МУК 4.1.1131-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентрации Ацетамиприда в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Минздравом России)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ АЦЕТАМИПРИДА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

1 января 2003 года

1. Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России.

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

1. Вводная часть

Фирма-производитель: Ниппон Сода (Япония).

Торговое название: МОСПИЛАН.

Общепринятое название вещества: ацетамиприд.

                               1                            2
    Название  по  ИЮПАК:  (Е)-N -[(6-хлор-3-пиридил)метил]-N -

   1

циано-N -метилацетамидин.

Структурная формула (не приводится).

     C  H  ClN                                         М. м. 222,7
      10 14   4

Химически чистый ацетамиприд представляет собой бесцветный кристаллический порошок без запаха.

Температура плавления: 98,9 °C. -6

    Давление паров при 25 °C; менее 1,0 x 10   Па.
    Коэффициент распределения н-октанол/вода: К   log P = 0,80.

                                           ow<br>

2. Методика измерения концентраций Ацетамиприда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

в воздухе рабочей зоны

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Методика основана на определении ацетамиприда с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры «синяя лента».

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, а также пестицидов, применяемых при возделывании огурцов и томатов защищенного грунта, а также картофеля.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода (P = 0,95)

Число параллельных определений — 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме — 5 нг (измерение по п. 2.7.1); 0,5 нг (измерение по п. 2.7.2).

Предел обнаружения в воздухе — 0,05 мг/куб. м (при отборе 10 л воздуха).

Диапазон определяемых концентраций — 0,05 — 1,0 мг/куб. м.

Среднее значение определения — 93,8%.

Стандартное отклонение (S) — 2,91%.

Доверительный интервал среднего — 3,06%.

Суммарная погрешность измерения не превышает 22%.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Ацетамиприд с содержанием д.в. 99,9%

Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-4326-76

Бумажные фильтры «синяя лента», обеззоленные, ТУ 6-09-2678-77 предварительно промытые ацетонитрилом

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Waters (США) или аналогичный

Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная Лихросорбом RP-18, зернением 5 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа

Жидкостный хроматограф Милихром с ультрафиолетовым детектором

Хроматографическая колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная Сепароном С18, зернением 5 мкм

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ТУ 25-11-917-76 или аналогичный

Весы аналитические типа ВЛА-200                   ГОСТ 34104-80Е
Насос водоструйный                                ГОСТ 10696-75
Аспирационное устройство типа ЭА-1 или            ТУ 25-11-1414-78

аналогичное

Барометр                                          ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена        ГОСТ 215-73Е

деления 1 °C, пределы измерения 0 — 55 °C

Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 мл           ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные вместимостью 10, 50, 500 и        ГОСТ 1770-74Е

1000 мл

Колбы грушевидные со шлифом вместимостью 100 мл ГОСТ 10394-72

Стаканы химические вместимостью 100 мл ГОСТ 25336-82Е

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл ГОСТ 20292-74

Воронки химические конусные диаметром 34 — 40 мм ГОСТ 25336-82Е

Фильтродержатели

Стеклянные палочки

2.4. Отбор проб

Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».

В течение 15 мин. последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух с объемным расходом 2,0 л/мин. аспирируют в течение 5 мин. через фильтр «синяя лента».

Фильтры с отобранными пробами, упакованные в полиэтиленовые пакеты, можно хранить в холодильнике не более двух недель.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

Отмеряют 300 мл ацетонитрила, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 700 мл воды, перемешивают и дегазируют.

2.5.2 Кондиционирование колонки

Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (3:7 по объему) в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 100 мкл/мин. (измерение по п. 2.7.1) или 1 мл/мин. (измерение по п. 2.7.2).

2.5.3 Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор ацетамиприда с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,9% д.в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 мкг/мл (измерение по п. 2.7.1) готовят из основного стандартного раствора ацетамиприда соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.1).

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1 и 0,25 мкг/мл (измерение по п. 2.7.2) готовят из основного стандартного раствора ацетамиприда соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.1). Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.

2.5.4 Построение градуировочного графика

2.5.4.1. Градуировочный график А (измерение по п. 2.7.1). Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 10 мкл рабочего стандартного раствора ацетамиприда с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 мкг/мл.

2.5.4.2. Градуировочный график В (измерение по п. 2.7.2). Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора ацетамиприда с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1 и 0,25 мкг/мл.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график (А или Б) зависимости высоты хроматографического пика, мм, от концентрации ацетамиприда в растворе, мкг/мл.

2.6. Описание определения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл ацетонитрила, оставляют на 5 — 7 мин., периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетонитрила объемом 10 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном испарителе почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 1 мл (измерение по п. 2.7.1) или в 20 мл (измерение по п. 2.7.2) подвижной фазы для ВЭЖХ и хроматографируют.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1 Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия)

Колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная Сепароном С18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (30:70 по объему).

Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.

Рабочая длина волны: 248 нм.

Чувствительность: 0,2 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 10 мкл.

Время выхода ацетамиприда: около 6 мин.

Линейный диапазон детектирования: 5 — 100 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

2.7.2 Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Waters (США)

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная Лихросорбом RP-18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (30:70 по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны: 248 нм.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Время выхода ацетамиприда: около 5 мин.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,25 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание   ацетамиприда   рассчитывают   методом  абсолютной

калибровки по формуле:

                            C x W

X = -----, V

где:

X — содержание ацетамиприда в пробе воздуха, мг/куб. м;

C — концентрация ацетамиприда в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

W — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

V — объем пробы воздуха, отобранного для анализа, приведенного к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °C), куб. дм.

                                P

V = 0,383 ------- u t, 273 + T

где:

T — температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °C;

P — атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

t — длительность отбора пробы, мин.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

4. Разработчики

Профессор Калинин В.А., Довгилевич А.В., Довгилевич Е.В., Калинина Т.С., Устименко Н.В.

Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева, кафедра химических средств защиты растений.