---
title: "\"МУ 2.3.2.3388-16. 2.3.2. Гигиена. Гигиена питания. Продовольственное сырье и пищевые продукты. Медико-биологическая оценка безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения с комбинированными признаками. Методические указания\""
number: "МУ 2.3.2.3388-16"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-mu-2-3-2-3388-16"
---

## "МУ 2.3.2.3388-16. 2.3.2. Гигиена. Гигиена питания. Продовольственное сырье и пищевые продукты. Медико-биологическая оценка безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения с комбинированными признаками. Методические указания"

# "МУ 2.3.2.3388-16. 2.3.2. Гигиена. Гигиена питания. Продовольственное сырье и пищевые продукты. Медико-биологическая оценка безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения с комбинированными признаками. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 26.07.2016)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
26 июля 2016 года


##### <a id="p100002"></a>2.3.2 ГИГИЕНА. ГИГИЕНА ПИТАНИЯ. ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

**И ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ**

<a id="p100003"></a>**МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ**
**ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ РАСТИТЕЛЬНОГО**
**ПРОИСХОЖДЕНИЯ С КОМБИНИРОВАННЫМИ ПРИЗНАКАМИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
МУ 2.3.2.3388-16

1. <a id="p100005"></a>Разработаны ФГБУН "ФИЦ питания и биотехнологии" (Н.В. Тышко, Э.О. Садыкова, А.К. Голомидова, И.В. Гмошинский, А.А. Кочеткова, В.А. Саркисян, В.А. Тутельян); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.Ю. Попова, И.В. Брагина); Российской академией наук (Г.Г. Онищенко); Институтом биоинженерии, ФГУ "ФИЦ Биотехнологии" РАН (К.Г. Скрябин, И.В. Яковлева, Б.Б. Кузнецов); МГУ им. М.В. Ломоносова (М.П. Кирпичников).
2. <a id="p100006"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 3 августа 2016 г.
3. <a id="p100007"></a>Введены впервые.

<a id="p100008"></a>Появление генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения (ГМО) второго поколения, в том числе ГМО с комбинированными признаками, привело к необходимости формирования новых подходов к оценке безопасности и процедуры государственной регистрации таких ГМО в Российской Федерации. Анализ мирового опыта в данной области свидетельствует о необходимости дифференцирования набора исследований в зависимости от метода получения ГМО с комбинированными признаками: 1-й метод - "трансформационный" - новый ген (гены) методом генной инженерии вводят в геном уже существующего и зарегистрированного ранее ГМО; 2-й метод - "молекулярный" - геном растения-донора методом генной инженерии трансформируют с помощью вектора, содержащего два или более генов, отвечающих за новые признаки, или с помощью множественных векторов; 3-й метод - "гибридизационный" - два уже существующих ГМО используют в качестве родительских форм для получения гибрида методами традиционной селекции. Линии, полученные с помощью трансформационного и молекулярного методов, считаются новыми ГМО и подлежат регистрационным испытаниям в полном объеме. Линии, полученные с помощью гибридизации, рассматриваются в разных юрисдикциях по-разному: в США, Канаде, Австралии и Новой Зеландии - как продукт обычной селекции, не требующий регистрации при условии, что исходные ГМ-линии уже зарегистрированы; в странах Европейского Союза требуется регистрация каждого нового ГМО, полученного с использованием уже зарегистрированных родительских ГМ линий, однако, с точки зрения безопасности рассматриваются только возможные эффекты взаимодействия двух белков (генов), обеспечивающих проявление новых признаков. При регистрации ГМО с комбинированными признаками, полученных гибридизацией трех и более родительских линий (ГМО высокого порядка), автоматически считаются зарегистрированными все возможные комбинации, сформировавшиеся в результате генетической сегрегации таких ГМО (расщепления признаков в поколениях F1 и выше, в соответствии с законами Менделя). Например, при регистрации ГМО, полученного гибридизацией шести родительских линий, должны быть зарегистрированы все 63 возможных гибрида поколения F1, содержащие рекомбинантную ДНК. Подобный подход применяется в Европейском Союзе, Аргентине, Бразилии, Филиппинах, Парагвае, Уругвае и Японии.
<a id="p100009"></a>На основании анализа отечественного и международного опыта были разработаны требования к оценке безопасности ГМО с комбинированными признаками, соответствующие принципам регулирования использования ГМО для пищевых целей.


### <a id="p100010"></a>I. Общие положения и область применения


<a id="p100011"></a>1.1. Методические указания устанавливают требования к проведению оценки безопасности ГМО с комбинированными признаками.
<a id="p100012"></a>1.2. Требования, изложенные в настоящих Методических указаниях, применяются на этапе государственной регистрации ГМО с комбинированными признаками, впервые поступающих на продовольственный рынок Российской Федерации.
<a id="p100013"></a>1.3. Методические указания разработаны с целью обеспечения единой, научно обоснованной системы оценки безопасности ГМО с комбинированными признаками и учитывают новые методические подходы, как используемые в России, так и рекомендованные международными организациями.


### <a id="p100014"></a>II. Проведение оценки безопасности ГМО с комбинированными признаками


<a id="p100015"></a>2.1. Перечень и объем исследований при оценке безопасности ГМО с комбинированными признаками определяются с учетом следующих факторов:
- <a id="p100016"></a>метода получения ГМО (трансформационный метод, молекулярный метод, гибридизационный метод);
- <a id="p100017"></a>наличия государственной регистрации исходных ГМ-линий на территории Таможенного Союза - для ГМО, полученных гибридизационным методом.
<a id="p100018"></a>2.2. В случае если ГМО с комбинированными признаками получен трансформационным или молекулярным методом, оценка его безопасности проводится в соответствии с [разделами III](#p100032) - [VII](#p100095) данных Методических указаний и включает в себя следующие этапы:
- <a id="p100019"></a>экспертный анализ и оценку данных, представленных заявителем, содержащих сравнение химического состава ГМО и его традиционного аналога (композиционная эквивалентность), результаты токсикологических, аллергологических и других исследований, результаты пострегистрационного мониторинга в стране-заявителе и других странах;
- <a id="p100020"></a>экспертную оценку методов обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО;
- <a id="p100021"></a>медико-генетическую оценку ГМО;
- <a id="p100022"></a>оценку функционально-технологических свойств ГМО;
- <a id="p100023"></a>медико-биологическую оценку безопасности ГМО.
<a id="p100024"></a>2.3. В случае если ГМО с комбинированными признаками получен гибридизационным методом и исходные ГМ-линии имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза, оценка его безопасности проводится в соответствии с [разделами III](#p100032) - [IV](#p100067) данных Методических указаний и включает в себя следующие этапы:
- <a id="p100025"></a>экспертный анализ и оценку данных, представленных заявителем или представленных на этапе регистрации исходных ГМ-линий (для ГМО, полученных гибридизационным методом, в случае, если все исходные ГМ-линии имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза), включающих: сравнение химического состава исходных ГМ-линий с химическим составом их традиционных аналогов (композиционная эквивалентность), результаты токсикологических, аллергологических и других исследований, результаты пострегистрационного мониторинга, осуществляемого в странах, где ГМО с комбинированными признаками был зарегистрирован ранее, в случае, если в процессе мониторинга были получены данные о незаданных эффектах генетической модификации;
- <a id="p100026"></a>экспертная оценка методов обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО;
- <a id="p100027"></a>подтверждение соответствия показателей качества и безопасности ГМО (содержание токсичных элементов, микотоксинов, радионуклидов, пестицидов и др.) требованиям Технических регламентов Таможенного Союза (ТР ТС 021/2011 "О безопасности пищевой продукции" и/или соответствующих Технических регламентов, устанавливающих обязательные требования к отдельным видам пищевой продукции);
- <a id="p100028"></a>заключение о результатах оценки безопасности ГМО с комбинированными признаками, оформленное в виде отчета в соответствии с требованиями Межгосударственного стандарта ГОСТ 7.32-2001. При формировании отчета должны быть соблюдены требования к конфиденциальности информации, предоставленной на этапе регистрации исходных ГМ-линий.
<a id="p100029"></a>2.4. Регистрация ГМО с комбинированными признаками, полученного методом гибридизации трех и более линий, уже зарегистрированных на территории Таможенного союза, означает регистрацию и всех возможных комбинаций этих линий, сформировавшихся в результате генетической сегрегации (расщепления признаков в поколениях F1 и выше, в соответствии с законами Менделя).
<a id="p100030"></a>2.5. В случае если ГМО с комбинированными признаками получен гибридизационным методом и одна или несколько исходных ГМ-линий не имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза, оценка безопасности такого ГМО проводится в полном объеме, в соответствии с [п. 2.2](#p100018) данных Методических указаний.
<a id="p100031"></a>2.6. Для проведения исследований, предусмотренных [п. 2.2](#p100018) и [2.3](#p100024) настоящих Методических указаний, заявитель представляет в аккредитованную лабораторию образцы ГМО и их традиционных аналогов в количестве, достаточном для выполнения полного объема исследований.


### <a id="p100032"></a>III. Экспертный анализ и оценка данных, характеризующих ГМО с комбинированными признаками


<a id="p100033"></a>3.1. Общая характеристика ГМО с комбинированными признаками включает экспертный анализ данных, представленных заявителем или представленных на этапе регистрации исходных ГМ-линий (для ГМО, полученных гибридизационным методом, в случае, если все исходные ГМ-линии имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза), включающих:
- <a id="p100034"></a>информацию, позволяющую идентифицировать ГМО (вид, сорт, событие, исходные ГМ-линии, характеристика отличий от немодифицированного организма);
- <a id="p100035"></a>информацию об исходном организме (таксономическая характеристика, описание способа размножения и распространения, данные о токсических, аллергенных и других неблагоприятных свойствах);
- <a id="p100036"></a>информацию об организмах-донорах вносимых генов (таксономическая характеристика, история использования);
- <a id="p100037"></a>информацию о методах генетических модификаций и способах получения ГМО и исходных ГМ-линий (описание методов модификаций, структур векторов, структур вставок);
- <a id="p100038"></a>информацию о ГМО и исходных ГМ-линиях (описание свойств, приобретенных растениями в результате модификаций, описание структур встроенных генетических конструкций и мест их локализации, характеристику экспрессии встроенных генов (экспрессия в процессе онтогенеза растения, экспрессия в структурных компонентах растения и др.);
- <a id="p100039"></a>информацию о потенциально возможном взаимодействии встроенных генетических элементов и белков-продуктов генов (при наличии такой информации), а также результатах их взаимодействия.
<a id="p100040"></a>3.1.1. Для ГМО, полученных молекулярным, трансформационным или гибридизационным (если одна или несколько исходных ГМ-линий не имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза) методами, дополнительно должны быть проанализированы данные о генетической и фенотипической стабильности (должны быть представлены данные, полученные в результате исследований нескольких поколений ГМО).
<a id="p100041"></a>3.2. Оценка композиционной эквивалентности проводится на основании информации о результатах сравнения химического состава ГМО с химическим составом его традиционного аналога, представленной заявителем. Для ГМО, полученных гибридизационным методом (если все исходные ГМ-линии имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза), оценка композиционной эквивалентности производится на основании информации о результатах сравнения химического состава исходных ГМ-линий с химическим составом их традиционных аналогов, представленной на этапе регистрации исходных ГМ-линий.

##### <a id="p100042"></a>3.2.1 Оценка композиционной эквивалентности проводится по следующим параметрам:

- <a id="p100043"></a>содержание белка;
- <a id="p100044"></a>аминокислотный состав;
- <a id="p100045"></a>содержание жира;
- <a id="p100046"></a>жирнокислотный состав;
- <a id="p100047"></a>содержание углеводов;
- <a id="p100048"></a>содержание макро- и микроэлементов;
- <a id="p100049"></a>содержание биологически активных веществ;
- <a id="p100050"></a>содержание аллергенов, характерных для исходного вида (сорта);
- <a id="p100051"></a>содержание антропогенных и природных контаминантов (токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов, радионуклидов, вредных примесей и др.);
- <a id="p100052"></a>содержание антинутриентов и других веществ, характерных для растительных организмов исходного вида (сорта).
<a id="p100053"></a>3.2.2. Перечень показателей варьируется в зависимости от свойств изучаемого растительного организма.
<a id="p100054"></a>3.2.3. Оценка композиционной эквивалентности ГМО и его традиционного аналога проводится с учетом биологических колебаний значений показателей, характерных для растений данного вида, и справочных данных о химическом составе исходного вида (сорта) растения.
<a id="p100055"></a>3.2.4. В случае если целью генетической модификации является изменение нутриентного состава растения или его частей (листьев, плодов и др.), этот фактор необходимо учитывать при оценке композиционной эквивалентности.
<a id="p100056"></a>3.3. Анализ результатов токсикологических исследований проводится на основании сведений, представленных заявителем или представленных на этапе регистрации исходных ГМ-линий (для ГМО, полученных гибридизационным методом, в случае, если все исходные ГМ-линии имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза), включающих:
- <a id="p100057"></a>результаты оценки безопасности белков, определяющих проявление заданных признаков ГМО (молекулярная и биохимическая характеристика белков; наличие или отсутствие гомологии с токсинами белковой природы, а также с белками, обладающими фармакологической или иной биологической активностью (при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank и др.); изучение стабильности белков при обработке, хранении, технологической переработке; влияние температуры и pH, возможные модификации и/или образование стабильных белковых фрагментов в результате различных воздействий; устойчивость белков к обработке протеолитическими ферментами в эксперименте in vitro; исследования острой пероральной токсичности белков в эксперименте на грызунах и др.);
- <a id="p100058"></a>результаты оценки безопасности нативного продукта (данные 90-дневных исследований на грызунах, данные исследований на молодых быстро растущих животных (цыплятах-бройлерах, ягнятах и др.) в случае, если такие исследования проводились;
- <a id="p100059"></a>результаты других токсикологических исследований.
<a id="p100060"></a>3.4. Анализ результатов аллергологических исследований проводится на основании сведений, представленных заявителем или представленных на этапе регистрации исходных ГМ-линий (для ГМО, полученных гибридизационным методом, в случае, если все исходные ГМ-линии имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза), включающих:
- <a id="p100061"></a>результаты оценки аллергенных свойств белков, определяющих проявление заданных признаков ГМО (сравнение с известными аллергенами с использованием баз данных, содержащих информацию о трехмерной структуре и функции известных аллергенов и родственных им белков); определение потенциальной аллергенности белков в иммунохимических исследованиях in vitro с использованием IgE, выделенных из сыворотки крови пациентов, страдающих аллергией; определение устойчивости к воздействию протеолитических ферментов (пепсина и др.); скрининговые исследования с использованием сывороток крови пациентов, страдающих аллергией; дополнительные исследования (в том числе in vivo);
- <a id="p100062"></a>результаты аллергологических исследований нативного продукта (сравнение набора аллергенов исследуемого ГМО с набором аллергенов его традиционного аналога и др.) в случае, если такие исследования проводились;
- <a id="p100063"></a>результаты других аллергологических исследований.
<a id="p100064"></a>3.5. Анализ результатов других исследований (в случае, если такие исследования были выполнены) проводится на основании сведений, представленных заявителем, или представленных на этапе регистрации исходных ГМ-линий, включая результаты применения новейших аналитических методов, таких как профильные технологии и др.
<a id="p100065"></a>3.6. Анализ результатов пострегистрационного мониторинга, осуществляемого в странах, где ГМО был зарегистрирован ранее, проводится в случае, если в процессе мониторинга были получены данные о незаданных эффектах генетической модификации.
<a id="p100066"></a>3.7. Анализ научных данных о ГМО с комбинированными признаками, представленных в научной литературе за весь период его использования; анализ научных данных об исходных ГМ-линиях за период, прошедший после их первичной регистрации.


### <a id="p100067"></a>IV. Методы обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО с комбинированными признаками в пищевых продуктах


<a id="p100068"></a>4.1. Основным методом, используемым для обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО, является полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ее модификации. Также для обнаружения ГМО в пищевых продуктах и продовольственном сырье, не подвергавшихся технологической переработке, могут быть использованы иммунологические методы детекции специфичных для ГМО белков.
<a id="p100069"></a>4.2. Экспертная оценка методов идентификации ГМО с комбинированными признаками направлена на подтверждение их адекватности инструментальной и методической базе, используемой в учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека для контроля за обращением ГМО и маркировкой пищевых продуктов, содержащих ГМО.
<a id="p100070"></a>4.3. Экспертная оценка методов обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО с комбинированными признаками в пищевых продуктах проводится на основании сведений, представленных заявителем, включающих:
- <a id="p100071"></a>метод идентификации одного или нескольких трансформационных событий (событие-специфичные тест-системы);
- <a id="p100072"></a>метод количественного определения одного или нескольких трансформационных событий (событие-специфичные тест-системы);
- <a id="p100073"></a>протоколы проведения анализов;
- <a id="p100074"></a>описание праймеров, ДНК-зондов и других необходимых реактивов;
- <a id="p100075"></a>стандартные образцы состава и свойств.
<a id="p100076"></a>4.4. Экспертная оценка методов обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО, полученных гибридизационным методом (если все исходные ГМ-линии имеют свидетельства о государственной регистрации на территории Таможенного Союза) производится только в случае, если методы обнаружения, идентификации и количественного определения зарегистрированных исходных ГМ-линий с момента их регистрации были модифицированы, усовершенствованы или разработаны вновь.
<a id="p100077"></a>4.4.1. Идентификация ГМО с комбинированными признаками, полученных гибридизационным методом, сложна по сравнению с идентификацией ГМО, полученных молекулярным и трансформационным методами, поскольку вставки рекомбинантной ДНК и их локализация в геноме гибридизационного события идентичны исходным ГМ-линиям. Результаты ПЦР-анализа таких ГМО укажут на присутствие в образце родительских линий ГМО, как если бы образец содержал их смесь, что делает возможной идентификацию ГМО, полученных гибридизационным методом, только на основании экспертизы документации.


### <a id="p100078"></a>V. Медико-генетическая оценка ГМО с комбинированными признаками


<a id="p100079"></a>5.1. Медико-генетическая оценка ГМО с комбинированными признаками включает проверку присутствия всех заявленных генетических конструкций методом ПЦР.

#### <a id="p100080"></a>5.2 Медико-генетические исследования проводятся на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- <a id="p100081"></a>описание молекулярной структуры всех заявленных генетических конструкций (нуклеотидная последовательность);
- <a id="p100082"></a>метод идентификации и количественного определения одного или нескольких трансформационных событий;
- <a id="p100083"></a>протокол проведения анализа;
- <a id="p100084"></a>описание праймеров, ДНК-зондов и других необходимых реактивов;
- <a id="p100085"></a>стандартные образцы состава и свойств.
<a id="p100086"></a>5.3. Заключение о результатах медико-генетической оценки ГМО с комбинированными признаками оформляется в виде отчета в соответствии с требованиями Межгосударственного стандарта ГОСТ 7.32-2001.


### <a id="p100087"></a>VI. Оценка функционально-технологических свойств ГМО с комбинированными признаками


<a id="p100088"></a>6.1. Перечень и объем исследований по разделу VI определяются экспертными (учеными) советами соответствующих аккредитованных испытательных центров Российской Федерации на основании анализа представленных материалов, индивидуально для каждого вида исследуемых продуктов.
<a id="p100089"></a>6.2. Проводится сравнение функционально-технологических свойств ГМО со свойствами его традиционного аналога. Для ГМО, полученного гибридизационным методом, проводится сравнение его функционально-технологических свойств со свойствами традиционных аналогов исходных ГМ-линий.
<a id="p100090"></a>6.3. Изучаемые функционально-технологические свойства (в соответствии со стандартами на конкретный вид исследуемых продуктов):
- <a id="p100091"></a>сравнительная органолептическая оценка;
- <a id="p100092"></a>сравнительная характеристика реологических свойств исследуемого продукта и/или его отдельных фракций;
- <a id="p100093"></a>сравнительная оценка физико-химических свойств исследуемого продукта и/или его отдельных фракций.
<a id="p100094"></a>6.4. Заключение о результатах оценки функционально-технологических свойств ГМО с комбинированными признаками оформляется в виде отчета в соответствии с требованиями Межгосударственного стандарта ГОСТ 7.32-2001.


### <a id="p100095"></a>VII. Медико-биологическая оценка безопасности ГМО с комбинированными признаками


<a id="p100096"></a>7.1. Перечень и объем исследований по разделу VII определяются экспертными (учеными) советами соответствующих аккредитованных испытательных центров Российской Федерации на основании анализа представленных материалов.
<a id="p100097"></a>7.2. Гигиенические исследования ГМО с комбинированными признаками включают определение показателей качества и безопасности:
<a id="p100098"></a>7.2.1. Перечень показателей безопасности формируется на основании требований Технических регламентов Таможенного Союза (ТР ТС 021/2011 "О безопасности пищевой продукции" и/или соответствующих Технических регламентов, устанавливающих обязательные требования к отдельным видам пищевой продукции).
<a id="p100099"></a>Изучаемые показатели:
- <a id="p100100"></a>содержание токсичных элементов;
- <a id="p100101"></a>содержание микотоксинов;
- <a id="p100102"></a>содержание пестицидов;
- <a id="p100103"></a>содержание радионуклидов;
- <a id="p100104"></a>содержание вредных примесей;
- <a id="p100105"></a>микробиологические показатели;
- <a id="p100106"></a>другие показатели (в случае необходимости).
<a id="p100107"></a>7.2.2. Перечень показателей качества формируется на основании свойств соответствующего растительного организма, а также анализа представленных заявителем материалов. В случае если заявителем представлены исчерпывающие данные по оценке композиционной эквивалентности ГМО (содержание белка, аминокислотный состав, содержание жира, жирнокислотный состав, углеводный состав, содержание витаминов, макро- и микроэлементов, специфических компонентов, биологически активных веществ, антинутриентов и других веществ, характерных для растений данного вида), исследования могут быть ограничены определением влажности, золы, содержания белка, жира, углеводов, пищевых волокон.
<a id="p100108"></a>7.2.3. В случае если генетическая модификация направлена на изменение химического состава ГМО с комбинированными признаками, должны быть проведены исследования, подтверждающие заявленные изменения.
<a id="p100109"></a>7.3. Изучение репродуктивной токсичности и токсичности ГМО с комбинированными признаками проводится в эксперименте на крысах линии Вистар. Токсикологические исследования включают изучение репродуктивной функции крыс поколения F0, пре- и постнатальное развитие потомства поколения F1, а также оценку физиолого-биохимических показателей крыс поколения F0 (на основании данных о динамике массы тела, об абсолютной и относительной массе внутренних органов; данных гематологических, морфологических и биохимических исследований, состояния антиоксидантного статуса и функционального состояния систем, осуществляющих защиту организма от воздействия токсичных соединений экзо- и эндогенного происхождения).

##### <a id="p100110"></a>7.3.1 Схема проведения эксперимента.



| <a id="p100111"></a>Вид животных | <a id="p100112"></a>Крысы линии Вистар |
| --- | --- |
| <a id="p100113"></a>Пол | <a id="p100114"></a>Самцы, самки |
| <a id="p100115"></a>Возраст | <a id="p100116"></a>25 - 30 дней |
| <a id="p100117"></a>Исходная масса тела | <a id="p100118"></a>70 - 80 г |
| <a id="p100119"></a>Количество животных в группе в начале эксперимента | <a id="p100120"></a>Не менее 80 особей в каждой группе: 55 ![VII. Медико-биологическая оценка безопасности ГМО с комбинированными признаками](https://i.bukva.ai/kuQ3YuXB/img_0.png) , 25 ![VII. Медико-биологическая оценка безопасности ГМО с комбинированными признаками](https://i.bukva.ai/kuQ3YuXB/img_1.png)<br>Все животные должны быть выбраны из пометов со сходной численностью и выживаемостью потомства. При невозможности такой стандартизации количество животных в группах должно быть увеличено не менее чем в 2 раза: 110 ![VII. Медико-биологическая оценка безопасности ГМО с комбинированными признаками](https://i.bukva.ai/kuQ3YuXB/img_2.png) , 50 ![VII. Медико-биологическая оценка безопасности ГМО с комбинированными признаками](https://i.bukva.ai/kuQ3YuXB/img_3.png) |
| <a id="p100121"></a>Распределение по группам | <a id="p100122"></a>Животных делят на 2 группы:<br>группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО; группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО |
| <a id="p100123"></a>Рацион | <a id="p100124"></a>Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных |
| <a id="p100125"></a>Карантин | <a id="p100126"></a>Не менее 7 дней |
| <a id="p100127"></a>Условия содержания | <a id="p100128"></a>Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении |
| <a id="p100129"></a>Отбор материала для гематологических, биохимических, морфологических исследований | <a id="p100130"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество животных, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу |


<a id="p100131"></a>7.3.2. На протяжении эксперимента животные получают полусинтетический казеиновый рацион (ПКР). Исследуемый ГМО и его традиционный аналог включают в состав корма в максимально возможном количестве, не нарушающем баланс основных пищевых веществ. Замена ингредиентов рациона должна быть проведена с учетом содержания белков, жиров и углеводов во вводимом продукте при соблюдении принципа изокалорийности.
<a id="p100132"></a>Продуктовый набор и химический состав базового ПКР представлены в табл. 1 - [2](#p100231).

<a id="p100133"></a>Таблица 1

<a id="p100134"></a>Состав базового полусинтетического казеинового рациона


<table>
<colgroup><col width="29%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="14%"><col width="11%"><col width="11%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100135"></a>Ингредиенты</td><td rowspan="2"><a id="p100136"></a>Кол-во, г</td><td rowspan="2"><a id="p100137"></a>Белок, г</td><td rowspan="2"><a id="p100138"></a>Жиры, г</td><td rowspan="2"><a id="p100139"></a>Углеводы, г</td><td colspan="2"><a id="p100140"></a>Калорийность</td></tr>
<tr><td><a id="p100141"></a>ккал</td><td><a id="p100142"></a>%</td></tr>
<tr><td><a id="p100143"></a>Казеин</td><td><a id="p100144"></a>23,949</td><td><a id="p100145"></a>20,21</td><td><a id="p100146"></a>0,36</td><td><a id="p100147"></a>-</td><td><a id="p100148"></a>84,08</td><td><a id="p100149"></a>23,46</td></tr>
<tr><td><a id="p100150"></a>Крахмал маисовый</td><td><a id="p100151"></a>59,0</td><td><a id="p100152"></a>0,59</td><td><a id="p100153"></a>-</td><td><a id="p100154"></a>51,07</td><td><a id="p100155"></a>206,64</td><td><a id="p100156"></a>57,65</td></tr>
<tr><td><a id="p100157"></a>Масло подсолнечное нерафинированное</td><td><a id="p100158"></a>5,0</td><td><a id="p100159"></a>-</td><td><a id="p100160"></a>4,99</td><td><a id="p100161"></a>-</td><td><a id="p100162"></a>44,91</td><td><a id="p100163"></a>12,53</td></tr>
<tr><td><a id="p100164"></a>Лярд</td><td><a id="p100165"></a>2,0</td><td><a id="p100166"></a>-</td><td><a id="p100167"></a>1,99</td><td><a id="p100168"></a>_</td><td><a id="p100169"></a>17,91</td><td><a id="p100170"></a>5,00</td></tr>
<tr><td><a id="p100171"></a>Солевая смесь <a href="#p100227">&lt;1&gt;</a></td><td><a id="p100172"></a>3,5</td><td><a id="p100173"></a>-</td><td><a id="p100174"></a>-</td><td><a id="p100175"></a>-</td><td><a id="p100176"></a>-</td><td><a id="p100177"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100178"></a>Смесь в/р витаминов <a href="#p100228">&lt;2&gt;</a></td><td><a id="p100179"></a>1,0</td><td><a id="p100180"></a>-</td><td><a id="p100181"></a>-</td><td><a id="p100182"></a>1,0</td><td><a id="p100183"></a>4,00</td><td><a id="p100184"></a>1,11</td></tr>
<tr><td><a id="p100185"></a>Смесь ж/р витаминов <a href="#p100229">&lt;3&gt;</a></td><td><a id="p100186"></a>0,1</td><td><a id="p100187"></a>-</td><td><a id="p100188"></a>0,1</td><td><a id="p100189"></a>-</td><td><a id="p100190"></a>0,9</td><td><a id="p100191"></a>0,25</td></tr>
<tr><td><a id="p100192"></a>L-цистеин</td><td><a id="p100193"></a>0,2</td><td><a id="p100194"></a>-</td><td><a id="p100195"></a>-</td><td><a id="p100196"></a>-</td><td><a id="p100197"></a>-</td><td><a id="p100198"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100199"></a>Холин</td><td><a id="p100200"></a>0,25</td><td><a id="p100201"></a>-</td><td><a id="p100202"></a>-</td><td><a id="p100203"></a>-</td><td><a id="p100204"></a>_</td><td><a id="p100205"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100206"></a>Трет-бутилгидрохинон</td><td><a id="p100207"></a>0,001</td><td><a id="p100208"></a>-</td><td><a id="p100209"></a>-</td><td><a id="p100210"></a>-</td><td><a id="p100211"></a>-</td><td><a id="p100212"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100213"></a>Микрокристаллическая целлюлоза</td><td><a id="p100214"></a>5,0</td><td><a id="p100215"></a>_</td><td><a id="p100216"></a>_</td><td><a id="p100217"></a>-</td><td><a id="p100218"></a>-</td><td><a id="p100219"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100220"></a>ИТОГО</td><td><a id="p100221"></a>100,0</td><td><a id="p100222"></a>20,80</td><td><a id="p100223"></a>7,44</td><td><a id="p100224"></a>52,07</td><td><a id="p100225"></a>358,44</td><td><a id="p100226"></a>100</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100227"></a><a id="p100228"></a><a id="p100229"></a>&lt;1&gt; состав солевой смеси представлен в <a href="#p100231">табл. 2</a>.<br>&lt;2&gt; 1 г содержит: тиамина (B1) - 0,6 мг, рибофлавина (B2) - 0,6 мг, пиридоксина (B6) - 0,7 мг, никотиновой кислоты - 3,0 мг, пантотената кальция - 1,6 мг, фолиевой кислоты - 0,2 мг, биотина - 0,02 мг, цианокобаламина (B12) - 0,0025 мг, викасола - 0,075 мг, L-метионина - 50 мг, глюкозы - до 1 г.<br>&lt;3&gt; 0,1 мл содержит: ретинола ацетата - 400 МЕ, эргокальциферола - 100 МЕ, $\alpha - \text{токоферола}$ ацетата - 7,5 мг, подсолнечного масла - до 0,1 мл</td></tr>
</table>


<a id="p100230"></a>Таблица 2

<a id="p100231"></a>Состав солевой смеси


| <a id="p100232"></a>N | <a id="p100233"></a>Название соли | <a id="p100234"></a>Химическая формула | <a id="p100235"></a>Количество, г |
| --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100236"></a>1 | <a id="p100237"></a>Кальций углекислый | <a id="p100238"></a>CaCO3 | <a id="p100239"></a>357,00 |
| <a id="p100240"></a>2 | <a id="p100241"></a>Калий фосфорнокислый, однозамещенный | <a id="p100242"></a>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | <a id="p100243"></a>196,00 |
| <a id="p100244"></a>3 | <a id="p100245"></a>Калий сернокислый | <a id="p100246"></a>K<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> | <a id="p100247"></a>46,60 |
| <a id="p100248"></a>4 | <a id="p100249"></a>Калий лимоннокислый, моногидрат | <a id="p100250"></a>HOC(COOK)(CH<sub>2</sub>COOK)<sub>2</sub> x H<sub>2</sub>O | <a id="p100251"></a>70,78 |
| <a id="p100252"></a>5 | <a id="p100253"></a>Натрий хлористый | <a id="p100254"></a>NaCl | <a id="p100255"></a>74,00 |
| <a id="p100256"></a>6 | <a id="p100257"></a>Магния окись | <a id="p100258"></a>MgO | <a id="p100259"></a>24,00 |
| <a id="p100260"></a>7 | <a id="p100261"></a>Железо лимоннокислое | <a id="p100262"></a>C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>FeO<sub>7</sub> | <a id="p100263"></a>6,06 |
| <a id="p100264"></a>8 | <a id="p100265"></a>Цинк углекислый | <a id="p100266"></a>ZnCO3 | <a id="p100267"></a>1,65 |
| <a id="p100268"></a>9 | <a id="p100269"></a>Марганец углекислый | <a id="p100270"></a>MnCO3 | <a id="p100271"></a>0,63 |
| <a id="p100272"></a>10 | <a id="p100273"></a>Медь углекислая | <a id="p100274"></a>CuCO<sub>3</sub> x Cu(OH)<sub>2</sub> | <a id="p100275"></a>0,30 |
| <a id="p100276"></a>11 | <a id="p100277"></a>Калия йодат | <a id="p100278"></a>KIO3 | <a id="p100279"></a>0,01 |
| <a id="p100280"></a>12 | <a id="p100281"></a>Натрия селенат | <a id="p100282"></a>Na<sub>2</sub>SeO<sub>4</sub> | <a id="p100283"></a>0,01025 |
| <a id="p100284"></a>13 | <a id="p100285"></a>Парамолибдат аммония | <a id="p100286"></a>(NH<sub>4</sub>)<sub>6</sub>Mo<sub>7</sub>O<sub>24</sub> x 4H<sub>2</sub>O | <a id="p100287"></a>0,00795 |
| <a id="p100288"></a>14 | <a id="p100289"></a>Натрия метасиликат | <a id="p100290"></a>Na<sub>2</sub>O<sub>3</sub>Si x 9H<sub>2</sub>O | <a id="p100291"></a>1,45 |
| <a id="p100292"></a>15 | <a id="p100293"></a>Хромовокалиевые квасцы | <a id="p100294"></a>CrK(SO<sub>4</sub>)<sub>2</sub> x 12H<sub>2</sub>O | <a id="p100295"></a>0,275 |
| <a id="p100296"></a>16 | <a id="p100297"></a>Борная кислота | <a id="p100298"></a>H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | <a id="p100299"></a>0,0815 |
| <a id="p100300"></a>17 | <a id="p100301"></a>Натрий фтористый | <a id="p100302"></a>NaF | <a id="p100303"></a>0,0635 |
| <a id="p100304"></a>18 | <a id="p100305"></a>Никель углекислый | <a id="p100306"></a>2NiCO<sub>3</sub>·3Ni(OH)<sub>2</sub> x 4H<sub>2</sub>O | <a id="p100307"></a>0,0318 |
| <a id="p100308"></a>19 | <a id="p100309"></a>Аммоний ванадиевокислый | <a id="p100310"></a>NH<sub>4</sub>VO<sub>3</sub> | <a id="p100311"></a>0,0066 |
| <a id="p100312"></a>20 | <a id="p100313"></a>Сахароза | <a id="p100314"></a>C<sub>12</sub>H<sub>22</sub>O<sub>11</sub> | <a id="p100315"></a>221,0434 |
|  | <a id="p100316"></a>ИТОГО |  | <a id="p100317"></a>1000 |


<a id="p100318"></a>7.3.2.1. В случае исследования ГМО, полученного гибридизационным методом, в рационе лабораторных животных в качестве традиционного аналога используется смесь традиционных аналогов исходных ГМ-линий.

##### <a id="p100319"></a>7.3.3 Исследуемые показатели.


###### <a id="p100320"></a>7.3.3.1 Интегральные показатели.



| <a id="p100321"></a>Изучаемые показатели | <a id="p100322"></a>Сроки и периодичность сбора данных |
| --- | --- |
| <a id="p100323"></a>1 | <a id="p100324"></a>2 |
| <a id="p100325"></a>Общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова) | <a id="p100326"></a>ежедневно |
| <a id="p100327"></a>Поедаемость корма | <a id="p100328"></a>ежедневно |
| <a id="p100329"></a>Масса тела | <a id="p100330"></a>каждые 7 дней |
| <a id="p100331"></a>Масса тела самок во время беременности | <a id="p100332"></a><a id="p100333"></a>С 1-го по 20-й дни беременности - у самок, предназначенных для изучения пренатального развития потомства - каждые 5 дней<br>С 1-го дня беременности до момента родов - у самок, предназначенных для изучения постнатального развития потомства - каждые 5 дней |
| <a id="p100334"></a>Масса внутренних органов (головной мозг, сердце, селезенка, легкие, тимус, гипофиз, печень, почки, простата, надпочечники, семенники) у самцов поколения F0 | <a id="p100335"></a>Не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу |
| <a id="p100336"></a>Масса внутренних органов (головной мозг, сердце, селезенка, легкие, тимус, гипофиз, печень, почки, надпочечники, яичники) у беременных самок поколения F0 - на 20-й день беременности | <a id="p100337"></a>Количество самок, взятых на исследование, должно составлять не менее 15 на группу |


<a id="p100338"></a>7.3.3.2. Репродуктивную функцию оценивают по генеративной и эндокринной функции гонад родительских животных поколения F0, пренатальному и постнатальному развитию потомства поколения F1.
<a id="p100339"></a>Показатели, характеризующие генеративную функцию.


<table>
<colgroup><col width="50%"><col width="50%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100340"></a>Изучаемые показатели <a href="#p100664">[1</a>, <a href="#p100665">2</a>]</td><td><a id="p100341"></a>Сроки сбора данных</td></tr>
<tr><td><a id="p100342"></a>1</td><td><a id="p100343"></a>2</td></tr>
<tr><td><a id="p100344"></a>Эффективность спаривания самцов и самок. Оценивают по способности к оплодотворению самок и самцов, выраженную в процентном соотношении забеременевших самок/оплодотворивших самцов к общему количеству ссаженных самок/самцов. Для получения потомства F1 самок F0 ссаживают с самцами F0 в соотношении 2:1 не менее чем на 7 дней</td><td><a id="p100345"></a>В период ссаживания половозрелых крыс поколения F0 (возраст не менее 100 дней) с целью получения потомства F1 для оценки постнатального развития. Количество самок, взятых на исследование, должно составлять не менее 30 на группу</td></tr>
<tr><td><a id="p100346"></a>Эндокринная функция яичников и семенников. Оценивают по содержанию эстрадиола, прогестерона и тестостерона в сыворотке крови</td><td><a id="p100347"></a><a id="p100348"></a>У беременных самок поколения F0 - на 20-й день беременности. Количество самок, взятых на исследование, должно составлять не менее 15 на группу.<br>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 15 на группу</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100349"></a>Дополнительные исследования</td></tr>
<tr><td><a id="p100350"></a>Спермограмма. Оценивают макроскопические параметры эякулята - pH. объем спермы, цвет, время разжижения и вязкость эякулята, а также характеристики клеточных элементов спермы - количество, подвижность, жизнеспособность, морфологию сперматозоидов, количество и типы лейкоцитов, количество и типы незрелых клеток сперматогенеза и пр.</td><td><a id="p100351"></a>У половозрелых самцов поколения F0 или F1 (возраст не менее 100 дней). Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 15 на группу</td></tr>
<tr><td><a id="p100352"></a>Морфологические исследования семенников (определяют индекс сперматогенеза, среднее количество нормальных сперматогоний в каждом канальце, относительное количество канальцев с 12-й стадией мейоза)</td><td><a id="p100353"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу</td></tr>
<tr><td><a id="p100354"></a>Морфологические исследования яичников (примордиальные фолликулы, фолликулы с двумя и более слоями фолликулярных клеток, третичные фолликулы, атретические тела, желтые тела, общее количество генеративных форм)</td><td><a id="p100355"></a>У беременных самок поколения F0 - на 20-й день беременности. Количество самок, взятых на исследование, должно составлять не менее 15 на группу</td></tr>
</table>


<a id="p100356"></a>Показатели, характеризующие пренатальное развитие потомства.


<table>
<colgroup><col width="83%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100357"></a>Изучаемые показатели</td><td><a id="p100358"></a>Сроки сбора данных</td></tr>
<tr><td><a id="p100359"></a>Эвтаназия и вскрытие не менее 15 беременных самок на группу</td><td rowspan="3"><a id="p100360"></a>20-й день беременности</td></tr>
<tr><td><a id="p100361"></a>Визуальное исследование матки, плаценты, плодов: выявление живых и мертвых плодов, подсчет количества желтых тел, мест имплантации, количество резорбций по правому и левому рогу матки (с последующим вычислением пред- и постимплантационной гибели)</td></tr>
<tr><td><a id="p100362"></a>Оценка развития плодов: макроскопический осмотр, определение массы и краниокаудального размера плодов. После осмотра, измерения и взвешивания плоды каждого помета необходимо разделить на три равные группы: одна группа предназначена для вскрытия, выделения и взвешивания внутренних органов (печени, почек, сердца, легких); плоды второй группы фиксируют в жидкости Буэна и используют для изучения внутренних органов по методу Wilson J.G.; плоды третьей группы фиксируют в 96° этаноле и используют для изучения состояния скелета по методу Dawson A.B.</td></tr>
</table>


<a id="p100363"></a>Показатели, характеризующие постнатальное развитие потомства.


| <a id="p100364"></a>Изучаемые показатели | <a id="p100365"></a>Сроки сбора данных |
| --- | --- |
| <a id="p100366"></a>1 | <a id="p100367"></a>2 |
| <a id="p100368"></a>Контроль рождения потомства | <a id="p100369"></a><a id="p100370"></a>Самки поколения F0,<br>22 - 25-й дни беременности |
| <a id="p100371"></a>Определение средней величины помета, подсчет количества живых и мертвых крысят, подсчет особей разного пола, выявление внешних уродств | <a id="p100372"></a>1-й день жизни крысят поколения F1 |
| <a id="p100373"></a>Измерение массы тела и роста (краниокаудального размера) крысят поколения F1 | <a id="p100374"></a>2, 5, 10, 15, 20 и 25 дни жизни крысят поколения F1 |
| <a id="p100375"></a>Учет показателей физиологического развития крысят: срок отлипания ушных раковин, появление первичного волосяного покрова, прорезывание резцов, открытие глаз, опускание семенников, открытие влагалища | <a id="p100376"></a>1 - 35 дни жизни крысят поколения F1 |
| <a id="p100377"></a>Вычисление выживаемости потомства с 1-го по 5-й день жизни (отношение числа крысят, доживших до 5-го дня, к числу родившихся живыми) и с 6-го по 25-й день жизни (отношение числа крысят, доживших до 25-го дня, к числу доживших до 6-го дня), выраженное в процентах. | <a id="p100378"></a>1 - 25 дни жизни крысят поколения F1 |
| <a id="p100379"></a>Определение соотношения самцов и самок в пометах | <a id="p100380"></a>1 - 10 дни жизни крысят поколения F1 |


<a id="p100381"></a>7.3.3.2.1. Раздел отчета по результатам оценки репродуктивной функции крыс должен включать цифровые данные в форме таблиц, содержащих основные сведения, необходимые для суждения о наличии или отсутствии у исследуемого ГМО неблагоприятного действия на репродуктивную функцию и развитие потомства.
<a id="p100382"></a>7.3.3.3. Физиолого-биохимические показатели состояния здоровья крыс поколения F0 оценивают на основании данных о динамике массы тела, об абсолютной и относительной массе внутренних органов; данных гематологических, морфологических и биохимических исследований, состояния антиоксидантного статуса и функционального состояния систем, осуществляющих защиту организма от воздействия токсичных соединений экзо- и эндогенного происхождения.

###### <a id="p100383"></a>7.3.3.3.1 Общий клинический анализ крови.



| <a id="p100384"></a>Изучаемые показатели | <a id="p100385"></a>Сроки отбора материала |
| --- | --- |
| <a id="p100386"></a><a id="p100387"></a><a id="p100388"></a><a id="p100389"></a><a id="p100390"></a><a id="p100391"></a><a id="p100392"></a><a id="p100393"></a><a id="p100394"></a><a id="p100395"></a><a id="p100396"></a>- Концентрация гемоглобина;<br>- Гематокрит;<br>- Общее количество эритроцитов;<br>- Средний объем эритроцита;<br>- Среднее содержание гемоглобина в эритроците;<br>- Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ);<br>- Общее количество тромбоцитов;<br>- Тромбокрит;<br>- Средний объем тромбоцита;<br>- Общее количество лейкоцитов;<br>- Дифференцированный подсчет лейкоцитарной формулы (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы) | <a id="p100397"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу |



###### <a id="p100398"></a>7.3.3.3.2 Общий биохимический анализ сыворотки крови



| <a id="p100399"></a>Изучаемые показатели | <a id="p100400"></a>Сроки отбора материала |
| --- | --- |
| <a id="p100401"></a><a id="p100402"></a><a id="p100403"></a><a id="p100404"></a><a id="p100405"></a><a id="p100406"></a><a id="p100407"></a><a id="p100408"></a><a id="p100409"></a><a id="p100410"></a><a id="p100411"></a><a id="p100412"></a><a id="p100413"></a><a id="p100414"></a><a id="p100415"></a><a id="p100416"></a><a id="p100417"></a><a id="p100418"></a><a id="p100419"></a><a id="p100420"></a><a id="p100421"></a><a id="p100422"></a><a id="p100423"></a><a id="p100424"></a>- Общий белок;<br>- Альбумин;<br>- Глобулин;<br>- Триглицериды;<br>- Общий билирубин;<br>- Прямой билирубин;<br>- Мочевина;<br>- Мочевая кислота;<br>- Креатинин;<br>- Глюкоза;<br>- Холестерин;<br>- Лактатдегидрогеназа;<br>- Альфа-амилаза;<br>- Креатинфосфокиназа;<br>- Щелочная фосфатаза;<br>- Аланинаминотрансфераза;<br>- Аспартатаминотрансфераза;<br>- Кальций;<br>- Магний;<br>- Железо;<br>- Натрий;<br>- Калий;<br>- Фосфор;<br>- Хлор | <a id="p100425"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу |



###### <a id="p100426"></a>7.3.3.3.3 Общий и биохимический анализ мочи.



| <a id="p100427"></a>Изучаемые показатели | <a id="p100428"></a>Сроки отбора материала |
| --- | --- |
| <a id="p100429"></a><a id="p100430"></a><a id="p100431"></a><a id="p100432"></a><a id="p100433"></a><a id="p100434"></a><a id="p100435"></a><a id="p100436"></a><a id="p100437"></a><a id="p100438"></a><a id="p100439"></a><a id="p100440"></a>- Суточный диурез;<br>- Цвет и прозрачность;<br>- Относительная плотность;<br>- pH;<br>- Белок;<br>- Глюкоза;<br>- Креатинин;<br>- Мочевина;<br>- Мочевая кислота;<br>- Кальций;<br>- Магний;<br>- Фосфор | <a id="p100441"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу |



###### <a id="p100442"></a>7.3.3.3.4 Системные биомаркеры.

<a id="p100443"></a>Система антиоксидантной защиты.


<table>
<colgroup><col width="69%"><col width="31%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100444"></a>Изучаемые показатели</td><td><a id="p100445"></a>Сроки отбора материала</td></tr>
<tr><td><a id="p100446"></a><a id="p100447"></a><a id="p100448"></a><a id="p100449"></a><a id="p100450"></a>Активность ферментов антиоксидантной защиты. Материал для исследований: эритроциты <a href="#p100666">[3</a> - <a href="#p100671">8</a>]<br>- Глутатионредуктаза;<br>- Глутатионпероксидаза;<br>- Супероксиддисмутаза;<br>- Каталаза</td><td rowspan="2"><a id="p100451"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу</td></tr>
<tr><td><a id="p100452"></a><a id="p100453"></a>Содержание продуктов перекисного окисления липидов. Материал для исследований: кровь, печень <a href="#p100672">[9</a> - <a href="#p100674">11</a>]<br>- Малоновый диальдегид</td></tr>
</table>


<a id="p100454"></a>Система ферментов метаболизма ксенобиотиков.


| <a id="p100455"></a>Изучаемые показатели | <a id="p100456"></a>Сроки отбора материала |
| --- | --- |
| <a id="p100457"></a><a id="p100458"></a><a id="p100459"></a><a id="p100460"></a><a id="p100461"></a><a id="p100462"></a><a id="p100463"></a>Активность ферментов 1-й и 2-й фазы метаболизма ксенобиотиков [[12](#p100675) - [16](#p100679)]<br>Материал для исследований: печень<br>- Общее содержание цитохрома Р-450;<br>- Этоксирезоруфиндеалкилаза;<br>- Пентоксирезоруфиндеалкилаза;<br>- УДФ-глюкуронозилтрансфераза;<br>- ХДНБ-глутатионтрансфераза | <a id="p100464"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 10 на группу |


<a id="p100465"></a>Стабильность мембран лизосом.


| <a id="p100466"></a>Изучаемые показатели | <a id="p100467"></a>Сроки отбора материала |
| --- | --- |
| <a id="p100468"></a><a id="p100469"></a><a id="p100470"></a><a id="p100471"></a><a id="p100472"></a>Общая и неседиментируемая активность ферментов лизосом [[17]](#p100680)<br>Материал для исследований: печень<br>- $\beta - \text{Галактозидаза}$ ;<br>- $\beta - \text{Глюкуронидаза}$ ;<br>- Арилсульфатазы A и B | <a id="p100473"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу |


<a id="p100474"></a>Интенсивность процессов апоптоза.


| <a id="p100475"></a>Изучаемые показатели | <a id="p100476"></a>Сроки отбора материала |
| --- | --- |
| <a id="p100477"></a><a id="p100478"></a><a id="p100479"></a><a id="p100480"></a>Щелочной гель-электрофорез изолированных клеток (метод "ДНК-комет")<br>Материал для исследований: печень, тимус, почки<br>- Индекс апоптоза;<br>- Степень фрагментации ДНК | <a id="p100481"></a>У самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу |



###### <a id="p100482"></a>7.3.3.3.5 Морфологические исследования



<table>
<colgroup><col width="25%"><col width="75%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100483"></a>Исследуемые органы</td><td><a id="p100484"></a>Методы исследований <a href="#p100681">[18</a> - <a href="#p100691">28</a>]</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100485"></a><a id="p100486"></a><a id="p100487"></a><a id="p100488"></a><a id="p100489"></a><a id="p100490"></a><a id="p100491"></a><a id="p100492"></a><a id="p100493"></a><a id="p100494"></a><a id="p100495"></a><a id="p100496"></a><a id="p100497"></a>Головной мозг;<br>Гипофиз;<br>Сердце;<br>Тимус;<br>Легкие;<br>Печень;<br>Селезенка;<br>Почки;<br>Надпочечники;<br>ЖКТ: желудок, тонкая и толстая кишки;<br>Яичники;<br>Семенники;<br>Простата</td><td><a id="p100498"></a><a id="p100499"></a><a id="p100500"></a><a id="p100501"></a><a id="p100502"></a>Отбор материала у самцов поколения F0 не ранее чем на 100-й день эксперимента. Количество самцов, взятых на исследование, должно составлять не менее 20 на группу.<br>1. Макроскопические исследования<br>2. Микроскопические исследования:<br>а) обзорные гистологические исследования<br>3. Морфометрический анализ</td></tr>
<tr><td><a id="p100503"></a><a id="p100504"></a><a id="p100505"></a><a id="p100506"></a>Вскрытие погибших в течение эксперимента животных (внеплановый отбор)<br>1. Макроскопические исследования<br>2. Микроскопические исследования (перечень исследуемых органов может быть сокращен до минимально необходимого для установления причины смерти):<br>а) обзорные гистологические исследования.</td></tr>
<tr><td><a id="p100507"></a><a id="p100508"></a><a id="p100509"></a><a id="p100510"></a><a id="p100511"></a>Дополнительные исследования<br>1. Микроскопические исследования:<br>а) гистохимические исследования;<br>б) иммуногистохимические исследования клеточных популяций и их производных.<br>2. Электронно-микроскопические исследования</td></tr>
</table>



###### <a id="p100512"></a>7.3.3.3.6 Другие исследования.

<a id="p100513"></a>7.4. Иммунологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на мышах линий CBA и C57B1/6 и включают изучение его иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам:
- <a id="p100514"></a>действие на гуморальное звено иммунитета - в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана;
- <a id="p100515"></a>действие на клеточное звено иммунитета - в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана;
- <a id="p100516"></a>действие как сенсибилизирующего агента - в тесте чувствительности к гистамину;
- <a id="p100517"></a>действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium (сальмонеллы мышиного тифа).
<a id="p100518"></a>В табл. 3 представлены сравнительные характеристики мышей линий CBA и C57B1/6.

<a id="p100519"></a>Таблица 3

<a id="p100520"></a>Характеристики мышей линий CBA и C57B1/6


<table>
<colgroup><col width="33%"><col width="33%"><col width="33%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100521"></a>Действующий фактор</td><td colspan="2"><a id="p100522"></a>Линия мышей</td></tr>
<tr><td><a id="p100523"></a>CBA</td><td><a id="p100524"></a>C57B1/6</td></tr>
<tr><td><a id="p100525"></a>Эритроциты барана</td><td><a id="p100526"></a>высокочувствительны</td><td><a id="p100527"></a>низкочувствительны</td></tr>
<tr><td><a id="p100528"></a>Гистамин</td><td><a id="p100529"></a>не чувствительны</td><td><a id="p100530"></a>чувствительны</td></tr>
<tr><td><a id="p100531"></a>Salmonella typhimurium</td><td><a id="p100532"></a>не чувствительны</td><td><a id="p100533"></a>чувствительны</td></tr>
</table>



##### <a id="p100534"></a>7.4.1 Схема проведения эксперимента.



<table>
<colgroup><col width="42%"><col width="58%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100535"></a>Вид животных</td><td><a id="p100536"></a>Мыши линий CBA и C57B1/6</td></tr>
<tr><td><a id="p100537"></a>Пол</td><td><a id="p100538"></a>самцы</td></tr>
<tr><td><a id="p100539"></a>Возраст</td><td><a id="p100540"></a>половозрелые</td></tr>
<tr><td><a id="p100541"></a>Исходная масса тела</td><td><a id="p100542"></a>18 - 20 г</td></tr>
<tr><td><a id="p100543"></a>Количество животных в группе в начале эксперимента</td><td><a id="p100544"></a><a id="p100545"></a>Не менее 120 мышей линий CBA в каждой группе<br>Не менее 120 мышей линий C57B1/6 в каждой группе</td></tr>
<tr><td><a id="p100546"></a>Распределение по группам</td><td><a id="p100547"></a><a id="p100548"></a><a id="p100549"></a>Животных каждой линии делят на 2 группы:<br>Группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;<br>Группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО</td></tr>
<tr><td><a id="p100550"></a>Рацион <a href="#p100556">&lt;*&gt;</a></td><td><a id="p100551"></a>Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных</td></tr>
<tr><td><a id="p100552"></a>Карантин</td><td><a id="p100553"></a>не менее 7 дней</td></tr>
<tr><td><a id="p100554"></a>Условия содержания</td><td><a id="p100555"></a>Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100556"></a>&lt;*&gt; состав базового рациона приведен в <a href="#p100131">п. 7.3.2</a></td></tr>
</table>


<a id="p100557"></a>Исследования начинают через 21 день с момента перевода мышей на экспериментальные рационы. В течение эксперимента проводят наблюдения за поедаемостью корма и общим состоянием животных.

##### <a id="p100558"></a>7.4.2 Исследуемые показатели.

<a id="p100559"></a>7.4.2.1. Влияние ГМО на гуморальный иммунный ответ оценивают на основании титров антител после иммунизации эритроцитами барана мышей высокоотвечающей (CBA) и низкоотвечающей (C57BL/6) линий. Для иммунизации животных следует использовать минимальные дозы (5 x 106) антигена.
<a id="p100560"></a>Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 45 животных) и опытной (не менее 45 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят 0,5 мл эритроцитов барана (10 млн клеток/мл). Отбор крови для исследований проводят на 7-й, 10-й и 14-й день после введения эритроцитов барана. Сыворотку крови титруют общепринятым методом в реакции гемагглютинации [[17]](#p100680). Реакция основана на способности антител, содержащихся в сыворотке крови иммунизированных животных, склеивать (агглютинировать) эритроциты барана. В 96-луночных плоскодонных планшетах готовят двукратные разведения исследуемой сыворотки в объеме 0,5 мл, начиная с разведения 1:10. В контрольную лунку вносят 0,5 мл физиологического раствора. Ко всем лункам добавляют 0,5 мл 1% эритроцитов барана. Учет реакции ведется после инкубации планшетов в термостате в течение 2 ч при 37 °C. При положительном результате эритроциты оседают на дне лунки планшета в виде зонтика, при отрицательном - в виде пуговки. За титр принимают то последнее разведение исследуемой сыворотки, при которой еще наблюдается положительный результат. Контрольная лунка должна быть отрицательной. Полученные данные обрабатывают методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. Результаты приводятся в виде M +/- m, где M - выборочное среднее измеряемых величин, m - стандартная ошибка.
<a id="p100561"></a>7.4.2.2. Влияние ГМО на клеточный иммунный ответ оценивают на основании реакции гиперчувствительности замедленного типа. При выполнении теста антиген вводят двукратно: для сенсибилизации и для разрешения.
<a id="p100562"></a>Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий подкожно в межлопаточную область вводят 0,5 мл эритроцитов барана (20 млн клеток/мл). Через пять дней всем мышам в подушечку одной задней лапы вводят разрешающую дозу эритроцитов барана - 0,02 мл (100 млн клеток/мышь); в контрлатеральную лапу - 0,02 мл 0,95%-го раствора хлорида натрия. Местную воспалительную реакцию оценивают через 18 - 20 часов путем определения массы опытной и контрольной лапок. Интенсивность местной реакции определяют по индексу реакции (ИР) [[17]](#p100680).
<a id="p100563"></a>7.4.2.3. Действие ГМО как сенсибилизирующего агента оценивают в тесте чувствительности к гистамину.
<a id="p100564"></a>Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят гистамин гидрохлорид (2,5 мг/мышь в 0,5 мл физиологического раствора). Реакцию учитывают через 24 часа по проценту гибели мышей [[34]](#p100697).
<a id="p100565"></a>7.4.2.4. Влияние ГМО на естественную резистентность мышей к S. typhimurium оценивают на модели внутрибрюшинного заражения мышей десятикратно отличающимися дозами S. typhimurium штамм 415. Через 21 день эксперимента мышей контрольной (не менее 45 животных) и опытной (не менее 45 животных) групп обеих линий заражают тремя дозами культуры: 1 000, 100, 10 микробных клеток/мышь. После заражения за животными наблюдают в течение 21 дня. Вычисляют ЛД50, а также процент гибели животных по каждой дозе, затем проводят сравнительный анализ результатов [[18]](#p100681).
<a id="p100566"></a>7.5. Аллергологические исследования ГМО с комбинированными признаками проводятся в эксперименте на лабораторных животных: потенциальную аллергенность оценивают, определяя тяжесть протекания системной анафилаксии и уровень циркулирующих сенсибилизирующих антител (субклассов IgG1 + IgG4) у крыс, получающих в составе рациона исследуемый ГМО (группа "опыт") и его традиционный аналог (группа "контроль"). В случае исследования ГМО, полученных гибридизационным методом, в рационе лабораторных животных в качестве традиционного аналога используется смесь традиционных аналогов исходных ГМ-линий. Метод основан на количественной сравнительной оценке тяжести реакции системной анафилаксии, возникающей при внутрибрюшинной (в/б) сенсибилизации взрослых крыс пищевым антигеном - овальбумином куриного яйца (OBA) с последующим внутривенным (в/в) введением сенсибилизированным животным разрешающей дозы того же белка [[35]](#p100698).

##### <a id="p100567"></a>7.5.1 Схема проведения эксперимента



| <a id="p100568"></a>Вид животных | <a id="p100569"></a>Крысы линии Вистар |
| --- | --- |
| <a id="p100570"></a>Пол | <a id="p100571"></a>Самцы |
| <a id="p100572"></a>Возраст | <a id="p100573"></a>Половозрелые |
| <a id="p100574"></a>Исходная масса тела | <a id="p100575"></a>150 - 180 г |
| <a id="p100576"></a>Количество животных в группе в начале эксперимента | <a id="p100577"></a>Не менее 25 особей в каждой группе |
| <a id="p100578"></a>Распределение по группам | <a id="p100579"></a><a id="p100580"></a><a id="p100581"></a>Животных делят на 2 группы:<br>группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;<br>группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО |
| <a id="p100582"></a>Рацион (состав базового рациона представлен в [табл. 4](#p100594)) | <a id="p100583"></a><a id="p100584"></a>Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных.<br>Рацион не содержит яичного белка |
| <a id="p100585"></a>Карантин | <a id="p100586"></a>Не менее 7-ми дней |
| <a id="p100587"></a>Условия содержания | <a id="p100588"></a>Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении |
| <a id="p100589"></a>Продолжительность эксперимента | <a id="p100590"></a>29 дней |
| <a id="p100591"></a>Отбор материала для исследований | <a id="p100592"></a>На 29-й день эксперимента |


<a id="p100593"></a>Таблица 4

<a id="p100594"></a>Стандартный рацион вивария


<table>
<colgroup><col width="50%"><col width="50%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100595"></a>Ингредиент</td><td><a id="p100596"></a>Масса, г<br>на 1 крысу в день</td></tr>
<tr><td><a id="p100597"></a>Крупа овсяная</td><td><a id="p100598"></a>2,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100599"></a>Зерновая смесь</td><td><a id="p100600"></a>14,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100601"></a>Хлеб 2 сорт</td><td><a id="p100602"></a>4,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100603"></a>Творог</td><td><a id="p100604"></a>2,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100605"></a>Рыбная мука</td><td><a id="p100606"></a>0,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100607"></a>Мясо 2 категория</td><td><a id="p100608"></a>4,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100609"></a>Морковь</td><td><a id="p100610"></a>8,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100611"></a>Зелень</td><td><a id="p100612"></a>8,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100613"></a>Рыбий жир</td><td><a id="p100614"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100615"></a>Дрожжи</td><td><a id="p100616"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100617"></a>NaCl</td><td><a id="p100618"></a>0,15</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100619"></a>Основные нутриенты</td></tr>
<tr><td><a id="p100620"></a>Белок</td><td><a id="p100621"></a>3,69</td></tr>
<tr><td><a id="p100622"></a>Жир</td><td><a id="p100623"></a>1,28</td></tr>
<tr><td><a id="p100624"></a>Углеводы</td><td><a id="p100625"></a>12,42</td></tr>
<tr><td><a id="p100626"></a>Энергия, ккал</td><td><a id="p100627"></a>76,0</td></tr>
</table>



##### <a id="p100628"></a>7.5.2 Исследуемые показатели.

<a id="p100629"></a>На 1-й, 3-й, 5-й день опыта крыс в/б сенсибилизируют OBA, а на 21-й день эксперимента вводят дополнительную ("бустерную") дозу антигена, уменьшенную в 10 раз в сравнении с первоначальной. Кормление рационами продолжают до утра 29-го дня эксперимента и затем вводят раствор OBA в/в, после чего оценивают на протяжении 24 ч тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по показателям числа летальных реакций, общего числа судорожных реакций и величины анафилактического индекса [[36]](#p100699). Непосредственно перед введением разрешающей дозы у крыс отбирают 0,1 - 0,2 мл крови из хвостовой вены для определения уровня специфических антител.
<a id="p100630"></a>Иммуноферментное определение уровней циркулирующих специфических антител к OBA проводят согласно [[19]](#p100682). Статистическую обработку результатов проводят согласно U-критерию Фишера для долевых показателей, непараметрическим критериям хи-квадрат и Манна-Уитни.
<a id="p100631"></a>7.6. Генотоксикологические исследования ГМО с комбинированными признаками проводятся в эксперименте на лабораторных животных. Оценка потенциальной генотоксичности ГМО включает выявление повреждений ДНК и выявление мутагенной активности в эксперименте in vivo. Метод выявления мутагенной активности основан на учете хромосомных аберраций в метафазных клетках пролиферирующих тканей [[20]](#p100683). Регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет) [[21]](#p100684).

##### <a id="p100632"></a>7.6.1 Схема проведения эксперимента.



<table>
<colgroup><col width="42%"><col width="58%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100633"></a>Вид животных</td><td><a id="p100634"></a>Мыши линии C57B1/6</td></tr>
<tr><td><a id="p100635"></a>Пол</td><td><a id="p100636"></a>Самцы</td></tr>
<tr><td><a id="p100637"></a>Возраст</td><td><a id="p100638"></a>Половозрелые</td></tr>
<tr><td><a id="p100639"></a>Исходная масса тела</td><td><a id="p100640"></a>18 - 20 г</td></tr>
<tr><td><a id="p100641"></a>Количество животных в группе в начале эксперимента</td><td><a id="p100642"></a>Не менее 15 особей в каждой группе</td></tr>
<tr><td><a id="p100643"></a>Распределение по группам</td><td><a id="p100644"></a><a id="p100645"></a><a id="p100646"></a>Животных делят на 2 группы:<br>группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО;<br>группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО</td></tr>
<tr><td><a id="p100647"></a>Рацион <a href="#p100657">&lt;*&gt;</a></td><td><a id="p100648"></a>Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных</td></tr>
<tr><td><a id="p100649"></a>Карантин</td><td><a id="p100650"></a>Не менее 7-ми дней</td></tr>
<tr><td><a id="p100651"></a>Условия содержания</td><td><a id="p100652"></a>Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.</td></tr>
<tr><td><a id="p100653"></a>Продолжительность эксперимента</td><td><a id="p100654"></a>30 дней</td></tr>
<tr><td><a id="p100655"></a>Забор материала для исследований</td><td><a id="p100656"></a>На 30-й день эксперимента</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100657"></a>&lt;*&gt; состав базового рациона приведен в <a href="#p100131">п. 7.3.2</a></td></tr>
</table>



##### <a id="p100658"></a>7.6.2 Исследуемые показатели:

- <a id="p100659"></a>в основе метода выявления мутагенной активности лежит регистрация видимых структурных нарушений хромосом в клетках костного мозга на стадии метафазы. Анализируют 100 метафаз от каждого животного. Учитывают число одиночных и парных фрагментов, хроматидных и хромосомных обменов, ахроматических пробелов (гепов) и разрывов по центромере, число клеток с множественными повреждениями и клеток с полной деструкцией хромосом. Оценку результатов цитогенетического анализа проводят путем сопоставления долей клеток с хромосомными аберрациями в контрольной и опытной группах;
- <a id="p100660"></a>регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет). Метод основан на регистрации различной подвижности ДНК и возможных фрагментов ДНК лизированных клеток, заключенных в агарозный гель, в постоянном электрическом поле. При этом ДНК мигрирует к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий "хвост кометы", параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК. Общая схема метода включает получение гель-слайдов (подложки), получение микропрепаратов, лизис, щелочную денатурацию, электрофорез, нейтрализацию/фиксацию, окрашивание и микроскопический анализ.
<a id="p100661"></a>Микроскопический анализ проводят на эпифлуоресцентном микроскопе с соответствующими для конкретного красителя фильтрами при увеличении 200х - 400х. На каждый микропрепарат анализируют не менее 100 "ДНК-комет". Анализ "ДНК-комет" может проводиться визуально или с помощью программно-аппаратного комплекса.
<a id="p100662"></a>7.7. Заключение о результатах медико-биологической оценки безопасности ГМО с комбинированными признаками оформляется в виде отчета в соответствии с требованиями Межгосударственного стандарта ГОСТ 7.32-2001.






## <a id="p100663"></a>Список литературы


1. <a id="p100664"></a>Меньшиков В.В. (Ред.) Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. 368 с.
2. <a id="p100665"></a>Мальцев Г.Ю., Васильев А.В. // Вопр. мед. химии. 1994. N 2. С. 56 - 58.
3. <a id="p100666"></a>Мальцев Г.Ю., Орлова Л.А. // Вопр. мед. химии. 1994. N 2. С. 59 - 61.
4. <a id="p100667"></a>Костюк В.А., Потапович А.И. // Вопр. мед. химии. 1987. N 3. С. 115 - 118.
5. <a id="p100668"></a>Дингл Дж. Лизосомы. Методы исследования. М.: Мир, 1980. 344 с.
6. <a id="p100669"></a>Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.
7. <a id="p100670"></a>Западнюк И.П. и др. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. 3-е изд. Киев: Вища школа, 1983. 383 с.
8. <a id="p100671"></a>Киселева А.Ф. и др. Морфофункциональные методы исследования в норме и при патологии. К.: Здоров'я, 1983. 163 с.
9. <a id="p100672"></a>Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб. пособие для биол. спец. вузов. 4-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк., 1990. 352 с.
10. <a id="p100673"></a>Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М.: Мир, 1982. 272 с.
11. <a id="p100674"></a>Луппа Х. Основы гистохимии. М.: Мир, 1980. 343 с.
12. <a id="p100675"></a>Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д.С Саркисова, Ю.Л. Перова М.: Медицина, 1996. 544 с.
13. <a id="p100676"></a>Ноздрачев А.Д., Поляков Е.Л. Анатомия крысы. С.-Пб.: Лань, 2001. 464 с.
14. <a id="p100677"></a>Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия. В 2-х т. М.: Медицина, 2000. 1944 с.
15. <a id="p100678"></a>Полак Д., Норден С.В. Введение в иммуноцитохимию: современные методы и проблемы. М.: Мир, 1987. 74 с.
16. <a id="p100679"></a>Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия. М.: Медицина, 1993. 688 с.
17. <a id="p100680"></a>Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. Миронова А.Н. Ч. 1. М.: Гриф и К, 2012. 944 с.
18. <a id="p100681"></a>Ведомости фармакологического комитета. 1999. N 1. С. 31 - 36.
19. <a id="p100682"></a>Гмошинский И.В., Кржечковская В.В., Пятницкий Н.Н. // Вопросы питания. 1994. N 1, 2. С. 30 - 33.
20. <a id="p100683"></a>Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Хабриева Р.У. 2-е изд., перераб. и доп. М.: ОАО "Издательство "Медицина", 2005. 832 с.
21. <a id="p100684"></a>Применение метода щелочного гель-электрофореза изолированных клеток для оценки генотоксических свойств природных и синтетических соединений: Методические рекомендации. М., 2006. 27 с.
22. <a id="p100685"></a>Weingard K., Brown G., Hall R. et al. // Fundamental and applied toxicology. 1996. Vol. 29. P. 198 - 201.
23. <a id="p100686"></a>Mills G.C. // J. Biol. Chem. 1959. Vol. 234. N 3. P. 502 - 506.
24. <a id="p100687"></a>Niashikimi M., Rao N., Jagi K. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. Vol. 46. P. 849 - 854.
25. <a id="p100688"></a>Oshino N., Chance B. // Arch. Biochem. Biophys. 1973. Vol. 154. N 1. P. 117 - 131.
26. <a id="p100689"></a>Tillotson J.A., Sauberlich H.E. // J. Nutrition. 1971. Vol. 101. P. 1459 - 1466.
27. <a id="p100690"></a>Ernster L., Nordenbrandt K. // In Methods in Enzymology. Oxidation and phosphorilation. Estabrook R.W., Pullman M.E., eds., Ac. Press N.Y. 1967. Vol. 10. P. 574 - 580.
28. <a id="p100691"></a>Michara, M., Uchiyama, M., Fukuzawa, K. 1980. // Biochem. Med. Vol. 23, Issue 3, P. 302 - 311.
29. <a id="p100692"></a>Burchell B., Weatherill P. // Methods Enzymol. 1981. Vol. 77. P. 169 - 176.
30. <a id="p100693"></a>Burke M.D., Mayer R.T. // Chem.-Biol. Interact. 1983. Vol. 45. P. 243 - 258.
31. <a id="p100694"></a>Habig W.H., Pabst M.J., Jacoby W.B. // J. Biol. Chem. 1974. Vol. 294. P. 7130 - 7139.
32. <a id="p100695"></a>Omura T., Sato R. // Biol. Chem. 1964. Vol. 239. P. 2370 - 2378.
33. <a id="p100696"></a>Umegaki K., Saito K., Kubota Y. et al. // Jpn. J. Pharmacol. 2002. Vol. 90. P. 345 - 351.
34. <a id="p100697"></a>FAO/WHO Protein quality evaluation. Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation Held in Bethesda, Md, USA, 4 - 8 December, 1989, FAO Rome. 2 p.
35. <a id="p100698"></a>Stokes C.R., Miller B.G., Bourne F.J. Animal models of food sensitivity. Food allergy and intolerance. London. 1987. P. 286 - 300.
36. <a id="p100699"></a>Weigle W., Cochrane C., Dixon F. // J. Immunology. 1960. Vol. 85. P. 469 - 477.



<a id="p100700"></a>

---