Методические указания по определению диафентиурона (пегаса) в воде, почве, цитрусовых, семенах хлопчатника хроматографическими методами

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6255-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИАФЕНТИУРОНА (ПЕГАСА) В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЦИТРУСОВЫХ, СЕМЕНАХ ХЛОПЧАТНИКА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Диафентиурон (пегас CGA 106630) — препарат производства фирмы «СибаГейги», кристаллическое вещество белого цвета, хорошо растворим в ацетонитриле.

                  H C  CH
                   3     3

                 \/
                C-H
               /

     /\\  O  /\\  /  H C   CH
    /  \\/ \/  \\/ S  3      3

\ \ / М.м. 384,59.

    \  //   \  //\   C   C
     \//     \//  \ / \ / \
             │     N   N   CH

H C- 3	CH	H	3 H

         CH
           3

Рекомендован как несистемный инсектоакарицид. Легко разрушается под действием солнечного света. Рекомендуется хранить в закрытой таре при температуре не выше 5 °C.

2. Определение диафентиурона в воде, почве, цитрусовых, семенах хлопчатника методами газовой и тонкослойной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на определении диафентиурона газожидкостной и тонкослойной хроматографией после извлечения из анализируемой пробы органическим растворителем. Тонкослойная хроматография проводится в тонком слое силикагеля. Газохроматографическое определение проводится на макрокапиллярной колонке либо на набивной колонке в виде гептафторпроизводного.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций — 0,01 мг/л для воды; 0,03 мг/кг — для почвы, растений.

Анализируемый объект	Размах варьирования, %	Среднее значение определения, %	Относительное стандартное откл., %	Доверительный интервал среднего, % n = 5, P = 0,95
Вода Почва Лимоны Семена хлопчатника	85,7 — 90,5 80,1 — 85,3 77,1 — 86,0 75,0 — 85,0	87,5 82,6 84,3 80,7	+/- 4,2 +/- 5,7 +/- 5,8 +/- 5,9	+/- 4,6 +/- 7,9 +/- 7,8 +/- 8,0

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ, ч, ГОСТ 20015-74.

Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.

Оксид алюминия II ст. акт., ч, МРТУ 6-09-5296-68.

Приготовление стандартных растворов диафентиурона

Стандартный раствор, содержащий 1000 мкг/мл вещества, готовят растворением 50 г препарата в мерной колбе на 50 мл в ацетонитриле (ацетоне). Исходный основной раствор можно хранить в холодильнике в течение 2-х недель.

Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением исходного основного раствора. Рабочие растворы хранят не более 2-х суток (препарат разлагается на свету).

Получение фторпроизводного диафентиурона с концентрацией 1 мкг/мл: 10 мкл основного стандартного раствора, содержащего 10 мкг вещества, переносят в мерную пробирку, прибавляют 10 мкл гептафтормасляного ангидрида и оставляют на 1 час. По истечении этого времени избыток реагентов отдувают в токе сжатого воздуха. Сухой остаток разбавляют в 10 мл гексана.

К методу ГЖХ

Гептафтормасляный ангидрид, ч, ТУ 6-09-40-2571-87.

Азот газообразный, ГОСТ 9293-74.

Хроматон N-AW (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30.

К методу ТСХ

Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530-77.

Нитрат серебра, ГОСТ 1277-81.

Лимонная кислота, ГОСТ 908-79, 2-процентный раствор.

Пластинки «Силуфол» (Хемапол, ЧССР).

Проявляющий реактив: Раствор А: 100 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона.

Раствор Б: 1 г нитрата серебра растворяют в 40 мл воды и прибавляют 120 мл ацетона.

Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 200 мл и доводят ацетоном до метки.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф «Цвет-106» с ТИД и ДПР.

Стеклянная макрокапиллярная колонка с фазой SE-301 с толщиной пленки 2 мкм, диаметром 0,6 мм, длиной 55 м.

Колонка стеклянная 1000 x 3 мм с 5% SE-30.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1087-73.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2.833.106.

Посуда лабораторная по ГОСТ 1770-74, 25336-82, 20292-74.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за № 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1 Экстракция

Вода. 500 мл пробы помещают в делительную воронку и препарат экстрагируют трижды по 30 мл хлороформа. Отделяют органический слой, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 0,3 — 0,5 мл при температуре бани не выше 60 °C. Досуха удаляют остаток растворителя на воздухе. Далее проводят определение методами ГЖХ и ТСХ.

Почва, лимоны, семена хлопчатника. 10 г анализируемой пробы (лимоны и семена хлопчатника измельчают на электромельнице, почву просушивают и просеивают) помещают в колбу емкостью 500 мл и заливают 150 мл хлороформа. Встряхивают в течение 1,5 — 2 часов. Экстракцию повторяют трижды. Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе до 1 — 2 мл при температуре не выше 60 °C.

2.5.2 Очистка экстракта

Упаренный экстракт (1 — 2 мл) вносят в стеклянную колонку, заполненную 10 г оксида алюминия и 2 — 3 г безводного сульфата натрия, уплотненных и промытых ацетонитрилом. Элюируют пробу 200 мл ацетонитрила. Элюат концентрируют до объема 0,2 — 0,5 мл. Остаток в колбе растворяют в 50 мл гексана и переносят в делительную воронку. Прибавляют в делительную воронку 15 мл ацетонитрила, встряхивают, дают разделиться фазам. Отделяют ацетонитрил, а к гексану добавляют новые 15 мл ацетонитрила. Экстракцию повторяют трижды. Объединяют ацетонитрильную фракцию, концентрируют до объема ~ 0,1 мл. Полностью удаляют растворитель на воздухе. Далее проводят определение методами ГЖХ и ТСХ.

2.5.3 Определение методом ГЖХ

А. Условия хроматографирования при определении на макрокапиллярной колонке

Хроматограф «Цвет-106» с термоионным детектором.

Колонка макрокапиллярная с фазой SE-301, толщина пленки 2 мкм, диаметр 0,6 мм, длина 55 м.

Температура испарителя — 230 °C.

Температура колонки — 230 °C.

Расход газа-носителя — 30 мл/мин.

Время удерживания — 3,7 мин.

Минимально детектируемое количество — 20 нг.

Б. Условия хроматографирования при определении в виде фторпроизводного

Пробу после концентрирования переносят количественно 1 — 2 мл ацетонитрила в пробирку на шлифе. Удаляют растворитель с помощью сжатого воздуха полностью. К сухому остатку приливают 0,1 мл ацетонитрила и 10 мкл гептафтормасляного ангидрида, оставляют на 1 час на воздухе. Затем удаляют избыток реагента струей воздуха полностью. К сухому остатку приливают 1 мл гексана и аликвоту 3 — 5 мкл вводят в хроматограф.

Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвет-106» с детектором постоянной скорости рекомбинации.

Носитель — хроматон N-AW (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30.

Колонка стеклянная 1000 x 3 мм.

Скорость газа-носителя — 50 мл/мин. -12

Шкала электрометра — 20 x 10 А.

Температура колонки — 170 °C.

Температура испарителя — 240 °C.

Температура детектора — 240 °C.

Вводимый объем — 5 мкл.

Линейный диапазон детектирования — 2 - 10 нг.

2.6. Обработка результатов

Содержание диафентиурона в пробе вычисляют по формуле:

                          G   x h   x V
                           ст    пр    общ

X = ----------------,

                            h   x V  x P
                             ст    1

где:

X — содержание препарата в пробе, мг/кг, мг/л;

G — количество стандартного раствора, введенного в ст хроматограф, нг;

h — высота пика стандартного раствора, мм; ст

h — высота пика пегаса в исследуемой пробе, мм; пр

V — объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл; 1

V — общий объем пробы, мл; общ

P — навеска пробы, г (мл).

2.7. Определение методом ТСХ

    Пробу,   сконцентрированную   до   объема   0,1   -   0,2  мл,
количественно    наносят   на   пластинку   "Силуфол"   (пластинка
предварительно  промыта  в  ацетоне),  смывая  остаток  2 - 3 раза

хлороформом. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы пестицида, содержащие 2, 5, 10 мкг препарата. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую налита смесь гексан:хлороформ (1:2). После поднятия фронта растворителей на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько мин. на воздухе для испарения подвижного растворителя. После этого

пластинку  обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового
синего,  затем  обесцвечивают   2-процентным   раствором  лимонной
кислоты.  Диафентиурон  проявляется в виде пятен сине-бурого цвета
на желтом фоне с R  0,5 +/- 0,05.

              f

Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартного раствора.

Количество препарата в пробе определяют по формуле:

                             A

X = -, P

где:

X — содержание пегаса в пробе, мг/кг, мг/л;

A — количество пегаса, найденное в пробе, мкг;

2.8. Техника безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

---