---
title: "\"Временные методические указания по определению остаточных количеств титуса в зеленой массе и зерне кукурузы высокоэффективной жидкостной хроматографией\""
number: "6193-91"
issuer: "Министерство здравоохранения СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6193-91"
---

## "Временные методические указания по определению остаточных количеств титуса в зеленой массе и зерне кукурузы высокоэффективной жидкостной хроматографией"

# "Временные методические указания по определению остаточных количеств титуса в зеленой массе и зерне кукурузы высокоэффективной жидкостной хроматографией"

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6193-91)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждены<br>
Министерством здравоохранения СССР

</div>

<div align="center">

29 июля 1991 г. N 6193-91

</div>


<a id="p100002"></a>**ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТИТУСА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ**
**И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ**

<a id="p100003"></a>Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
<a id="p100004"></a>Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.


## 1. <a id="p100005"></a>Краткое описание препарата


<a id="p100006"></a>Химическое название: 1-(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-3-[(3-этилсульфонилпиридин-2-ил)сульфонил]мочевина.

                                OCH
      ___N                 N___/   3
    //   \\───SO NH-C-NH──//   \\
    \ ___ /     2   \\    \ ___ /
      ─── \          O    N ─── \
           SO C H                OCH
             2 2 5                  3

<a id="p100007"></a>    Общепринятые названия: титус, ДРХ-Е9636.
<a id="p100008"></a>    Эмпирическая формула: C  H  N O S .
                           14 17 5 7 2
<a id="p100009"></a>Молекулярная масса: 431,4.
<a id="p100010"></a>Химически чистый титус представляет собой белое кристаллическое вещество с температурой плавления 176 - 178 °C. В виде сухой пленки на стекле и в растворе в ацетонитриле относительно устойчив; в кислой (pH < 3) и щелочной среде (pH > 9) быстро гидролизуется. Период полураспада в водной среде при pH 5 - 4,6 дня; pH 7 - 7,2 дня; pH 9 - 0,3 дня, в почве - от 1,7 до 4,3 дня.
<a id="p100011"></a>Хорошо растворим в ацетонитриле, метиленхлориде и хлороформе. Растворимость в дистиллированной воде: при 25 °C < 10 мг/л, в буферном растворе при pH 7 - 7,3 г/л.
<a id="p100012"></a>    Титус  малотоксичен для человека и теплокровных животных (СД
                                                                50
для   крыс  >  5000  мг/кг), не  обладает  побочными  токсическими
эффектами,  может  вызвать  слабое  раздражение слизистой оболочки
глаз.
<a id="p100013"></a>Титус - новый повсходовый гербицид, эффективный в борьбе со злаковыми однолетними и многолетними сорняками в посевах кукурузы и посадках картофеля. Зарегистрирован в России как средство борьбы со злаковыми сорняками, особенно гумаем ползучим, в посевах кукурузы в виде 75-процентной сухой текучей суспензии с нормой расхода 40 - 50 г/га.


## 2. <a id="p100014"></a>Методика определения титуса в зеленой массе и зерне кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии



### <a id="p100015"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100016"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100017"></a>Методика основана на определении остатков титуса с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием фотокондуктивного детектора и колонки с силикагелем. Определение проводят после экстракции гербицида буферной смесью и реэкстракции метиленхлоридом.
<a id="p100018"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

##### <a id="p100019"></a>2.1.2 Избирательность метода

<a id="p100020"></a>В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании кукурузы: 2,4-Д, симазин, атразин, эрадикан.

##### <a id="p100021"></a>2.1.3 Метрологическая характеристика метода


<a id="p100022"></a>Таблица 1


<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="5%"><col width="10%"><col width="18%"><col width="16%"><col width="18%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td rowspan="2">n</td><td colspan="5">Метрологические параметры, P = 0,95</td></tr>
<tr><td>предел обнаружения, мг/кг</td><td>диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>среднее значение определения, %</td><td>стандартное отклонение S, %</td><td>доверительный интервал среднего результата, %</td></tr>
<tr><td>Зеленая масса растений Зерно кукурузы</td><td>15 15</td><td>0,05 0,05</td><td>0,05 - 1,0 0,05 - 1,0</td><td>89,0 86,5</td><td>7,48 6,40</td><td>+/- 4,1 +/- 3,5</td></tr>
</table>



### <a id="p100026"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100027"></a>Титус с содержанием действующего вещества 99,5% фирмы Дюпон.
<a id="p100028"></a>Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-82.
<a id="p100029"></a>Вода бидистиллят, ГОСТ 7602-72.
<a id="p100030"></a>Калий фосфорнокислый двузамещенный.
<a id="p100031"></a>Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75.
<a id="p100032"></a>Кислота ортофосфорная, ГОСТ 6552-80.
<a id="p100033"></a>Метилен хлористый для хроматографии, [ГОСТ 12794-80](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80).
<a id="p100034"></a>Натрий сернокислый безводный, хч, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76).
<a id="p100035"></a>Спирт изопропиловый, [ГОСТ 9805-84](https://bukva.ai/docs/gost-9805-84).
<a id="p100036"></a>Спирт метиловый для хроматографии, ТУ 6-09-1709-77.
<a id="p100037"></a>Циклогексан для хроматографии, ТУ 6-09-1832-77.
<a id="p100038"></a>Приготовление растворов:
<a id="p100039"></a>    а)   1  -  молярный  раствор  K HPO :  174  г  фосфорнокислого
                                   2   4
двузамещенного  калия  помещают  в  мерную  колбу объемом 1000 мл,
добавляют  дистиллированной  воды  до  полного  растворения соли и
доводят объем водой до метки;
<a id="p100040"></a>    б)  фосфатный  буфер  (pH  7,0): смешивают 150 мл 1 М K HPO  с
                                                           2   4
1350  мл  дистиллированной воды. Доводят pH смеси до 7,0, добавляя
по каплям концентрированную ортофосфорную кислоту и контролируя pH
среды с помощью универсального иономера;
<a id="p100041"></a>в) экстрагирующая смесь: готовят смесь метанола с фосфатным буфером в соотношении 75:25 по объему;
<a id="p100042"></a>г) подвижная фаза для ВЭЖХ: циклогексан - 750 мл, изопропанол - 125 мл, метанол - 125 мл, смесь уксусной кислоты с водой (9:1) - 1 мл;
<a id="p100043"></a>д) состав для кондиционирования колонки: изопропанол - 400 мл, уксусная кислота ледяная - 100 мл, вода бидистиллят - 10 мл.
<a id="p100044"></a>Приборы, аппаратура, посуда
<a id="p100045"></a>Жидкостный хроматограф "Уотерс", модель 510, с фотокондуктивным детектором "Тракор", модель 965, или другой аналогичного типа.
<a id="p100046"></a>Колонка стальная длиной 30 см с сорбентом на основе силикагеля с удельной поверхностью 300 кв. м/г и размером частиц 10 мкм марки мю-Порасил фирмы Уотерс или Силасорб-300 фирмы Хемапол.
<a id="p100047"></a>Мельница лабораторная.
<a id="p100048"></a>Гомогенизатор лабораторный со стаканом емкостью 100 - 150 мл.
<a id="p100049"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичного типа.
<a id="p100050"></a>Водоструйный насос, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100051"></a>Иономер универсальный ЭВ-74.
<a id="p100052"></a>Воронки конические, стеклянные, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100053"></a>Воронки делительные на 500 мл, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100054"></a>Концентраторы грушевидные КТУ-100-14/19 НШ-19, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100055"></a>Воронки Бюхнера фарфоровые диаметром 70 мм, ГОСТ 9147-80.
<a id="p100056"></a>Колбы Бунзена объемом 800 мл, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100057"></a>Пипетки мерные на 2,0; 1,0; 5,0; 10,0; 25 мл, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74).
<a id="p100058"></a>Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100059"></a>Вата стеклянная для хроматографии.
<a id="p100060"></a>Фильтры диаметром 20 мм с отверстиями 20 мкм фирмы Милипор.


### <a id="p100061"></a>2.3. Отбор проб


<a id="p100062"></a>Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна подсушивают до стандартной влажности и хранят в сухом, хорошо вентилируемом помещении. Перед анализом пробы размалывают на лабораторной мельнице до размеров частиц менее 1 мм.
<a id="p100063"></a>Пробы зеленой массы замораживают и хранят в холодильнике при температуре ниже -15 °C.


### <a id="p100064"></a>2.4. Подготовка к определению



##### <a id="p100065"></a>2.4.1 Кондиционирование хроматографической колонки

<a id="p100066"></a>Перед началом работы хроматографа раствор для кондиционирования колонки и подвижную фазу дегазируют в течение 2-х часов, пропуская через растворы гелий. Операцию повторяют ежедневно в течение 1 часа перед началом анализа, не выключал прибора. При добавлении новой порции растворителей дегазирование проводят в течение 2-х часов.
<a id="p100067"></a>Готовую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при 35 °C, пропуская через нее в течение 4-х часов раствор для кондиционирования колонки со скоростью 0,5 мл и затем еще 4 часа подвижную фазу для ВЭЖХ с той же скоростью. Эту операцию проводят ежедневно перед началом ввода проб в ночное время с использованием таймеров (реле времени). Нарушение данного режима приводит к резкой потере чувствительности.

##### <a id="p100068"></a>2.4.2 Приготовление стандартных растворов

<a id="p100069"></a>Стандартный раствор N 1 с концентрацией титуса 1 мг/мл готовят следующим образом: взвешивают 50 мг титуса с точностью +/- 0,0002 г, переносят навеску в мерную колбу на 50 мл ацетонитрилом и доводят объем раствора до метки этим же растворителем. Методом последовательного разбавления в ацетонитриле готовят стандартный раствор N 2 с концентрацией 100 мкг/мл. Растворы N 1 и 2 можно хранить в холодильнике не более 1 месяца.
<a id="p100070"></a>Для калибровки хроматографа ежедневно готовят рабочие стандартные растворы с концентрацией титуса 0,1; 0,2; 0,4; 0,6 мкг/мл, внося пипеткой соответствующее количество раствора N 2 в мерные колбы, упаривая ацетонитрил досуха током азота и доводя объем раствора до метки подвижной фазой без уксусной кислоты.
<a id="p100071"></a>Хроматографируют по 20 мкл каждого рабочего раствора, измеряют высоту пика (или площадь) и строят график зависимости высоты (площади) пика от концентрации титуса.


### <a id="p100072"></a>2.5. Описание определения



##### <a id="p100073"></a>2.5.1 Экстракция и очистка экстракта

<a id="p100074"></a>Навеску измельченного зерна или зеленой массы - 10 г помещают в пластиковую банку с крышкой, приливают 100 мл экстрагирующей смеси и гомогенизируют в течение 1 мин. при скорости 1500 об./мин. Банки с гомогенатом устанавливают на встряхиватель, закрывают плотно крышками и встряхивают 10 мин. По истечении срока банки переносят в центрифугу с охлаждением и центрифугируют 10 мин. при скорости 3500 - 4500 об./мин. Экстракт осторожно переносят в воронку Бюхнера с бумажным фильтром и фильтруют под вакуумом в колбу Бунзена. Экстракцию повторяют, добавляя в банку 50 мл ацетонитрила, встряхивая 10 мин., центрифугируя и отфильтровывая. Объединенный экстракт переносят из колбы Бунзена в чистую пластиковую банку объемом 250 мл, обмывая колбу экстрагирующей смесью. К экстракту приливают 50 мл метиленхлорида, банку плотно закрывают крышкой и интенсивно встряхивают смесь в течение 10 мин. Затем экстракт центрифугируют 10 мин. при 3500 - 4500 об./мин. Содержимое банки осторожно (по стеклянной палочке) переносят в делительную воронку и нижний слой (метиленхлорид) сливают в концентратор через безводный сульфат натрия. Повторяют экстракцию еще 2 раза порциями метиленхлорида по 50 мл с последующим центрифугированием. Объединенные экстракты упаривают досуха на ротационном испарителе при t = 40 °C.
<a id="p100075"></a>Сухой остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы, не содержащей уксусной кислоты, и вводят в хроматограф 20 мкл раствора.

##### <a id="p100076"></a>2.5.2 Условия хроматографирования

<a id="p100077"></a>Жидкостный хроматограф "Уотерс", модель 510, с программатором температуры и фотокондуктивным детектором "Трактор", модель 365.
<a id="p100078"></a>Показания аттенуатора - 1 x 50.
<a id="p100079"></a>Скорость движения ленты самописца - 120 мм/час.
<a id="p100080"></a>Колонка стальная длиной 30 см, внутренний диаметр 3 мм. Неподвижная фаза - мю-Порасил, Уотерс.
<a id="p100081"></a>Температура колонки - 35 °C.
<a id="p100082"></a>Скорость потока подвижной фазы - 0,3 мл/мин.
<a id="p100083"></a>Объем пробы, вводимой в колонку, - 20 мкл.
<a id="p100084"></a>Абсолютное время удерживания титуса - 27 мин. 29 сек.
<a id="p100085"></a>Линейность детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.
<a id="p100086"></a>Каждую анализируемую пробу вводят 2 раза и вычисляют среднюю высоту (площадь) пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор 1,0 мкг/мл, разбавляют.

##### <a id="p100087"></a>2.5.3 Обработка результатов анализов

<a id="p100088"></a>Содержание титуса рассчитывают методом соотношения со стандартом по формуле:

                             П   x A x V
                              пр
<a id="p100089"></a>                         X = -----------,
                               П  x p
                                с

<a id="p100090"></a>    где:
<a id="p100091"></a>    X - содержание гербицидов в пробе, мг/кг;
<a id="p100092"></a>    П  - высота (площадь) пика стандарта, мм;
     с
<a id="p100093"></a>    П   - высота (площадь) пика образца, мл;
     пр
<a id="p100094"></a>    A - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
<a id="p100095"></a>    V - объем  экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
<a id="p100096"></a>    p - масса анализируемого образца, г.


## 3. <a id="p100097"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100098"></a>Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

<div align="right">

<a id="p100099"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100100"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИТУСА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ**<br>
**(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**

</div>



| Среда | Добавлено титуса, мг/кг | Обнаружено, мг/кг | Полнота определения, % |
| --- | --- | --- | --- |
| Зеленая масса Зерно кукурузы | 0,5 0,1 0,05 0,5 0,1 0,05 | 0,469 0,00833 0,045 0,418 0,0859 0,045 | 93,8 83,3 90,0 83,5 85,9 90,0 |




<a id="p100108"></a>

---