Методические указания по определению остаточных количеств диметоморфа в клубнях картофеля, огурцах и почве жидкостной хроматографией

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6214-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИМЕТОМОРФА В КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ, ОГУРЦАХ И ПОЧВЕ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Диметоморф (акробат) — экспериментальный фунгицид, предназначенный для борьбы с фитофторой.

    CH O       OCH
      3           3

    \_____/

        //   \\
        \ ___ /    O    __

               C=CH-C-N    O
         _____/        \__/
        //   \\

    \ ___ /

  Cl

Химическое название — (E,Z)-3-/3-(4-хлорофенил)-3-(3,4- диметоксифенил)акрилоил/морфолин.

    Эмпирическая формула: C  H  ClNO .
                           21 22    4

Молекулярная масса — 287,9.

Препараты: ЦМЕ 151 поставляется в виде смачивающегося порошка 500 г/кг для бакового смешения с контактными фунгицидами или в качестве готового порошка, который уже включает манкоцеб 90/600 г/кг.

Физические свойства: бесцветное твердое кристаллическое вещество, без запаха, реакции изомеризации происходят в различных растворителях под влиянием света.

Температура плавления — 127 — 148 °C.

Растворимость: легко растворим в дихлорметане, растворим в ацетоне, ацетонитриле и метаноле; плохо растворим в гексане — 0,112 г/л и воде — 0,050 г/л.

Стабильность: хорошая термальная и гидролитическая стабильность. -5

    Давление паров - E,-форма 10   Па при 20 °C.
    Препарат малотоксичен. ЛД   для мышей составляет 3700 мг/кг, а

                         50

для крыс 3900 мг/кг, не оказывает кожно-раздражающего действия.

2. Методика определения диметоморфа

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на извлечении диметоморфа ацетоном, очистке переэкстракцией в дихлорметан. Количественное определение производится с помощью жидкостного хроматографа (УФ-детектор).

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

    Минимальное детектируемое количество            1 нг
    Предел обнаружения                              0,01 мг/кг
    P - размах варьирования                         75 - 87%
    C - среднее значение определения                82%
    S - стандартное отклонение                      +/- 5,0%

Доверительный интервал среднего при альфа = 0,95 и n = 5 82,0 +/- 14,0%

Мешающих анализу пестицидов не выявлено.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Ацетонитрил, хч, ТУ 6-09-3534-87.

Дихлорметан, хч, ТУ 6-09-3435-86.

Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77.

Натрий сернокислый, безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

2.3. Приборы и посуда

Хроматограф жидкостный со спектрофотометрическим детектором марки «Милихром».

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на шлифе, ГОСТ 9737-70.

Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на шлифе, ГОСТ 9737-70.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82.

Аппарат для встряхивания проб любого типа.

Испаритель ротационный вакуумный любого типа.

Весы технические лабораторные ВЛКТ-500.

Весы аналитические ВЛР-200, ГОСТ 19491-74.

Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

2.4.1 Отбор и подготовка проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79, № 2051-79.

2.5.1 Экстракция

25 г измельченного материала — картофель, огурцы, почва — помещают в коническую колбу и заливают 100 мл охлажденного ацетона (t ~ 10 — 15 °C). Пробу встряхивают 15 мин. на аппарате для встряхивания. Ацетоновый экстракт фильтруют. Экстракцию повторяют с 80 мл ацетона, остаток промывают 20 мл ацетона. Экстракты объединяют и упаривают на ИР до отсутствия запаха ацетона.

2.5.2 Очистка экстракта

1. К сконцентрированному остатку приливают 100 мл воды, 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и 25 мл дихлорметана (или свежеперегнанного хлороформа). Смесь встряхивают в течение 5 мин. и переносят в делительную воронку. Нижнюю фазу (дихлорметан) фильтруют через 30 г безводного сернокислого натрия. Водную фазу экстрагируют еще дважды в течение 5 мин. 25 мл дихлорметана. Экстракты дихлорметана фильтруют через безводный сернокислый натрий, который затем промывают 15 мл дихлорметана. Фильтраты собирают в круглодонную колбу и концентрируют до сухого состояния на ротационном испарителе.

Иногда очистки перераспределением диметоморфа в дихлорметан оказывается недостаточно. В этом случае дополнительно выполняется следующая очистка.

2. К сухому остатку добавляется 20 мл воды, 30 мл ацетонитрила и 30 мл гексана. Смесь встряхивают в течение 5 мин., затем переносят в делительную воронку. Гексан — верхняя фаза — отбрасывают, водный остаток экстрагируют еще 2 раза в течение 5 мин. 30 мл гексана. Гексан удаляют, а нижнюю фазу экстрагируют 2 раза 25 мл дихлорметана. Фазы дихлорметана фильтруют через 20 г сульфата натрия. Сульфат натрия промывают 10 мл дихлорметана. Из полученного экстракта с помощью ротационного вакуумного испарителя полностью отгоняют растворитель.

2.6. Определение диметоморфа жидкостной хроматографией

Сухой остаток по п. 1 и п. 2 (2.5.2) растворяют в 2 — 4 мл ацетонитрила или дихлорметана в зависимости от используемой колонки.

Измерения выполняются при следующих условиях:

Колонка: 1) Силасорб 600, 5,0 мкм размер, мм, — 64 x 2

                           2) <a id="p100060"></a>Диасорб-130 - фенил/Т, 10 мкм
                           размер, мм, - 120 x 2

Подвижная фаза: 1) гексан:изопропанол:дихлорметан (35:20:5) (по объему)

    (элюент)                   2) ацетонитрил:вода - 60:40 (по объему)
    Скорость элюента:          100 мкл/мин.
    Длина волны:               240 нм
    Объем вводимой пробы:      5 мкл

Диапазон чувствительности: 0,2 — 0,4

Объем удерживания: 1) 264 — 266 мкл

                           2) <a id="p100068"></a>376 - 378 мкл

2.7. Обработка результатов анализа

Содержание пестицида в анализируемой пробе определяется методом соотношения пиков стандартов и анализируемых проб.

Количество диметоморфа рассчитывается по формуле:

                          H  x V  x C x V
                           2    1        3

X = ----------------,

                            H  x V  x P
                             1    2

где:

X — количество препарата в пробе, мг/кг;

C — количество препарата в стандартном растворе, введенном в хроматограф, мкг/мл;

H — высота пика стандарта, мм; 1

H — высота пика пробы, мм; 2

V — объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, 1 мкл;

V — объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, 2 мкл;

V — объем анализируемой пробы, мл; 3

P — навеска пробы, г.

Минимально детектируемая концентрация диметоморфа в анализируемой пробе 0,2 мкг/мл. Линейный диапазон детектирования 0,2 мкг/мл — 4 мкг/мл.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила предосторожности при работе с токсичными, взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.

---