--- title: "\"Методические указания по ускоренному определению севина в почве и растительном материале адсорбционной высокоэффективной жидкостной хроматографией\"" number: "6225-91" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6225-91" --- ## "Методические указания по ускоренному определению севина в почве и растительном материале адсорбционной высокоэффективной жидкостной хроматографией" # "Методические указания по ускоренному определению севина в почве и растительном материале адсорбционной высокоэффективной жидкостной хроматографией" (утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6225-91) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6225-91
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО УСКОРЕННОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ СЕВИНА В ПОЧВЕ И** **РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ АДСОРБЦИОННОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ** **ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ** Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. ## 1. Краткая характеристика препарата Карбарил (севин) - альфа-нафтил-N-метилкарбомат - инсектицид сильного контактного и частично кишечного действия. Рекомендуется для опрыскивания кукурузы, хлопчатника, яблони, картофеля. OCONHCH 3 //\ /\\ // \/ \\ \\ /\ // \\/ \// Эмпирическая формула C H O N. Молекулярная масса 201,14. Это 12 11 2 белое кристаллическое вещество с Т. пл. 142 °C, плохо растворим в воде, хорошо - в большинстве органических растворителей. Выпускается в форме 85% смачивающегося порошка. Среднетоксичен. ЛД для крыс - 721, для мышей - 275 мг/кг. 50 Очень опасен для пчел и полезных насекомых. Стойкий препарат. В почве сохраняется в течение года. Остатки в сельскохозяйственной продукции не допускаются. ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Методика основана на извлечении карбарила из пробы органическим растворителем, очистке и концентрировании экстракта, селективном определении карбарила методом ВЭЖХ на неподвижной фазе "Силасорб 600" в потоке элюента н-гексан - ацетон в объемном соотношении 3:1 при 222 нм. ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода Линейный диапазон измерения 5 - 100 нг. Нижний предел определения севина в почве и растительном материале - 0,005 и 0,0125 мг/кг. Среднее значение определения 85,95%. Объем удерживания севина - 415 мкл. Методика обеспечивает селективный количественный анализ препарата в присутствии глобальных загрязнителей окружающей среды, таких как ДДТ, ГХЦГ, 2,4-Д и другие ХОС, их метаболитов (полихлорированные фенолы и бензолы), азот- и фосфорорганических пестицидов, хроматографические зоны которых расположены до выходного сигнала карбарила. ### 2.2. Реактивы и растворы Азот (особой чистоты), ГОСТ 9293-74. Аммоний хлорид, хч, [ГОСТ 3765-78](https://bukva.ai/docs/gost-3765-78). Ацетон, ч, ГОСТ 2603-79. н-Гексан, ч, ГОСТ 6-09-3375-78. Спирт метиловый, хч, [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77). Натрия сульфат, безводный, хч, ГОСТ 1277-81. Натрия хлорид, хч, ГОСТ 4233-77. Силасорб 600, 5 мкм (ЧССР). Фильтры ФПП-ХА или АФА-ХА-20. Эфир петролейный, ч, ГОСТ 11992-77. 2-процентный раствор аммония хлорида (2 г аммония хлорида растворяют в 98 мл дистиллированной воды). Стандартный раствор карбарила в н-гексане с массовой долей 10 мкг/мл. Раствор элюента н-гексан - ацетон в объемном соотношении 3:1. ### 2.3. Приборы, посуда, материалы Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с, ТУ 64-1-2451-78. Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 24104-80. Весы технические ВЛТК-500, ГОСТ 24104-80. Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76. Испаритель ротационный типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76. Установка компрессорная, ТУ 64-12986-78. Хроматограф жидкостный микроколоночный серии "Милихром" со спектрофотометрическим детектором. Фильтродержатели. Электроаспиратор ЭА-30. Воронки делительные, ГОСТ 25336-82. Колбы конические на 50, 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82. Колбы грушевидные на шлифе, ГОСТ 25336-82. Колбы мерные на 50, 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Микропипетки на 0,1 мл, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Пипетки мерные на 1; 5; 10 мл, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Пробирки мерные на шлифе, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Цилиндры мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). ### 2.3. Отбор, хранение и подготовка проб к анализу Отбор, хранение и подготовка проб к анализу проводятся в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов внешней среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР за N 2051-79 от 21.08.1979. ### 2.4. Проведение определения ##### 2.4.1 Экстракция препарата из анализируемой пробы Навеску среднего образца воздушно-сухой пробы почвы, измельченной и просеянной через сито с диаметром отверстий 1 меш, массой 50 г или средней измельченной пробы растительного материала массой 20 г, взятую на технических весах, помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, туда же проливают 100 мл н-гексана. Колбу закрывают пробкой и помещают на аппарат для встряхивания на 1 ч, затем гексановый экстракт сливают через воронку с безводным сульфатом натрия в колбу для упаривания. К пробе приливают еще 50 мл н-гексана и экстракцию повторяют в течение 15 мин. Гексановый экстракт присоединяют к первой порции. Объединенный гексановый раствор пробы упаривают на ротационном испарителе при 50 - 60 °C досуха. Сухой остаток растворяют в 10 мл метанола, добавляют 10 мл 2-процентного водного раствора хлорида аммония. Содержимое колбы перемешивают и помещают в морозильную камеру на 25 - 30 мин. После вымораживания пробы к ней добавляют 10 мл петролейного эфира и 3 г хлорида натрия. Содержимое колбы взбалтывают в течение 2 мин. и переносят в делительную воронку на 150 мл. Очистку водно-метанольного раствора пробы петролейным эфиром повторяют еще 2 раза, беря по 10 мл растворителя. Из водно-метанольного раствора карбарил трижды извлекают н-гексаном, беря по 10 мл. Объединенный гексановый экстракт высушивают безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе при 50 - 60 °C до 2 мл. Остаток пробы переносят в мерную пробирку и концентрируют до 0,5 мл в токе азота (особой чистоты). После окончания подготовки проб и их концентрирования приступают к хроматографическому определению карбарила методом ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием. ##### 2.4.2 Хроматографическое определение методом адсорбционной ВЭЖХ Сухой остаток пробы растворяют в 0,5 мл н-гексана. Из полученного раствора отбирают 0,5 - 10 мкл анализируемой пробы и вводят в жидкостный микроколоночный хроматограф со спектрофотометрическим детектором (хроматограф типа "Милихром") и измеряют массовую долю севина в исследуемых пробах при следующих условиях режима хроматографического анализа: неподвижная фаза - "Силасорб 600", 5 мкм, подвижная фаза - смесь н-гексан - ацетон в объемном соотношении 3:1, скорость элюирующего потока 200 мкл/мин.; длина волны поглощения светового потока 222 нм, поддиапазон чувствительности 1,6 А, время измерения выходных сигналов 0,6 с; скорость движения диаграммной ленты 720 мм/ч. При этих условиях анализа объем удерживания карбарила составляет 415 мкл. Для идентификации выходных сигналов севина в пробах и расчета концентраций препарата в них проводится градуировка стандартным раствором с массовой долей севина в н-гексане 10 мкг/мл. В хроматограф вводят 0,5; 1; 3; 5; 7 и 10 мкл раствора, количественное содержание препарата в котором соответствует 5; 10; 30; 50; 70; 100 нг. Между высотой выходных сигналов и массовой долей севина в стандартном гексановом растворе сохраняется прямолинейная зависимость во всем диапазоне измеряемых концентраций. ### 2.5. Обработка результатов Расчет содержания севина в пробах проводят по формуле: A x h x V 2 X (мг/кг) = -----------, h x V x P 1 1 где: A - концентрация стандарта севина, введенная в хроматограф, нг; h - высота выходного сигнала стандарта, мм; 1 h - высота выходного сигнала пробы, мм; 2 V - объем раствора пробы, используемого для анализа, мл; V - объем пробы, введенный в хроматограф, мкл; 1
P - навеска пробы, используемой для анализа, г.
## 3. Требования безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с токсическими веществами, органическими растворителями, кислотами и щелочами, а также электрооборудованием. ---