---
title: "\"МУК 4.1.1130-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Ацетамиприда в воде, почве, огурцах, томатах, клубнях и ботве картофеля, зерне и соломе пшеницы и в кормовом разнотравье методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1130-02"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1130-02"
---

## "МУК 4.1.1130-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Ацетамиприда в воде, почве, огурцах, томатах, клубнях и ботве картофеля, зерне и соломе пшеницы и в кормовом разнотравье методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1130-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Ацетамиприда в воде, почве, огурцах, томатах, клубнях и ботве картофеля, зерне и соломе пшеницы и в кормовом разнотравье методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Минздравом России)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 января 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЦЕТАМИПРИДА**
**В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ОГУРЦАХ, ТОМАТАХ, КЛУБНЯХ И БОТВЕ КАРТОФЕЛЯ,**
**ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ПШЕНИЦЫ И В КОРМОВОМ РАЗНОТРАВЬЕ МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1130-02**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения<br>
1 января 2003 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).
2. <a id="p100007"></a>Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100010"></a>Вводная часть


<a id="p100011"></a>Фирма-производитель препарата - Ниппон Сода (Япония).
<a id="p100012"></a>Торговое наименование препарата - Моспилан 20% р. п.
<a id="p100013"></a>Название действующего вещества по номенклатуре ИСО - Ацетамиприд.
                                                                 1
<a id="p100014"></a>    Название   действующего вещества  по  номенклатуре  ИЮПАК - N
                           2        1
[(6-хлор-3-пиридил)метил]-N -циано-N -метилацетамидин.
<a id="p100015"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100016"></a>    C  H  ClN                                         М. м. 222,68
     10 14   4
<a id="p100017"></a>Химически чистый Ацетамиприд представляет собой бесцветный кристаллический порошок без запаха.
<a id="p100018"></a>Температура плавления: 98,9 °C.
                               -6
<a id="p100019"></a>    Давление паров - < 1,0 x 10   Па при 25 °C.
                                         3
<a id="p100020"></a>    Растворимость  -  в воде  - 4,25 x 10  мг/куб. дм, в гексане -
6,54  мг/куб. дм,    в    ацетоне,   хлороформе,    ацетонитриле -
> 200 г/куб. дм.
<a id="p100021"></a>    Хорошо  растворим  в  ацетоне,  этаноле, метаноле, хлороформе,
дихлорметане и ацетонитриле (более 200 г/куб. дм); растворимость в
гексане  -  6,54  мг/куб.  дм;  рКа - 0,7, очень слабое основание.
Стабилен  в водных буферных растворах при pH 4, 5, 7; ДТ   в почве
                                                        50
15 - 30 дней (включая метаболиты).
<a id="p100022"></a>Может присутствовать в воздухе рабочей зоны в виде аэрозоля.
<a id="p100023"></a>Краткая гигиеническая характеристика
<a id="p100024"></a>    Ацетамиприд  относится  к  опасным соединениям по острой (ЛД
                                                                50
для  крыс  146 - 217 мг/кг) токсичности, малоопасным по дермальной
токсичности (ЛД   для крыс более 2000 мг/кг) и  особо  опасным  по
               50
ингаляционной (ЛК    (4 ч) 290 мг/куб. м) токсичности, не вызывает
                 50
раздражения глаз и кожи.
<a id="p100025"></a>В РФ установлены следующие гигиенические нормативы:
<a id="p100026"></a>ДСД - 0,06 мг/кг массы человека;
<a id="p100027"></a>ОДК в почве - 0,6 мг/кг;
<a id="p100028"></a>ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/куб. дм;
<a id="p100029"></a>МДУ (мг/кг продукции): картофель и зерно пшеницы - 0,5, огурцы, томаты - 0,3.
<a id="p100030"></a>Область применения
<a id="p100031"></a>Ацетамиприд - инсектицид системного, контактного и кишечного действия из группы неоникотиноидов, блокирующий никотинзависимые рецепторы ацетилхолина в нервной системе. Эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов равнокрылых (тли, белокрылки), полужесткокрылых (клопы), бахромчатокрылых (трипсы) и жесткокрылых в посевах многих культур, особенно овощных, при нормах расхода 75 - 300 г д.в./га.


## 2. <a id="p100032"></a>Методика определения остаточных количеств Ацетамиприда в воде, почве, огурцах, томатах, клубнях и ботве картофеля, зерне и соломе пшеницы и в кормовом разнотравье методом высокоэффективной жидкостной хроматографии



### <a id="p100033"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100034"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100035"></a>Метод основан на высокоэффективной жидкостной хроматографии Ацетамиприда с детектором по поглощению в ультрафиолетовом свете после экстракции его из исследуемой пробы ацетонитридом и очистки экстракта путем перераспределения в несмешивающихся жидкостях, окисления перманганатом калия и колоночной хроматографии на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне "Диапак Амин".

##### <a id="p100036"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода


<div align="right">

<a id="p100037"></a>Таблица 1

</div>


<div align="center">

<a id="p100038"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА**

</div>



| Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, % | Доверительный интервал среднего, +/- %, p = 0,95, n = 24 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Вода | 0,005 | 0,005 - 0,1 | 97 | 1,8 | 0,8 |
| Почва | 0,005 | 0,005 - 0,1 | 94 | 4,5 | 1,9 |
| Огурцы | 0,005 | 0,005 - 0,1 | 95 | 2,2 | 0,9 |
| Томаты | 0,005 | 0,005 - 0,1 | 95 | 4,2 | 1,8 |
| Картофель, клубни | 0,01 | 0,01 - 0,2 | 94 | 4,0 | 1,7 |
| Картофель, ботва | 0,02 | 0,02 - 0,4 | 85 | 4,7 | 2,0 |
| Пшеница, зерно | 0,01 | 0,01 - 0,2 | 86 | 4,5 | 1,9 |
| Пшеница, солома | 0,02 | 0,02 - 0,4 | 84 | 4,8 | 2,0 |
| Кормовые травы | 0,02 | 0,02 - 0,4 | 84 | 4,8 | 2,0 |


<div align="right">

<a id="p100049"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100050"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЦЕТАМИПРИДА**<br>
**В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ**<br>
**(6 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**

</div>



<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="17%"><col width="18%"><col width="22%"><col width="22%"></colgroup>
<tr><td>Внесено Ацетамиприда, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, % от внесенного</td><td>Стандартное отклонение, %</td><td>Относительное стандартное отклонение, %</td><td>Доверительный интервал, +/- % (p = 0,95, n = 6)</td></tr>
<tr><td>1</td><td>2</td><td>3</td><td>4</td><td>5</td></tr>
<tr><td colspan="5">Вода</td></tr>
<tr><td>0,005</td><td>96</td><td>2,1</td><td>2,2</td><td>2,1</td></tr>
<tr><td>0,025</td><td>98</td><td>1,7</td><td>1,7</td><td>1,7</td></tr>
<tr><td>0,050</td><td>97</td><td>1,9</td><td>2,0</td><td>1,9</td></tr>
<tr><td colspan="5">Почва</td></tr>
<tr><td>0,005</td><td>91</td><td>5,3</td><td>5,8</td><td>5,3</td></tr>
<tr><td>0,025</td><td>93</td><td>4,0</td><td>4,3</td><td>4,0</td></tr>
<tr><td>0,050</td><td>98</td><td>4,8</td><td>4,9</td><td>4,8</td></tr>
<tr><td colspan="5">Огурцы</td></tr>
<tr><td>0,005</td><td>95</td><td>4,0</td><td>4,2</td><td>4,0</td></tr>
<tr><td>0,025</td><td>96</td><td>3,3</td><td>3,4</td><td>3,3</td></tr>
<tr><td>0,050</td><td>96</td><td>3,8</td><td>4,0</td><td>3,8</td></tr>
<tr><td colspan="5">Томаты</td></tr>
<tr><td>0,005</td><td>96</td><td>5,5</td><td>5,7</td><td>5,5</td></tr>
<tr><td>0,025</td><td>97</td><td>2,3</td><td>2,4</td><td>2,3</td></tr>
<tr><td>0,050</td><td>95</td><td>3,3</td><td>3,5</td><td>3,3</td></tr>
<tr><td colspan="5">Картофель, клубни</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>94</td><td>4,2</td><td>4,5</td><td>4,2</td></tr>
<tr><td>0,03</td><td>96</td><td>3,5</td><td>3,6</td><td>3,5</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>95</td><td>3,8</td><td>4,0</td><td>3,8</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>95</td><td>3,9</td><td>4,1</td><td>3,9</td></tr>
<tr><td colspan="5">Картофель, ботва</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>82</td><td>5,5</td><td>6,7</td><td>5,5</td></tr>
<tr><td>0,06</td><td>83</td><td>5,2</td><td>6,3</td><td>5,2</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>87</td><td>4,7</td><td>5,4</td><td>4,7</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>85</td><td>4,4</td><td>5,2</td><td>4,4</td></tr>
<tr><td colspan="5">Зерно пшеницы</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>83</td><td>4,9</td><td>5,9</td><td>4,9</td></tr>
<tr><td>0,03</td><td>85</td><td>4,5</td><td>5,3</td><td>4,5</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>88</td><td>4,5</td><td>5,1</td><td>4,5</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>86</td><td>4,2</td><td>4,9</td><td>4,2</td></tr>
<tr><td colspan="5">Солома пшеницы</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>81</td><td>5,4</td><td>6,7</td><td>5,4</td></tr>
<tr><td>0,06</td><td>84</td><td>4,9</td><td>5,8</td><td>4,9</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>87</td><td>4,7</td><td>5,4</td><td>4,7</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>84</td><td>4,3</td><td>5,1</td><td>4,3</td></tr>
<tr><td colspan="5">Кормовые травы</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>81</td><td>5,6</td><td>6,9</td><td>5,6</td></tr>
<tr><td>0,06</td><td>87</td><td>4,7</td><td>5,4</td><td>4,7</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>84</td><td>4,7</td><td>5,6</td><td>4,7</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>88</td><td>4,1</td><td>4,7</td><td>4,1</td></tr>
</table>



##### <a id="p100094"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100095"></a>Метод селективен. Другие пестициды определению не мешают. Избирательность метода обеспечивается сочетанием способов очистки экстракта и хроматографического определения.


### <a id="p100096"></a>2.2. Реактивы, материалы, приборы и оборудование



##### <a id="p100097"></a>2.2.1 Реактивы и материалы

<a id="p100098"></a>Ацетамиприд, содержание основного
вещества 99,5%
<a id="p100099"></a>Ацетонитрил, хч                                       ТУ 6-09-3534
<a id="p100100"></a>Гексан, ч                                             ТУ 6-09-3375
<a id="p100101"></a>Спирт изопропиловый (2-пропанол), чда                 ТУ 6-09-402
<a id="p100102"></a>Хлороформ технический                                 ГОСТ 20015
<a id="p100103"></a>Натрий хлористый, чда, водные растворы с ГОСТ 4233
массовыми концентрациями 20 и 40 г/л
<a id="p100104"></a>Калий марганцово-кислый, чда ГОСТ 20490
<a id="p100105"></a>Калия гидроокись, чда                                 ГОСТ 24363
<a id="p100106"></a>Кислота серная, чда ГОСТ 4204
<a id="p100107"></a>Натрий серно-кислый безводный, чда [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100108"></a>Вода дистиллированная ГОСТ 6709
<a id="p100109"></a>Силикагель Л (Лахема, Чехия) зернением 100 - 250 мкм
<a id="p100110"></a>Патрон для концентрирования "Диапак Амин" (МП
"Элсико", 115478, Москва, ул. Москворечье, 5)
<a id="p100111"></a>Фильтры бумажные обеззоленные "синяя лента" ГОСТ 12026
<a id="p100112"></a>Вата медицинская гигроскопическая [ГОСТ 5556](https://bukva.ai/docs/gost-5556-81)

##### <a id="p100113"></a>2.2.2 Приборы и оборудование

<a id="p100114"></a>Хроматограф жидкостный в составе:
детектора по поглощению в ультрафиолетовом свете
Carlo ЕгЬа SP 87, позволяющий проводить измерения
при длине волны 246 нм и чувствительности 0,08 ед.;
оптической плотности на шкалу, с проточной кюветой
объемом не более 10 мкл; насоса BecKman 110 А с
верхним пределом давления не менее 200 бар;
инжектора с объемом петли 20 мкл; колонки длиной
250 мм и внутренним диаметром 3 мм, заполненной
сорбентом Нуклеосил CN, зернением 5 мкм; системы
обработки данных Perkin-Elmer Sigma 10 или другой
жидкостный хроматограф аналогичной конструкции с
аналогичными характеристиками
<a id="p100115"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим ГОСТ 24104
пределом взвешивания до 20 г не ниже 2-го класса
точности
<a id="p100116"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим ГОСТ 24104
пределом взвешивания до 500 г 4-го класса точности
<a id="p100117"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М                ТУ 25-11-917
или аналогичный
<a id="p100118"></a>Гомогенизатор высокоскоростной,                       МРТУ 42-1505
объем стакана не менее 200 мл
<a id="p100119"></a>Аппарат для встряхивания или аналогичный              ТУ 64-1-1081
Баня ультразвуковая
<a id="p100120"></a>Колба мерная вместимостью 100 мл исполнения 2         ГОСТ 1770
<a id="p100121"></a>Цилиндры вместимостью 500 и 100 мл                    ГОСТ 1770
<a id="p100122"></a>Пипетки типа 3 исполнения 11-го класса точности       ГОСТ 29227
вместимостью 1 и 10 мл
<a id="p100123"></a>Колба плоскодонная исполнения 1 ГОСТ 25336
<a id="p100124"></a>Колба грушевидная с взаимозаменяемым конусом 14/23 ГОСТ 25336
вместимостью 100 мл
<a id="p100125"></a>Колба остродонная с взаимозаменяемым конусом 14/23 ГОСТ 25336
вместимостью 25 мл
Микрошприц вместимостью 25 мкл
<a id="p100126"></a>Шприц медицинский вместимостью 10 мл ГОСТ 22090
<a id="p100127"></a>Воронка делительная вместимостью 500 мл ГОСТ 25336
<a id="p100128"></a>Воронка лабораторная типа В ГОСТ 25336
<a id="p100129"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 9147
<a id="p100130"></a>Колонка хроматографическая стеклянная
длиной 10 см, внутренним диаметром 7 мм
<a id="p100131"></a>Колба плоскодонная вместимостью 500 мл ГОСТ 25336
<a id="p100132"></a>Насос водоструйный ГОСТ 25336


### <a id="p100133"></a>2.3. Отбор проб


<a id="p100134"></a>Отбор проб должен проводиться в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (21.08.79, N 2058).
<a id="p100135"></a>Отобранную пробу при невозможности проведения анализа в течение 5 ч с момента отбора следует хранить в замороженном состоянии при температуре не выше -18 °C, при этом анализ следует проводить не позднее чем через 7 суток со дня отбора пробы.


### <a id="p100136"></a>2.4. Подготовка к определению



##### <a id="p100137"></a>2.4.1 Подготовка растворителей

<a id="p100138"></a>Все растворители используют свежеперегнанными.
<a id="p100139"></a>Ацетонитрил, хранившийся более года, перед перегонкой кипятят с пятиокисью фосфора в колбе с обратным холодильником. Перегонку растворителей проводят, строго отбирая фракцию, соответствующую по температуре кипения основному веществу.

##### <a id="p100140"></a>2.4.2 Приготовление стандартных растворов Ацетамиприда

<a id="p100141"></a>Основной раствор Ацетамиприда готовят, количественно перенося 10 мг Ацетамиприда в мерную колбу вместимостью 100 мл. В колбу вносят 20 мл ацетонитрила, содержимое колбы перемешивают до полного растворения кристаллов Ацетамиприда. Объем в колбе доводят до метки ацетонитрилом, после чего содержимое колбы тщательно перемешивают. Получают раствор Ацетамиприда концентрацией 100 мкг/мл.
<a id="p100142"></a>Рабочие растворы Ацетамиприда готовят, перенося в мерные колбы вместимостью 100 мл 1,00, 0,75, 0,50, 0,25 и 0,10 мл основного раствора. Объемы в колбах доводят до метки смесью гексан-изопропанол-ацетонитрил (70:25:5, по объему), содержимое колб тщательно перемешивают. Получают рабочие растворы концентрациями соответственно 1; 0,75; 0,5; 0,25 и 0,1 мкг/мл.
<a id="p100143"></a>Стандартные растворы Ацетамиприда хранят в холодильнике. Срок годности стандартных растворов - 3 мес.

##### <a id="p100144"></a>2.4.3 Подготовка колонки для очистки экстракта

<a id="p100145"></a>Колонка для очистки экстракта готовится непосредственно в процессе испытания. На дно колонки помещают ватный тампон, на который насыпают слой серно-кислого натрия толщиной 5 мм и суспензию 2 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-хлороформ (1:3). Не позволяя просохнуть верхней кромке слоя силикагеля, на него насыпают слой серно-кислого натрия толщиной 10 мм. В момент достижения растворителем верхней кромки слоя серно-кислого натрия колонка готова к внесению экстракта.

##### <a id="p100146"></a>2.4.4 Проверка хроматографического поведения Ацетамиприда на колонке для очистки экстракта

<a id="p100147"></a>Хроматографическое поведение Ацетамиприда проверяют каждый раз при использовании новой партии силикагеля. Для этого в подготовленную колонку вносят 2 мл раствора Ацетамиприда в смеси гексан-хлороформ (1:3) массовой концентрацией 50 мкг/мл. Раствору дают впитаться в фильтрующий слой, после чего через колонку пропускают 50 мл смеси гексан-хлороформ (1:3) со скоростью не более 5 мл/мин., элюат отбрасывают. Через колонку пропускают 80 мл хлороформа, отбирая фракции элюата объемом по 10 мл. Каждую отобранную фракцию упаривают на ротационном испарителе досуха, остаток в отгонной колбе перерастворяют в 2 мл смеси гексан-изопропанол-ацетонитрил (70:25:5) и исследуют на жидкостном хроматографе по [п. 2.5.3](#p100176). При обнаружении Ацетамиприда в последних двух фракциях элюата в методику очистки экстракта по [п. 2.5.2](#p100173) вносят соответствующие коррективы.

##### <a id="p100148"></a>2.4.5 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

<a id="p100149"></a>В цилиндр вместимостью 500 мл вносят 25 мл ацетонитрила и 125 мл изопропанола. Объем в цилиндре доводят до 500 мл гексаном. Содержимое цилиндра переносят в колбу с притертой пробкой и хранят в той же колбе. Срок годности подвижной фазы - 3 дня.

##### <a id="p100150"></a>2.4.6 Подготовка хроматографа

<a id="p100151"></a>На хроматограф устанавливают требуемую колонку и кондиционируют ее подвижной фазой при скорости потока 0,4 мл/мин. в течение 30 мин. На детекторе устанавливают длину волны 246 нм и чувствительность 0,08 ед. оптической плотности на шкалу. Чувствительность регистрирующего устройства устанавливают на уровне 10 мВ, скорость подачи ленты самописца - 4 мм/мин.

##### <a id="p100152"></a>2.4.7 Построение градуировочного графика

<a id="p100153"></a>В инжектор хроматографа вводят по 20 мкл каждого рабочего раствора Ацетамиприда и регистрируют время удерживания и площадь пика Ацетамиприда. Время удерживания Ацетамиприда может находиться в интервале 13,4 - 14,9 мин. в зависимости от точности воспроизведения состава подвижной фазы и температуры воздуха в лабораторном помещении. Градуировочный график строят на миллиметровой бумаге, откладывая по оси абсцисс количество введенного Ацетамиприда в нг (определяется как произведение концентрации рабочего раствора в нг/мкл на объем введенного раствора в мкл) и по оси ординат соответствующую высоту пика Ацетамиприда.


### <a id="p100154"></a>2.5. Проведение определения



##### <a id="p100155"></a>2.5.1 Экстракция

<a id="p100156"></a>Пробу воды объемом 20 мл переносят в делительную воронку и экстрагируют Ацетамиприд хлороформом двумя порциями по 20 мл при встряхивании в течение 1 мин. Объединенный экстракт обезвоживают в плоскодонной колбе добавлением 10 г безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток перерастворяют в 1 мл смеси гексан-изопропанол-ацетонитрил (70:25:5 по объему) и используют для хроматографического анализа.
<a id="p100157"></a>Пробу почвы массой 20 г помещают в плоскодонную колбу и заливают 100 мл смеси ацетонитрил-вода (1:1 по объему). Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 20 мин. или выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин., после чего фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр под вакуумом. Фильтр с осадком переносят в коническую колбу, куда добавляют 20 мл ацетонитрила. Содержимое колбы интенсивно перемешивают вручную в течение 2 мин., после чего фильтруют аналогичным образом.
<a id="p100158"></a>Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку, куда вносят 100 мл раствора хлорида натрия массовой концентрацией 100 г/л и 100 мл гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Экстракцию гексаном повторяют, используя свежую порцию объемом 100 мл и отбрасывая верхний гексановый слой. Ацетамиприд экстрагируют из водно-ацетонитрильной фазы хлороформом двумя порциями по 100 мл, каждый раз отбирая нижний хлороформный слой. Объединенный экстракт обезвоживают в плоскодонной колбе добавлением 20 г безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток в отгонной колбе перерастворяют в 5 мл смеси гексан-хлороформ (1:3).
<a id="p100159"></a>Навеску гомогенизированной пробы огурцов и томатов массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора, куда вносят 100 мл ацетонитрила. Содержимое стакана гомогенизируют в течение 5 мин., после чего фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр под вакуумом. Фильтр с осадком переносят в коническую колбу, куда добавляют 50 мл ацетонитрила.
<a id="p100160"></a>Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 20 мин. или выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин., после чего фильтруют аналогичным образом. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку, куда вносят 250 мл раствора хлорида натрия массовой концентрацией 40 г/л и 100 мл гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Экстракцию гексаном повторяют, используя свежую порцию объемом 100 мл и отбрасывая верхний гексановый слой.
<a id="p100161"></a>Ацетамиприд экстрагируют из водно-ацетонитрильной фазы хлороформом двумя порциями по 100 мл, каждый раз отбирая нижний хлороформный слой. Объединенный экстракт обезвоживают в плоскодонной колбе добавлением 20 г безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток в отгонной колбе перерастворяют в 5 мл смеси гексан-хлороформ (1:3).
<a id="p100162"></a>Навеску гомогенизированной пробы клубней картофеля массой 20 г и ботвы картофеля массой 10 г помещают в плоскодонную колбу. В колбу вносят 100 мл ацетонитрила. Содержимое колбы перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин., после чего фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр под вакуумом. Фильтр с осадком переносят в коническую колбу, куда добавляют 50 мл ацетонитрила. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 20 мин. или выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин., после чего фильтруют аналогичным образом, фильтраты объединяют.
<a id="p100163"></a>При исследовании клубней объединенный фильтрат переносят в делительную воронку, куда вносят 250 мл раствора хлорида натрия массовой концентрацией 40 г/л и 100 мл гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Экстракцию гексаном повторяют, используя свежую порцию объемом 100 мл и отбрасывая верхний гексановый слой.
<a id="p100164"></a>Ацетамиприд экстрагируют из водно-ацетонитрильной фазы хлороформом двумя порциями по 100 мл, каждый раз отбирая нижний хлороформный слой. Объединенный экстракт обезвоживают в плоскодонной колбе добавлением 20 г безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток в отгонной колбе перерастворяют в 5 мл смеси гексан-хлороформ (1:3).
<a id="p100165"></a>При исследовании ботвы объединенный ацетонитрильный экстракт концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до объема около 20 мл при температуре не выше 50 °C, остаток переносят в цилиндр вместимостью 50 мл. Отгонную колбу ополаскивают двумя порциями ацетонитрила объемом по 10 мл, смыв переносят в тот же цилиндр.
<a id="p100166"></a>Содержимое цилиндра доводят до объема 50 мл и переносят в делительную воронку, куда вносят 250 мл раствора хлорида натрия массовой концентрацией 20 г/л и 100 мл гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Экстракцию гексаном повторяют, используя свежую порцию объемом 100 мл и отбрасывая верхний гексановый слой. В делительную воронку вносят 5 мл серной кислоты (по капле при перемешивании) и 10 мл свежеприготовленного раствора марганцовокислого калия массовой концентрацией 15 г/л. Содержимое воронки перемешивают и выдерживают 5 мин., после чего Ацетамиприд экстрагируют из водно-ацетонитрильной фазы хлороформом двумя порциями по 100 мл, каждый раз отбирая нижний хлороформный слой.
<a id="p100167"></a>Объединенный экстракт встряхивают в делительной воронке с 10 мл раствора гидроокиси калия концентрацией 0,05 N, после разделения фаз верхний водный слой отбрасывают. Для удаления остатков щелочи хлороформный экстракт встряхивают в делительной воронке с 10 мл воды, после разделения фаз верхний водный слой отбрасывают. Объединенный экстракт обезвоживают в плоскодонной колбе добавлением 20 г безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток в отгонной колбе перерастворяют в 5 мл смеси гексан-хлороформ (1:3).
<a id="p100168"></a>Навеску гомогенизированной пробы зерна пшеницы массой 20 г, соломы пшеницы и зеленой массы кормовых трав массой 10 г помещают в плоскодонную колбу. В колбу вносят 100 мл ацетонитрила. Содержимое колбы перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин., после чего фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр под вакуумом. При анализе зерна пшеницы фильтр с осадком переносят в коническую колбу, куда добавляют 50 мл ацетонитрила. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 20 мин. или выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин., после чего фильтруют аналогичным образом, фильтраты объединяют.
<a id="p100169"></a>При анализе соломы пшеницы и зеленой массы кормовых трав от воронки Бюхнера с осадком отсоединяют источник вакуума, после чего к слою осадка приливают 100 мл ацетонитрила, дают растворителю равномерно распределиться по осадку, выдерживают 10 мин., далее фильтруют растворитель под вакуумом, фильтраты объединяют.
<a id="p100170"></a>Ацетонитрильные экстракты концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до объема около 20 мл при температуре не выше 50 °C, остаток переносят в цилиндр вместимостью 50 мл. Отгонную колбу ополаскивают двумя порциями ацетонитрила объемом по 10 мл, смыв переносят в тот же цилиндр. Содержимое цилиндра доводят до объема 50 мл и переносят в делительную воронку, куда вносят 250 мл раствора хлорида натрия массовой концентрацией 20 г/л и 100 мл гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Экстракцию гексаном повторяют, используя свежую порцию объемом 100 мл и отбрасывая верхний гексановый слой.
<a id="p100171"></a>В делительную воронку вносят 5 мл серной кислоты (по каплям при перемешивании) и 10 мл свежеприготовленного раствора марганцовокислого калия массовой концентрацией 15 г/л. Содержимое воронки перемешивают и выдерживают 5 мин., после чего Ацетамиприд экстрагируют из водно-ацетонитрильной фазы хлороформом двумя порциями по 100 мл, каждый раз отбирая нижний хлороформный слой. Объединенный экстракт встряхивают в делительной воронке с 10 мл раствора гидроокиси калия концентрацией 0,05 N, после разделения фаз верхний водный слой отбрасывают.
<a id="p100172"></a>Для удаления остатков щелочи хлороформный экстракт встряхивают в делительной воронке с 10 мл воды, после разделения фаз верхний водный слой отбрасывают. Объединенный экстракт обезвоживают в плоскодонной колбе добавлением 20 г безводного сульфата натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток в отгонной колбе перерастворяют в 5 мл смеси гексан-хлороформ (1:3).

##### <a id="p100173"></a>2.5.2 Очистка экстракта

<a id="p100174"></a>В подготовленную по [п. 2.4.3](#p100144) колонку вносят экстракт. Экстракту дают впитаться в фильтрующий слой, после чего через колонку пропускают 50 мл смеси гексан-хлороформ (1:3) со скоростью не более 5 мл/мин., элюат отбрасывают.
<a id="p100175"></a>В колонку вносят 60 мл хлороформа. После прекращения выхода элюата из колонки его упаривают на ротационном испарителе в остродонной колбе досуха, остаток в колбе перерастворяют в 2,0 мл смеси гексан-изопропанол-ацетонитрил (70:25:5 по объему).

##### <a id="p100176"></a>2.5.3 Хроматографический анализ

<a id="p100177"></a>Условия хроматографирования.
<a id="p100178"></a>Колонка длиной 250 мм, внутренним диаметром 3 мм, заполненная сорбентом Нуклеосил CN.
<a id="p100179"></a>Подвижная фаза - гексан-изопропанол-ацетонитрил (70:25:5 по объему).
<a id="p100180"></a>Скорость потока - 0,4 мл/мин.
<a id="p100181"></a>Детектор - спектрофотометрический, длина волны - 246 нм, чувствительность - 0,08 ед. оптической плотности на шкалу.
<a id="p100182"></a>Чувствительность самописца - 10 мВ.
<a id="p100183"></a>Скорость протяжки ленты самописца - 4 мм/мин.
<a id="p100184"></a>Время удерживания Ацетамиприда - 13,4 - 14,9 мин.
<a id="p100185"></a>Линейный диапазон детектирования Ацетамиприда - 2 - 20 нг.
<a id="p100186"></a>В инжектор хроматографа вводят 20 мкл очищенного и сконцентрированного экстракта. При обнаружении на хроматограмме пика с временем удерживания, соответствующим времени удерживания пика Ацетамиприда в рабочем растворе, определяют его высоту и по градуировочному графику находят соответствующую ей массу Ацетамиприда.
<a id="p100187"></a>Если высота пика Ацетамиприда превышает верхнее значение градуировочного графика, экстракт разбавляют той же смесью растворителей, фиксируют новое значение объема экстракта и проводят его повторный хроматографический анализ.

##### <a id="p100188"></a>2.5.4 Обработка результатов

<a id="p100189"></a>    Содержание  Ацетамиприда  в  пробе (X), мг/кг, рассчитывают по
формуле:

                                m V
<a id="p100190"></a>                            X = ---,
                                v M

<a id="p100191"></a>    где:
<a id="p100192"></a>    m   -   масса  Ацетамиприда  во  введенном  объеме  экстракта,
найденная по градуировочному графику, нг;
<a id="p100193"></a>    V   -   объем,  до  которого  сконцентрирован  экстракт  перед
хроматографическим анализом, мл;
<a id="p100194"></a>    v - объем экстракта, введенный в инжектор, мкл;
<a id="p100195"></a>    M - масса навески, г.


## 3. <a id="p100196"></a>Требования безопасности


<a id="p100197"></a>При анализе необходимо соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работы с органическими растворителями и соответствующие "[Правилам](https://bukva.ai/docs/pravila-2455-81) устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы" N 2455-81 от 20.10.81.


## 4. <a id="p100198"></a>Разработчики


<a id="p100199"></a>Цимбалаев С.Р., Есютина Г.С. (Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП), 142700, г. Видное, Московской обл., ул. Школьная, 78).



<a id="p100200"></a>

---