---
title: "\"Методические указания по определению эфаля в биосубстратах методом газожидкостной хроматографии\""
number: "6215-91"
issuer: "Министерство здравоохранения СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6215-91"
---

## "Методические указания по определению эфаля в биосубстратах методом газожидкостной хроматографии"

# "Методические указания по определению эфаля в биосубстратах методом газожидкостной хроматографии"

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6215-91)


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждены<br>
Министерством здравоохранения СССР

</div>

<div align="center">

29 июля 1991 г. N 6215-91

</div>


<a id="p100002"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭФАЛЯ В БИОСУБСТРАТАХ**
**МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**


> <a id="p100003"></a>*(Дополнение к Методическим [указаниям](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6132-91) N 6132-91)*


<a id="p100004"></a>Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
<a id="p100005"></a>Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.


## 1. <a id="p100006"></a>Краткая характеристика препарата


<a id="p100007"></a>Эфаль - смесевой препарат:
<a id="p100008"></a>(1) трис-O-(этилортофосфит)алюминия (аналог альетта):

           O

| C H AlO P . |
| --- |

    (C H O-PO-) Al.                            6 18   9 3

| 2 5 | 3 |
| --- | --- |

<a id="p100010"></a>           H                                  М.м. 354,0.

<a id="p100011"></a>    (2) фосфит алюминия:
<a id="p100012"></a>    AlPO .                                    М.м. 106,0.
        3
<a id="p100013"></a>    (3) фосфористая кислота:
<a id="p100014"></a>    H PO .                                    М.м. 82,02.
     3  3
<a id="p100015"></a>Эфаль - 66,6% к.э. - вязкая прозрачная жидкость, хорошо растворимая в воде. Компоненты препарата I, III в воде растворимы, II - труднорастворимы; в органических растворителях практически не растворимы.
<a id="p100016"></a>МДУ эфаля в огурцах - 0,5 мг/кг, винограде - 0,8 мг/кг, в воде - 0,3 мг/л.


## 2. <a id="p100017"></a>Методика определения эфаля в биосубстратах методом газожидкостной хроматографии



### <a id="p100018"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100019"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100020"></a>Метод основан на извлечении эфаля из исследуемого объекта водой, концентрировании и последующем определении методом реакционной газожидкостной хроматографии в виде метилпроизводных.

##### <a id="p100021"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100022"></a>Минимально детектируемое количество в хроматографируемом объеме:
<a id="p100023"></a>    этилфосфита алюминия     0,1 нг;
<a id="p100024"></a>    фосфористой кислоты      0,1 нг.
<a id="p100025"></a>Среднее значение определения в различных органах и тканях (селезенка, почки, сердце, мозг, сальник, печень <*>) при n = 10, %, - 79.

<a id="p100026"></a>

---

<a id="p100027"></a><*> Печень составляет исключение, полнота извлечения из печени не превышала 15% от заданного количества. Будут проведены дополнительные исследования.

<a id="p100028"></a>Размах варьирования (селезенка, почки, сердце, мозг, сальник), %, - 63 - 90.
<a id="p100029"></a>Стандартное отклонение +/- 12,7%.
<a id="p100030"></a>Доверительный интервал среднего при P = 0,95; n = 10 - 9,1%.

##### <a id="p100031"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100032"></a>Условия экстракции и последующего газохроматографического определения эфаля (этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты) позволяют избирательно определять препарат в присутствии фосфорорганических и пестицидов других групп.


### <a id="p100033"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100034"></a>Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.
<a id="p100035"></a>Метилгликоль (метилцеллозоль), чда, МРТУ 6-09-6347-69.
<a id="p100036"></a>Гидразингидрат, чда.
<a id="p100037"></a>Кали едкое, ч, [ГОСТ 24363-80](https://bukva.ai/docs/gost-24363-80).
<a id="p100038"></a>Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.
<a id="p100039"></a>Кислота уксусная (ледяная), хч, [ГОСТ 18270-81](https://bukva.ai/docs/gost-18270-72).
<a id="p100040"></a>Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77, 20-процентный раствор.
<a id="p100041"></a>Метиловый спирт, хч, [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77).
<a id="p100042"></a>Диэтиловой эфир, хч, ГОСТ [6262-79](https://bukva.ai/docs/gost-6262-79).
<a id="p100043"></a>Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
<a id="p100044"></a>Водород в баллоне, ГОСТ 3022-88.
<a id="p100045"></a>Неподвижная фаза 15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм).
<a id="p100046"></a>Этилфосфит алюминия, хч.
<a id="p100047"></a>Фосфористая кислота, хч.
<a id="p100048"></a>Основные стандартные растворы (ОСР) этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты с концентрацией по 100 мкг/мл готовят взятием навески каждого вещества 10 мг (0,0100 г) хч и растворением в дистиллированной воде в мерных колбах емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике не более 10 дней.
<a id="p100049"></a>Рабочие стандартные растворы с содержанием 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл готовят разбавлением ОСР водой. Хранить не более 2 дней.


### <a id="p100050"></a>2.3. Приборы, аппаратура и посуда


<a id="p100051"></a>Газовый хроматограф серии "Цвет" или аналогичный с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).
<a id="p100052"></a>Колонка стеклянная, длина 2 м, диаметр 3,5 мм.
<a id="p100053"></a>Микроизмельчитель тканей, тип РТ-2, ТУ 64-1-1305-79.
<a id="p100054"></a>Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
<a id="p100055"></a>Колбы грушевидные (круглодонные), ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 мл, 100 мл, 50 мл ОКШ 500-29/50-14.
<a id="p100056"></a>Колбы мерные на шлифах, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), вместимостью 5 мл.
<a id="p100057"></a>Пипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74), на 0,1; 0,2; 1; 5; 10 мл.
<a id="p100058"></a>Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ SE-2.833-024.
<a id="p100059"></a>Прибор для получения диазометана (рис. 1 - не приводится):
- <a id="p100060"></a>колба круглодонная трехгорлая, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);
- <a id="p100061"></a>холодильник Либиха на шлифах;
- <a id="p100062"></a>делительная воронка на шлифе (капельница);
- <a id="p100063"></a>П-образный переходник на шлифах;
- <a id="p100064"></a>капилляр.


### <a id="p100065"></a>2.4. Подготовка к определению



##### <a id="p100066"></a>2.4.1 Подготовка колонки для ГЖХ

<a id="p100067"></a>Колонку заполняют стандартной фазой (15% Карбовакс 20 М на Хроматоне N-AW-DMCS), подключив ее к вакууму водоструйного насоса. Заполненную колонку кондиционируют в термостате колонок в течение 6 часов без подключения к детектору, продувая азотом (20 - 24 мл/мин.) и постепенно поднимая температуру от 100° до 150°. Затем колонку присоединяют к детектору.


### <a id="p100068"></a>2.5. Описание определения



##### <a id="p100069"></a>2.5.1 Экстракция

<a id="p100070"></a>    2  г образца гомогенизируют в микроизмельчителе тканей с 30 мл
дистиллированной  воды,  дают  отстояться и отфильтровывают водную
фазу через складчатый фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют
2  x  10  мл воды. Объединенные водные экстракты переносят в колбу
для  отгонки  и  конденсируют до ~ 2 мл под вакуумом водоструйного
насоса  при  температуре бани не более 45 °C. Измеряют точно объем
сконцентрированной пробы (V ), отбирают 0,2 мл, переносят в мерную
                           1
пробирку    и    доводят    до    2    мл   смесью   растворителей
метилгликоль - ацетонитрил  (1:1). Полученную  смесь  переносят  в
центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение
15  минут,  после чего отбирают для дальнейшего метилирования 1 мл
центрифугата;  либо  фильтруют  через  небольшой  бумажный  фильтр
"красная  лента"  и  также  отбирают  для метилирования точно 1 мл
смеси,  что соответствует аликвоте 0,1 мл (V ) сконцентрированного
                                            2
(V ) экстракта.
  1

##### <a id="p100071"></a>2.5.2 Получение метилпроизводных эфаля (этилфосфита алюминия

и фосфористой кислоты)
<a id="p100072"></a>    Подготовленные    аликвоты    экстрактов    (V )    метилируют
                                                  2
диазометаном.   Одновременно   метилируют   стандартные   растворы
этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты. Для этого берут 0,1 мл
рабочих стандартных растворов (10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл) и по
0,9  мл смеси растворителей метилгликоль - ацетонитрил (1:1), т.е.
подготовленные       к       метилированию      и      дальнейшему
газохроматографическому  анализу  стандарты содержат 1 мкг/мл, 0,5
мкг/мл, 0,2 мкг/мл этилфосфита алюминия или фосфористой кислоты.

###### <a id="p100073"></a>2.5.2.1 Получение диазометана

<a id="p100074"></a>Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.
<a id="p100075"></a>В реакционную колбу (см. рис. 1) помещают 6 г кали едкого, 3 мл метанола и 3 мл гидразингидрата. Через смесь продувают азот с расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 капля за 1 - 2 с.
<a id="p100076"></a>2.5.2.2. В подготовленные пробы и стандарты вводят по 5 - 6 мкл ледяной уксусной и 3 - 5 мкл 20-процентной серной кислоты и продувают получаемый в описанном выше приборе диазометан до появления интенсивной желтой окраски раствора пробы или стандарта. Затем немедленно нейтрализуют избыток диазометана в пробе (стандарте) прибавлением нескольких микролитров уксусной кислоты до исчезновения окраски. Пробы и стандарты готовы к газохроматографическому определению.
<a id="p100077"></a>После окончания метилирования прекращают подачу в реакционную колбу хлороформа, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.

##### <a id="p100078"></a>2.5.3 Хроматографический анализ

<a id="p100079"></a>Газовый хроматограф серии "Цвет" с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).
<a id="p100080"></a>Колонка хроматографическая стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3,5 мм.
<a id="p100081"></a>Неподвижная фаза 15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS.
<a id="p100082"></a>Температура колонки 145 °C.
<a id="p100083"></a>Температура испарителя 180 °C.
<a id="p100084"></a>Газ-носитель - азот с расходом 50 мл/мин.
<a id="p100085"></a>Расход водорода 65 мл/мин.
<a id="p100086"></a>Вводимый объем 1 - 3 мкл.
                               -9
<a id="p100087"></a>    Шкала множителя 2 x 64 x 10  .
<a id="p100088"></a>Скорость диаграммной ленты 240 мм/час.
<a id="p100089"></a>Время удерживания:
<a id="p100090"></a>диметилфосфоната (метилирование фосфористой кислоты): 2,1 мин;
<a id="p100091"></a>метилэтилфосфоната (метилирование этилфосфита алюминия): 2,6 мин.
<a id="p100092"></a>Пределы определения:
<a id="p100093"></a>    диметилфосфоната     - 0,1 нг;
<a id="p100094"></a>    метилэтилфосфоната   - 0,1 нг.
<a id="p100095"></a>Количественную оценку проводят методом соотношения со стандартом этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты.
<a id="p100096"></a>Расчет результатов анализа проводят по формуле:

                          C x H  x V  x V
                               2    3    1
<a id="p100097"></a>                      X = ----------------,
                          H  x V  x V  x P
                           1    2    4

<a id="p100098"></a>    где:
<a id="p100099"></a>    X  -  содержание  этилфосфита алюминия (фосфористой кислоты) в
анализируемой пробе, мг/кг;
<a id="p100100"></a>    C  -  концентрация  стандартного раствора для ГЖХ, вводимого в
хроматограф, мкг/мл;
<a id="p100101"></a>    H  - высота пика стандартного раствора, мм;
     1
<a id="p100102"></a>    H  - высота пика пробы, мм;
     2
<a id="p100103"></a>    V  - конечный объем сконцентрированного экстракта пробы, мл;
     1
<a id="p100104"></a>    V  - часть экстракта V , взятая для метилирования, мл;
     2                    1
<a id="p100105"></a>    V   -  объем  стандартного раствора, введенного в хроматограф,
     3
мкл;
<a id="p100106"></a>    V  - объем пробы, введенной в хроматограф;
     4

<div align="center">

<a id="p100107"></a>    P - масса анализируемой пробы, г.

</div>



## 3. <a id="p100108"></a>Техника безопасности


<a id="p100109"></a>Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также [Правила](https://bukva.ai/docs/pravila-2455-81) устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, N 2455-81 от 20.10.81.
<a id="p100110"></a>Особое внимание обратить при работе с гидразингидратом и диазометаном. Соблюдать требования безопасности, описанные в методике. Гидразингидрат - токсичная, пожароопасная жидкость (температура воспламенения 59°, самовоспламенения 267°). При попадании гидразингидрата на окружающие предметы, руки, одежду его немедленно смывают большим количеством воды.



<a id="p100111"></a>

---