маточного стандартного раствора квизалофоп-свободной кислоты навеску массой 0,1 г растворяют в ацетоне в мерной колбе емкостью 200 мл. После растворения вещества раствор в колбе доводят до метки ацетоном. Полученный раствор соответствует концентрации 0,5 мг/мл. Далее 1,0 мл ацетонового раствора с концентрацией 0,5 мг/мл помещают в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят ацетоном до метки. Полученный раствор имеет концентрацию 5,0 мкг/мл. Из этого раствора получают методом дальнейших последовательных разведений ацетоном растворы следующих концентраций: 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 8,0 мкг/мл.
Мерные колбы закрывают пробками и растворы тщательно перемешивают. Срок годности растворов не более 0,5 года при условии хранения в холодильнике.
Полученные растворы используют для построения калибровочных графиков.
2.3.4 Построение калибровочных графиков
Для построения калибровочного графика осуществляется следующая процедура: по 1,0 мл приготовленных ацетоновых растворов квизалофоп-свободной кислоты (см. п. 2.3.3.2) упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре и далее переходят к стадиям метилирования (п. 2.5.4) и очистки (п. 2.5.5). В результате получают растворы квизалофоп-П-метила различных концентраций в 1,0 мл гексана.
Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика от концентрации квизалофоп-свободной кислоты.
2.3.5. Подготовка и кондиционирование хроматографических колонок с оксидом алюминия 1 степени активности по Брокману для очистки экстрактов
Оксид алюминия прогревают в фарфоровой чашке в термостате при 150 °C в течение 5 ч и охлаждают до комнатной температуры (1 степень активности по Брокману). Колбу с оксидом алюминия хранят герметично закрытой. Нижний зауженный конец стеклянной колонки закрывают тампоном из хлопковой ваты и заполняют (при легком встряхивании) 5,0 г оксида алюминия (высота слоя ~ 7,0 см). Над слоем оксида алюминия помещают слой безводного сульфата натрия высотой 2,0 см и перед использованием промывают колонку 20,0 мл гексана.
2.3.6 Приготовление эфирного раствора диазометана
В пенициллиновый флакон емкостью 5,0 мл помещают навеску нитрозометилмочевины 100 — 120 мг и флакон пломбируют резиновой пробкой. В другой флакон такого же объема наливают 2,0 мл диэтилового эфира. Флакон пломбируют резиновой пробкой и охлаждают в морозильной камере в течение 1 ч при температуре 8 — 10 °C. Затем готовят установку для получения диазометана (схема установки представлена на рис. 6 — не приводится). Резиновую пробку флакона с эфиром прокалывают медицинской иглой диаметром 1,0 мм таким образом, чтобы один конец находился над поверхностью эфира, а другой выходил наружу (для сброса излишнего давления диазометана). Два флакона после этого соединяют между собой гибкой полихлорвиниловой трубкой-перемычкой, на концах которой герметично вставлены медицинские иглы диаметром 2,0 мм. Одна игла находится в свободном объеме флакона с нитрозометилмочевиной, другая игла погружается в слой эфира на дно флакона-приемника. Затем пробка флакона с нитрозометилмочевиной прокалывается иглой медицинского шприца на 1,0 мл, и из шприца по каплям вносится 50%-ный водный раствор гидроокиси калия. Образовавшийся в ходе реакции диазометан пропускается через эфир до насыщения (появление желтизны спелого лимона). Процедуру обязательно проводят в работающем вытяжном шкафу.
2.4. Отбор проб
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными 21.08.79, № 2051-79.
Пробы воды при наличии взвеси фильтруют через бумажный фильтр белая лента и хранят в закрытой стеклянной таре при температуре 4 — 6 °C не более 3 дней.
Пробы почвы просушивают до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.
Семена и соломку просушивают до воздушно-сухого состояния и хранят до анализа в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.
Пробы почвы перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пестиком разминают крупные комки, из проб пинцетом удаляют включения: корни растений, насекомых, камни, стекло, кости, уголь и другие. После этого пробы почвы растирают в ступке пестиком, просеивают через сито с диаметром отверстий 1,0 мм и после перемешивания отбирают усредненную аналитическую пробу.
Перед анализом сухие пробы измельчают: семена — в лабораторной мельнице (кофемолке), соломку — ножницами и после перемешивания отбирают усредненную аналитическую пробу.
2.5. Описание определения
2.5.1 Вода
Аналитическую пробу воды объемом 500 куб. см помещают в делительную воронку емкостью 1000 мл и добавляют 5,0 мл 5%-ного водного раствора гидроокиси калия. Содержимое воронки перемешивают встряхиванием и оставляют на 60 мин. при температуре 4 — 6 °C. После этого в воронку добавляют 100 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки перемешивают, добавляют 100 мл н-гексана и энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний водно-солевой слой сливают в мерную колбу емкостью 1000 мл, а верхний гексановый слой отбрасывают. Водно-солевую фракцию возвращают в делительную воронку и процедуру очистки пробы повторяют еще раз с использованием 50 мл гексана. Делительную воронку промывают водопроводной и ополаскивают дистиллированной водой.
В водно-солевую фракцию, находящуюся в колбе, добавляют при постоянном перемешивании по каплям концентрированную серную кислоту до уровня pH 1 — 2. Водно-солевую фракцию помещают в делительную воронку и добавляют 75 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (80:20 по объему). Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний водно-солевой слой сливают в мерную колбу емкостью 1000 мл, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя — 1,0 — 1,5 см), помещенный в воронке для фильтрования на бумажный фильтр «синяя лента», в круглодонную колбу емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют еще два раза с использованием последовательно 75 и 50 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (80:20 по объему). После этого водно-солевую фракцию отбрасывают.
Объединенный гексано-эфирный экстракт, находящийся в колбе, помещают в ротационный вакуумный испаритель и упаривают растворители досуха при температуре 40 °C. Во флакон после его охлаждения до комнатной температуры вносят 1 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (п. 2.3.6), флакон закрывают пробкой и оставляют при комнатной температуре на 2 ч. После этого в работающем вытяжном шкафу в токе азота при комнатной температуре во флаконе упаривают досуха диэтиловый эфир и остаточные концентрации диазометана. Во флакон с сухим остатком вносят 0,5 мл ацетона и проводят количественное определение квизалофоп-П-тефурила по п. 2.6.
2.5.2 Почва
Аналитическую пробу почвы массой 20,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, добавляют 50 мл 1,0%-ного водного раствора гидроокиси калия и 50 мл ацетона. Содержимое колбы перемешивают встряхиванием и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане по 5 мин. два раза. Колбу с пробой закрывают и оставляют на 14 — 16 ч (на ночь) при комнатной температуре. После этого содержимое колбы встряхивают, подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане по 5 мин. два раза и фильтруют через бумажный фильтр «белая лента» под вакуумом на воронке Бюхнера в колбу Бунзена емкостью 250 мл. Оставшуюся часть пробы в колбе промывают 20 мл ацетона и экстракт также фильтруют.
При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 50 мл 1,0%-ного водного раствора гидроокиси калия и 50 мл ацетона и встряхивают в течение 60 мин. Колбу с пробой закрывают и оставляют на 14 — 16 ч (на ночь) при комнатной температуре. После этого содержимое колбы встряхивают 30 мин. с использованием аппарата для встряхивания и фильтруют через бумажный фильтр «белая лента» под вакуумом на воронке Бюхнера в колбу Бунзена емкостью 250 мл. Оставшуюся часть пробы в колбе промывают 20 мл ацетона и экстракт также фильтруют.
Объединенный экстракт количественно переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки перемешивают, добавляют 50 мл гексана и энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний слой сливают в мерную колбу емкостью 250 мл, а верхний гексановый слой отбрасывают. Водно-солевую фракцию возвращают в делительную воронку и процедуру очистки экстракта повторяют еще раз с использованием 50 мл гексана. Делительную воронку промывают водопроводной и ополаскивают дистиллированной водой.
В водно-солевую фракцию, находящуюся в колбе, добавляют при постоянном перемешивании по каплям концентрированную серную кислоту до уровня pH 1 — 2. Водно-солевую фракцию переносят в делительную воронку и добавляют 50 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (80:20, по объему). Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний слой сливают в мерную колбу емкостью 250 мл, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя — 1,0 — 1,5 см), помещенный в воронке для фильтрования на бумажный фильтр «синяя лента», в круглодонную колбу емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют еще два раза с использованием последовательно 50 и 30 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (80:20 по объему). После этого водно-солевую фракцию отбрасывают.
Колбу с объединенным гексано-эфирным экстрактом помещают в ротационный вакуумный испаритель и упаривают растворители досуха при температуре 40 °C. Во флакон после его охлаждения до комнатной температуры вносят 1 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (п. 2.3.6), флакон закрывают пробкой и оставляют при комнатной температуре на 2 ч. После этого в работающем вытяжном шкафу в токе азота при комнатной температуре во флаконе упаривают досуха диэтиловый эфир и остаточные концентрации диазометана. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и проводят количественное определение квизалофоп-П-тефурила по п. 2.6.
2.5.3 Семена, масло и соломка льна
2.5.3.1. Экстракция семян. Навеску измельченных семян массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, заливают 100 мл ацетона и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 5 мин. Затем для отделения механических примесей от образовавшейся суспензии экстракт пропускают через коническую воронку с хлопковой ватой в химический стакан. Воронку и вату промывают 10 мл ацетона. Далее экстракт фильтруют с помощью воронки Бюхнера (фильтр «белая лента») с последующей промывкой фильтра 10 мл ацетона. Экстракт переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 100 мл 0,5%-ного водного раствора гидроокиси калия и выдерживают смесь в течение 1 ч.
Далее в воронку добавляют 150 мл насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и добавляют 50 мл гексана. Воронку встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев нижний водный слой собирают в колбу, а гексановый слой отбрасывают. Делительную воронку тщательно промывают дистиллированной водой и переносят в нее водную фракцию, добавляют 50 мл гексана и процедуру повторяют еще раз. Водный слой собирают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл и подкисляют 2,0 — 2,5 мл концентрированной HCl (до pH 1,0 — 2,0), контролируя pH с помощью индикаторной бумаги, и пропускают через фильтр Шотта № 4. Затем водную фракцию переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл и добавляют 100 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1). Воронку встряхивают в течение минуты и после разделения слоев (выдерживать не менее 30 мин.) водный слой отбрасывают. В случае образования эмульсии в оставшийся органический слой добавляют несколько капель этилового спирта, осторожно перемешивают и пропускают через коническую воронку с ватой и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0 — 1,5 см) в грушевидную колбу емкостью 200 мл. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл гексана. Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 40 °C до объема 5 — 10 мл. Остаток экстракта переносят в коническую колбу или пенициллиновый флакон и упаривают досуха в токе азота при температуре 60 °C. Дальнейшие метилирование и очистку экстракта проводят в соответствии с п. п. 2.5.4 и 2.5.5.
2.5.3.2. Экстракция масла. Образец масла массой 5,0 +/- 0,1 г помещают в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 120 мл гексана и хорошо перемешивают. Затем в делительную воронку добавляют 200 мл ацетонитрила, воронку интенсивно встряхивают в течение 1 мин. и выдерживают смесь не менее 30 мин. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой переносят в делительную воронку емкостью 1000 мл, добавляют 180 мл 0,5%-ного раствора гидроокиси калия и выдерживают смесь 1 ч при комнатной температуре. Затем в делительную воронку добавляют 100 мл насыщенного раствора хлорида натрия и хорошо перемешивают. Далее в делительную воронку добавляют 100 мл гексана, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев нижний водный слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, гексановый слой отбрасывают. Делительную воронку тщательно промывают, водную фракцию переносят в воронку и повторно проводят процедуру очистки с использованием 100 мл гексана.
Далее водную фракцию подкисляют 3,0 — 3,5 мл концентрированной HCl (до pH 1,0 — 2,0). Делительную воронку тщательно промывают и переносят в нее подкисленную водную фракцию. В делительную воронку добавляют 100 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1). Воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев нижний водный слой отбрасывают, а органическую фазу пропускают через коническую воронку с ватой и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0 — 1,5 см) в грушевидную колбу емкостью 200 мл. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл гексана. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40 °C до объема 5 — 10 мл. Остаток экстракта переносят в коническую колбу или пенициллиновый флакон и упаривают досуха в токе азота при температуре 60 °C. Дальнейшие метилирование и очистку экстракта проводят в соответствии с п. п. 2.5.4 и 2.5.5.
2.5.3.3. Экстракция соломки льна. Измельченный образец соломки льна массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, заливают 150 мл ацетона и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 5 мин. Затем экстракт отфильтровывают с помощью воронки Бюхнера (на фильтре «красная лента»). Фильтр промывают 10 мл ацетона. Экстракт переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, добавляют 150 мл 0,5%-ного водного раствора гидроокиси калия и выдерживают смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Далее добавляют 75 мл насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и добавляют 50 мл гексана. Воронку встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев нижний водный слой собирают, а гексановый слой отбрасывают. Делительную воронку тщательно промывают дистиллированной водой и переносят в нее водную фракцию, добавляют 50 мл гексана и процедуру повторяют еще раз. Водный слой собирают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл и подкисляют 2,5 — 3,0 мл концентрированной HCl (до pH 1,0 — 2,0). После этого водную фракцию переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл и добавляют 100 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (1:1). Воронку встряхивают в течение 2 мин. и после разделения слоев водный слой отбрасывают, а органическую фазу пропускают через коническую воронку с ватой и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0 — 1,5 см) в грушевидную колбу емкостью 200 мл. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл гексана. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40 °C до объема 5 — 10 мл. Остаток экстракта переносят в коническую колбу или пенициллиновый флакон и упаривают досуха в токе азота при 60 °C. Дальнейшие метилирование и очистку экстракта проводят в соответствии с п. п. 2.5.4 и 2.5.5.
2.5.4 Метилирование
К сухому остатку (из п. п. 2.5.3.1, 2.5.3.2, 2.5.3.3) добавляют 1,0 мл эфира, насыщенного диазометаном, флакон закрывают и оставляют на 40 мин. при комнатной температуре. Затем эфир упаривают в токе азота досуха, растворяют сухой остаток в 2,0 мл гексана и экстракт подвергают очистке по п. 2.5.5.
2.5.5 Очистка
Гексановый экстракт (из п. 2.5.4) количественно переносят на подготовленную колонку с оксидом алюминия 1-й степени активности по Брокману. После этого колонку промывают 20 мл н-гексана, который отбрасывают. Квизалофоп-П-метил элюируют 30 мл диэтилового эфира со скоростью не более 60 капель в минуту в грушевидную колбу-концентратор. Элюат упаривают в токе азота досуха при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл гексана и анализируют на содержание квизалофоп-П-метила в соответствии с п. 2.6.
2.6. Условия газохроматографического анализа
2.6.1 Для набивной колонки с неподвижной фазой 5% OV-17
с ДЭЗ (порог чувствительности по линдану -10 не более 3 x 10 мг/с) или газовый хроматограф «Цвет-500» с ДПР (порог чувствительности по линдану -10 не более 5 x 10 мг/с)
Колонка стеклянная спиральная длиной 1,0 м и внутренним диаметром 4,0 мм
Носитель — Inerton Super-AW (0,16 — 0,20 мм) с неподвижной фазой 5% OV-17 -10
Рабочая шкала электрометра 2 x 10 А Скорость протяжки ленты самописца 0,3 см/мин. Скорость потока газа-носителя (азота в/ч ) 40 куб. см/мин. Температура колонки 280 °C испарителя 290 °C детектора 300 °C Объем вводимой пробы 2,0 мкл Время удерживания квизалофоп-П-метила 5,0 +/- 0,1 мин. Линейный диапазон определения 0,2 - 20 нг
После выполнения 5 — 7 анализов набивную колонку следует прогреть при температуре 300 °C в течение 1 ч.
2.6.2 Для набивной колонки с неподвижной фазой 5% SE-30
Газовый хроматограф «Цвет-500» с ТИД или ДПР
Колонка хроматографическая набивная длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм с неподвижной фазой 5% SE-30 на хроматоне N-Super, 0,125 — 0,16 мм -10
Показания электрометра 32 x 10 Скорость движения ленты самописца 0,25 см/мин. Температура испарителя 260 °C колонки 260 °C детектора 310 °C Расход газа-носителя (азота в/ч) 40 куб. см/мин. Расход водорода и воздуха для ТИД 15 и 300 куб. см/мин.
соответственно
Объем вводимой пробы 2 мкл Время удерживания квизалофоп-П-метила 2,7 +/- 0,2 мин. Предел детектирования 0,5 нг Линейный диапазон детектирования 0,5 - 8,0 нг
2.6.3 Для капиллярной колонки с неподвижной фазой NBW-30 (типа OV-101)
Газовый хроматограф «Hewlett-Packard 589О» с ДЭЗ (порог чувствительности по линдану -10 не более 3 x 10 мг/с) или газовый хроматограф «Цвет-500» с ДПР (порог чувствительности по линдану -10 не более 5 x 10 мг/с)
Колонка кварцевая капиллярная длиной 15 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой NBW-30 (типа OV-101) толщиной 1 мкм -10
Рабочая шкала электрометра 2 x 10 А Скорость потока азота в/ч 10 куб. см/мин. Скорость потока дополнительного 40 куб. см/мин.
газа (азота в/ч) к детектору
Температура колонки 250 °C испарителя 270 °C детектора 300 °C Объем вводимой пробы 2,0 мкл Время удерживания квизалофоп-П-метила 3,0 +/- 0,1 мин. Линейный диапазон определения 0,2 - 20 нг
2.6.4 Для капиллярной колонки с неподвижной фазой SE-30
Газовый хроматограф с ТИД или ДЭЗ
Колонка кварцевая капиллярная длиной 5 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30), 2,65 мкм
Температура колонки программирование от 180 (3 мин.) до 280 °C (15 мин.) со скоростью 10 °C/мин.
испарителя 260 °C детектора 300 °C
газа-носителя (гелий марки "А") 7 куб. см/мин. водорода и воздуха к ТИД 30 и 300 куб. см/мин.
соответственно
дополнительного газа (гелий 60 куб. см/мин. марки «А») к ТИД
дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ 40 куб. см/мин. Объем вводимой пробы 1 мкл Время удерживания квизалофоп-П-метила 11,7 +/- 0,1 мин. Предел детектирования 0,5 нг Линейный диапазон детектирования 0,5 - 8,0 нг
Регистрацию хроматограмм при работе на газовом хроматографе «Hewlett-Packard 5890» проводили на электронном интеграторе «HP 3396» (параметры интегрирования: порог обнаружения пиков (Thrsh) = 4, ширина пика (PkWd) = 0,04). При использовании газового хроматографа «Цвет-500» может быть применен самописец КСП-4 (при обработке результатов вручную) или компьютерная система обработки данных типа «Мультихром».
2.7. Обработка результатов анализа
Содержание квизалофоп-П-тефурила рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:
H x A x V x 1,2
1
X — содержание квизалофоп-П-тефурила в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
H — высота (площадь) пика анализируемого вещества, 1 мм (кв. мм);
H — высота (площадь) пика стандартного раствора 0 квизалофоп-П-метила, мм (кв. мм);
A — концентрация стандартного раствора квизалофоп-П-метила, мкг/мл;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
m — объем (куб. см) или масса (г) аналитической пробы;
1,2 — коэффициент пересчета, учитывающий соотношение молекулярных масс квизалофоп-П-метила и квизалофоп-П-тефурила.
При получении достоверных результатов измерений конечный результат записывается следующим образом:
X — содержание остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила в анализируемой пробе;
х — среднее из трех параллельных результатов измерений;
ДЕЛЬТА — показатель погрешности измерений, соответствующий диапазону, в который попадает величина х.
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации на приборы.
4. Разработчики
Долженко В.И., Крылов А.И., Николаев М.Я., Шеболдасова Н.М., Жаковская З.А., Тарарин П.А., Григорьева Л.В. (ВНИИ защиты растений, 189620, Санкт-Петербург — Пушкин, шоссе Подбельского, 3).