Временные методические указания по определению остаточных количеств 2-метил-4-диметиламинометилбензимидазол-5-ол-дигидрохлорида в воде, почве, зерне и зеленой массе кукурузы методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6264-91)
29 июля 1991 г. № 6264-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ 2-МЕТИЛ-4-ДИМЕТИЛАМИНОМЕТИЛБЕНЗИМИДАЗОЛ-5-ОЛ-ДИГИДРОХЛОРИДА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика препарата
Действующее вещество: 2-метил-4-диметиламинометилбензимидазол-5-ол-дигидрохлорид.
N(CH )
│ 3 2
CH N
| HO /\2 / |
|---|
\ // \ / /\
| N \ x 2HCl |
|---|
\\ / 3
\/
Эмпирическая формула C H № O. 11 15 3
Физико-химические свойства: белое кристаллическое вещество с Т пл. 221 — 226 °C.
Растворим в воде, этиловом спирте. Основание растворимо в хлороформе, этиловом спирте.
МДУ в продуктах питания — не допускается.
ОДУ в воде водоемов — 0,03 мг/куб. дм, ОДК в почве — 0,03 мг/кг.
Применяется в качестве регулятора роста растений в посевах кукурузы.
2. Методика определения амбиола в воде, почве, зерне и зеленой массе кукурузы тонкослойной хроматографией
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении амбиола из объектов смесью этилового спирта с аммиаком в соотношении 50:2, экстракции хлороформом из водного раствора коэкстрактивных веществ при pH <= 1, препарата — при pH >= 10 и определении хроматографией в тонком слое на пластинках «Силуфол» в подвижной фазе этиловый спирт: аммиак в соотношении 30:2 с обнаружением зон локализации обработкой 0,5-процентным водным раствором нитрита натрия.
2.1.2 Избирательность метода
Метод селективен. Определению не мешают хлорорганические и фосфорорганические пестициды.
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице.
| Значение метрологических характеристик | ||||
| вода | почва | зеленая масса | зерно кукурузы | |
| Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг, л | 0,002 — 0,2 | 0,003 — 0,8 | 0,02 — 0,8 | 0,008 — 0,8 |
| Предел обнаружения, мкг | 0,2 | 0,2 | 0,5 | 0,2 |
| Предел обнаружения, мг/кг, л | 0,002 | 0,008 | 0,02 | 0,008 |
| Среднее значение определения стандартных количеств, % | 73,0 | 74,0 | 84,0 | 81,0 |
| Число параллельных определений, n | 6 | 6 | 6 | 6 |
| Стандартное отклонение, % | 2,6 | 3,0 | 4,1 | 4,7 |
| Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 6, % | 73,0 +/- 3,9 | 74,0 +/- 4,5 | 84,0 +/- 6,2 | 81,0 +/- 7,0 |
2.2. Реактивы и растворы
Спирт этиловый технический, ГОСТ 18300-72, свежеперегнанный.
Хлороформ чда, ГОСТ 20015-74, свежеперегнанный.
Кислота соляная ч, ГОСТ 3118-77.
Натрий сернокислый безводный хч, ГОСТ 4166-76.
Натрий уксуснокислый 3-водный, ГОСТ 199-78.
Натрий азотистокислый хч, ГОСТ 4197-74.
Натрий хлористый чда, ГОСТ 4233-77.
Проявляющий реактив — 0,5-процентный водный раствор азотистокислого натрия.
Пластинки «Силуфол» производства фирмы «Хемапол», ЧССР размером 150 x 150 мм.
2.3. Приборы и посуда
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74, или аналогичные.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76, или аналогичный с набором колб.
Воронки делительные, ГОСТ 10054-82, вместимостью 300 мл.
Колбы плоскодонные, ГОСТ 9737-70, вместимостью 250 мл.
Колбы Эрленмейера, ГОСТ 9737-70, вместимостью 250 мл.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 25 мл.
Пипетки с делениями, ГОСТ 20292-74, вместимостью 10, 5, 1 мл.
Пробирки градуированные с пробками на шлифах, ГОСТ 1770-74Е.
Мельница лабораторная (кофемолка).
2.4. Отбор проб
Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными 21.08.1979 № 2051-79.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Подготовка хроматографической камеры
Хроматографические камеры за 1 час до начала хроматографирования заполняют подвижными фазами: первую — ацетоном, вторую, стенки которой обложены фильтровальной бумагой, — смесью этиловый спирт:аммиак в соотношении 30:2. Объем подвижной фазы в камере должен находиться на высоте не выше чем 0,7 — 1,0 см от уровня дна камеры.
2.5.2 Приготовление стандартных растворов
Стандартный раствор № 1 амбиола концентрации 1 мг/мл готовят растворением навески 0,0250 г в 25 мл этилового спирта в мерной колбе.
Стандартный раствор № 2 амбиола концентрации 0,1 мг/мл готовят разбавлением 5 мл стандартного раствора № 1 до 50 мл этиловым спиртом в мерной колбе.
2.6. Проведение определения
2.6.1 Экстракция и очистка экстракта
2.6.1.1. Вода. Пробу воды (100 мл), насыщенную хлористым натрием (30 г), помещают в делительную воронку, приливают 3 мл 1 № раствора соляной кислоты и экстрагируют трижды хлороформом порциями по 10 мл. Хлороформ отбрасывают. К водному слою приливают 5 мл водного аммиака и экстрагируют амбиол тремя порциями хлороформа по 50 мл. Хлороформные экстракты объединяют, промывают 10 мл воды, пропускают через слой безводного сернокислого натрия, помещенного на фильтровальную бумагу в коническую воронку. Фильтрат концентрируют на ротационном испарителе до объема 1 — 2 мл, затем в токе воздуха до объема 0,3 — 0,5 мл и всю пробу наносят на пластинку. Колбу обмывают двумя мл хлороформа, который концентрируют в токе воздуха до объема ~ 0,3 — 0,5 мл, и этот объем также наносят на пластинку в то же пятно.
2.6.1.2. Почва, зерно и зеленая масса кукурузы. Навеску пробы (25 г) экстрагируют трижды смесью этанол:аммиак в соотношении 50:2 мл на механическом встряхивателе в течение 30; 15; 15 мин. Экстракты фильтруют под вакуумом через бумажный фильтр в конической воронке, концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,5 — 1 мл, затем в токе воздуха до отсутствия запаха этилового спирта. К остатку приливают 20 мл дистиллированной воды, 3 мл 1 № раствора соляной кислоты и фильтруют через бумажный фильтр. Колбу и фильтр промывают 5 мл дистиллированной воды. К фильтрату приливают 1 мл этилового спирта и экстрагируют 5 раз хлороформом порциями по 5 мл. Хлороформный экстракт отбрасывают. К водному слою приливают 5 мл водного аммиака (pH не менее 10) и экстрагируют четырьмя порциями хлороформа по 20 мл.
Объединенный хлороформный экстракт промывают тремя порциями по 5 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, пропускают через слой безводного сернокислого натрия в конической воронке и концентрируют на ротационном испарителе до объема 1 мл, затем в токе воздуха до ~ 0,3 — 0,5 мл. Остаток с помощью капилляра наносят на пластинку. Колбу дважды обмывают 2 мл хлороформа, который после концентрирования в токе воздуха до 0,3 — 0,5 мл также наносят на пластинку.
2.6.2 Условия хроматографирования
На пластинки с нанесенными пробами на расстоянии 15 мм друг от друга наносят серию стандартных растворов амбиола, содержащих 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 и 20,0 мкг. Для этого в семь пробирок вносят 2; 5; 10 мл стандартного раствора № 2 и наносят в хлороформе, как описано для проб.
Хроматограмму развивают в системе N 1 до тех пор, пока фронт растворителя не поднимется на всю высоту 10 см. После развития в двух системах пластинку подсушивают при температуре 60 - 80 °C и обрабатывают проявляющим реактивом. Амбиол проявляется в виде желто-оранжевых пятен на светлом фоне с R 0,30 +/- 0,03. Окраски пятен и фона устойчивы.
f
2.7. Обработка результатов анализа
Количественное определение амбиола в анализируемой пробе проводят путем сравнения площадей и интенсивности пятен пробы и серии стандартов.
Содержание амбиола в пробе (X) в мг/кг или мг/л вычисляют по формуле [KL1]:
A
A — количество вещества, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
3. Требования безопасности
Соблюдать все необходимые требования безопасности работы в химических лабораториях, Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждениях системы Минздрава СССР, № 2455-81 от 20.10.1981, а также соблюдать правила безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и пестицидами.