Методические указания по определению эллипса в почве, зерне зерновых культур методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "Методические указания по определению эллипса в почве, зерне зерновых культур методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии". 6273-91. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6273-91
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6273-91)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
29 июля 1991 г. № 6273-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭЛЛИПСА В ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика препарата
Действующее вещество — N-(O-хлорфенилсульфонил)-N'-(4-диметиламино-6-(а-метил)пропилидениминоокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевина.
Cl N(CH ) _____/ N_____/ 3 2 C H N O S. // \\_SO -NH-C-NH_// \\N 16 20 7 4
| \ ___ / 2 | \ ___ / CH |
|---|
O-N=C
\
C H
2 5
Синонимы: эллипс, хлорсульфоксилеметил.
Химически чистое вещество без запаха. Т. пл. = 173 °C. Препарат плохо растворим в воде, растворим в спирте, ацетоне.
Применяется в качестве регулятора роста растений и гербицида на зерновых культурах.
ПДК в воде — 0,005 мг/л, МДУ в пищевых продуктах не допускается (в зерне хлебных злаков), ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 0,25 мг/куб. м.
2. Методика определения эллипса в почве, в зерне зерновых культур методом тонкослойной и газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на определении эллипса в почве, зерне зерновых культур способом тонкослойной и газожидкостной хроматографии после экстракции препарата из проб и очистки экстракта.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество эллипса — 0,2 — 0,5 мкг.
Диапазон определяемых концентраций:
почва: ГЖХ — 0,004 — 0,04, ТСХ — 0,01 — 0,1;
зерно зерновых культур: ГЖХ — 0,005 — 0,05, ТСХ — 0,01 — 0,1.
Среднее значение определения 90,0 — 95,0%.
Суммарная погрешность определения — +/- 16 — 20%.
2.2. Реактивы и материалы
Эллипс (ВНИИХСЗР), 97-процентный препарат.
Натрия сульфат, хч, ГОСТ 4328-77.
Азот газообразный, ГОСТ 9283-74, в баллоне с редуктором.
Кислота хлористоводородная, хч, ГОСТ 3118-77, 1 н водный раствор (1:1).
Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ 6-09-1900-77.
О-толидин, 0,5-процентный раствор в ацетоне.
Азотнокислое серебро, чда, ГОСТ 1277-81.
Аммиак водный, чда, ГОСТ 3760-79.
Калия гидрат окиси, ГОСТ 9285-78.
Гидразин-гидрат, хч, ГОСТ 5832-65.
Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.
Серебро азотнокислое, ГОСТ 1277-81.
Кислота уксусная, хч, ГОСТ 18290-72, 5-процентный водный раствор.
Кислота лимонная, хч, ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.
Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-3719-83.
Кальций хлористый, хч, ГОСТ 4460-77.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
Пластинки «Силуфол» (Kavalier, ЧССР).
Диэтиловый эфир, хч, ГОСТ 6262-79.
2.3. Приборы, посуда
Лампа ртутно-кварцевая ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.
Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10396-75.
Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 50 — 100 мл.
Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.
Колбы конические плоскодонные, ГОСТ 25336-82.
Воронки химические, диаметр 5 — 6 см, ГОСТ 25336-82.
Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл, 1 л.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1, 5, 10 мл.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2 мл.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
Колба КГУ-2-1-100-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82.
Колба ОГ-2-100-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82.
Холодильник ХШ-1-200-14/23 ХС, ГОСТ 25336-82.
Воронка ВК-50 ХС, ГОСТ 25336-82 (с байпасом).
Трубка ТХ 45°-14/23, ГОСТ 25336-82.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.
Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Отбор и подготовка проб
Отбор проб проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР 21.08.79 № 2051-79.
2.4.2 Приготовление стандартного, рабочих растворов эллипса
Стандартный раствор эллипса с концентрацией 100 мкг/мл готовят растворением соответствующей навески препарата (10,3 г) в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Годен к употреблению в течение 30 дней.
Рабочие растворы эллипса с концентрацией 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартного раствора. Хранят рабочие растворы эллипса в холодильнике. Годен к употреблению в течение 3 — 5 дней.
2.4.3 Проявляющий реактив — бромфеноловый реагент
Смесь растворов бромфенолового синего (БМФ) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5% водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра. 2. 10 мл 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 — 5 дней.
После обработки хроматограмм бромфеноловым синим реагентом осветляют фон обработкой пластин 2-процентным водным раствором лимонной кислоты или 5-процентным водным раствором уксусной кислоты.
2.4.4 Проявляющий реактив — раствор о-толидина в ацетоне
Готовят 0,5% раствор о-толидина в ацетоне. После опрыскивания пластинки следует облучать УФ-светом.
2.4.5 Получение диазометана
В круглодонную двугорлую колбу вместимостью 100 мл, снабженную капельной воронкой с байпасом и обратным холодильником, помещают 12 г (0,2 моля) гидрата окиси калия, 6 мл или 6,1 г (0,12 моля) гидразингидрата и 6 мл или 5,3 г (0,17 моля) метанола. Затем, охлаждая колбу до +5 °C смесью воды со льдом, начинают медленно прибавлять из капельной воронки 10 мл или 14,9 г (0,12 моля) хлороформа, постепенно увеличивая скорость, при этом реакционная масса приобретает желтую окраску.
Выделяющийся в ходе реакции диазометан через обратный холодильник, соединенный с капилляром резиновым шлангом, поступает в двугорлую грушевидную колбу вместимостью 100 мл и растворяется в 50 мл осушенного диэтилового эфира. Предварительно эту колбу, заполненную диэтиловым эфиром, укрепляют в полиэтиленовом стакане с водой и помещают в морозильную камеру холодильника (Т. = -12 — 18 °C) на 6 — 8 часов.
По окончании прибавления хлороформа реакционную колбу нагревают до +40 °C на водяной бане для полного удаления диазометана из реакционной массы. Когда реакционная масса и поверхность холодильника обесцветятся, реакцию считают завершенной. Выход диазометана 25% от теоретического.
2.4.6 Подготовка пластин «Силуфол»
Пластинку «Силуфол» помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей ацетон — 25-процентный аммиак в соотношении 7:3 (об./об.). Глубина погружения в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят подготовленные пластинки в эксикаторе.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция и очистка
Зерно (30 — 50 г) предварительно измельчают на электрической мельнице. Почву (50 — 100 г) просеивают через сито. Помещают в коническую колбу, прибавляют ацетон или спирт и настаивают в течение 1 часа. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Остаток зерна (почвы) в колбе встряхивают дважды с 50 мл растворителя в течение 10 — 15 мин. В объединенные экстракты приливают 100 мл 1 н HCl, перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку и экстрагируют трижды хлороформом по 20 — 25 мл. Хлороформный экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха.
2.6.2 Хроматографирование
Метод тонкослойной хроматографии
Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона, закрывают колбу герметично пробкой, перемешивают содержимое и 0,2 мл полученного раствора наносят микропипеткой на подготовленную пластинку "Силуфол". Рядом с пробой наносят по 0,2 мл каждого рабочего раствора эллипса, что соответствует содержанию в пятне 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 мкг препарата. Пластинку помещают в хроматографическую камеру, куда за 10 - 15 мин. до
хроматографирования наливают подвижный растворитель: бензол:ацетон
(4:1) - 1 или гексан:ацетон (1:1) - 2 в таком количестве, чтобы глубина погружения пластинки в растворитель составила 0,5 см. После подъема фронта растворителя от линии старта на высоту 10 см хроматографирование прекращают. Пластинку выдерживают в вытяжном шкафу до испарения растворителей и обрабатывают бромфеноловым реагентом, затем раствором лимонной (или уксусной) кислоты. О наличии эллипса в пробе свидетельствует проявление на хроматограмме серо-синего пятна препарата. Или обрабатывают пластинку раствором о-толидина. Сразу же после опрыскивания пластинку облучают УФ-светом. О наличии эллипса в пробе свидельствует проявление на хроматограмме синего пятна препарата. Величины R эллипса равны при использовании подвижной фазы (1)
f
0,43, при использовании подвижной фазы (2) — 0,63.
Метод прямого газохроматографического определения
3 - 5 мкл ацетонового экстракта вводят в испаритель газового хроматографа "Цвет-106" с детектором постоянной скорости
рекомбинации (ДПР).
Проводят хроматографирование при следующих условиях:
Колонка стеклянная - 1000 x 3 мм. Твердый носитель - Хромосорб-750. Жидкая фаза - 5% OV-17.
Температура термостата колонки — 185 °C;
Газ-носитель — азот особой чистоты.
Скорость движения диаграммной ленты — 240 мм/час.
Скорость потока азота через колонку — 60 мл/мин.
Скорость потока азота через детектор — 150 мл/мин. -12
Рабочая шкала электрометра — 20 x 10 .
Время удерживания эллипса — 7 мин. 30 сек.
Метод газохроматографического определения с использованием диазометана
К сухому остатку в грушевидной колбочке приливают 5 мл эфирного раствора диазометана и выдерживают 30 минут. Затем эфир отгоняют на ротационном испарителе досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и 1 — 5 мкл вводят в испаритель газового хроматографа. Проводят хроматографирование при следующих условиях:
Колонка стеклянная - 1000 x 3 мм. Твердый носитель - Хромосорб-750. Жидкая фаза - 5% OV-17.
Температура термостата колонки — 175 °C;
Газ-носитель — азот особой чистоты.
Скорость движения диаграммной ленты — 240 мм/час.
Скорость потока азота через колонку — 60 мл/час.
Скорость потока азота через детектор — 150 мл/мин. -12
Рабочая шкала электрометра — 20 x 10 .
Время удерживания эллипса — 5 мин. 40 сек.
2.7. Обработка результатов анализа. Газохроматографический метод
Для количественного анализа измеряют площади пиков проб и стандартных растворов. Содержание эллипса в зерне пшеницы рассчитывают по формуле:
S x G x V x V
пр ст
S x V x P
ст a
X — содержание препарата «эллипс» в зерне, мг/кг;
G — содержание эллипса в стандартном растворе, нг;
S — площадь пика анализируемой пробы, кв. мм; пр
S — площадь пика стандартного раствора, кв. мм; ст
V — объем хроматографируемой пробы, мкл; a
Количественная оценка проводится путей сравнения площадей и интенсивности окраски пятен пробы и рабочих растворов.
Содержание эллипса в анализируемой пробе рассчитывают по следующей формуле:
A x V
X — содержание эллипса в исследуемой пробе, мг/кг;
A — количество эллипса, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;
V — объем аликвоты, отобранной для хроматографирования, мл. 1 При нанесении всей пробы V = V. 1
3. Требования безопасности
Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях. При работе с ядовитыми и взрывчатыми веществами реакции следует проводить только в вытяжном шкафу, строго соблюдая правила производственной санитарии и личной гигиены.