Методические указания по определению ципроконазола (альто) в воде, почве, растениях хроматографическими методами

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6181-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЦИПРОКОНАЗОЛА (АЛЬТО) В ВОДЕ, ПОЧВЕ, РАСТЕНИЯХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Ципроконазол (альто) — 2-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-1(1H-1,2,4,-триазол-1-ил)бутан.

              OH

\ ___ /	2 / \

                 /  \
                CH   CH
                  3  / \

                CH -CH
                  2   2

Растворим в хлороформе, ацетоне, метаноле, хлористом метилене.

МДУ в зерновых (пшеница, ячмень) — 0,05 мг/кг.

ПДК в почве — 0,2 мг/кг, ПДК в воде водоемов — 0,03 мг/л.

2. Методика определения ципроконазола (альто) хроматографическими методами в воде, почве, растениях

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на определении ципроконазола (альто) методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии после извлечения из анализируемой пробы органическими растворителями (хлороформ, смеси ацетон — вода, метанол — вода).

2.1.2 Метрологическая характеристика

    Диапазон определяемых концентраций    0,005 - 0,5 мг/кг (мг/л)
    Предел обнаружения                    ТСХ - 2 мкг

Анализируемый объект	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Относительное стандартное отклонение Sr, %	Доверительный интервал среднего, % P = 0,95, n = 5
ГЖХ
Вода	90,1	3,5	3,9	+/- 4,2
Почва	83,7	3,6	5,2	+/- 6,0
Растения	78,2	3,3	4,3	+/- 5,0
ТСХ
Вода	85,0	4,73	5,0	+/- 5,8
Почва	80,0	6,36	7,5	+/- 9,2
Растения	75,0	7,5	9,3	+/- 12,4

2.1.3 Избирательность метода

Метод избирателен в присутствии фосфорорганических, хлорорганических пестицидов. Определению могут мешать препараты из группы замещенных триазолов.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Метиловый спирт, чда, ГОСТ 6995-77.

Натрий сульфат безводный, чда, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ, чда, ГОСТ 20015-74.

Фильтры «синяя лента».

Стандартный раствор в ацетоне концентрации 100 мкг/мл. Готовят растворением 10 мг препарата в 100 мл ацетона. Срок хранения до 3-х месяцев. Для ГЖХ готовят стандартные растворы последовательным разведением исходного раствора. Срок хранения до 5 дней.

К методу ГЖХ

Носитель для колонки — Хроматон N-AW с 5% SE-30.

К методу ТСХ

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81.

Пластинки «Силуфол» (ЧССР).

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-1058-76.

Проявляющий реактив — раствор бромфенолового синего. 0,05 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона, доводят до 100 мл 0,5% водно-ацетоновым (1 часть воды + 3 части ацетона) раствором азотнокислого серебра.

2.3. Приборы и посуда

Ротационный испаритель с набором колб (типа ИР-1), ТУ 26-11-917-77.

Водяная баня, ТУ 64-1-2850-76.

Посуда стеклянная лабораторная по ГОСТ 1770-74, ГОСТ 25336-82.

К методу ГЖХ

Хроматограф с термоионным детектором (типа «Цвет», «Кристалл-2000» или другой).

Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр 3 мм.

Микрошприц на 10 мкл МШ-10.

К методу ТСХ

Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукций, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения остаточных количеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР 21.08.1979, № 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов

Вода. Пробу (500 мл) воды помещают в делительную воронку на 1 л, добавляют 10 г хлорида натрия, перемешивают и экстрагируют ципроконазол трижды по 50 мл хлороформа, предварительно насыщенного водой. Объединенные хлороформные экстракты сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема ~ 0,2 — 0,3 мл. Досуха удаляют растворитель на воздухе. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, 3 — 5 мкл вводят в хроматограф.

Растительный материал. 50 г измельченной пробы помещают в коническую колбу, заливают 200 мл смеси метанол — вода 7:3 (ацетон — вода 7:3). Встряхивают 1 часть. Экстракцию повторяют дважды. Объединяют фильтрат, переносят в делительную воронку, прибавляют 10 г хлорида натрия, перемешивают. Препарат из водного раствора реэкстрагируют трижды по 50 мл хлороформа. Объединяют хлороформный экстракт, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают растворитель. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и 3 — 5 мкл вводят в хроматограф.

Если экстракт содержит большое количество коэкстрактивных веществ, сухой остаток в колбе растворяют в 10 мл ацетона и помещают колбу в морозильную камеру. Через 2 — 3 часа после выпадания осадка раствор фильтруют через бумажный фильтр «красная лента», смывая стенки колбы и фильтр холодным ацетоном. Фильтрат упаривают и далее проводят определение хроматографическими методами.

Почва. 50 г почвы помещают в коническую колбу, смачивают 10 — 15 мл дистиллированной воды, затем приливают 100 — 150 мл смеси метанол — вода (7:3) (ацетон — вода 7:3) и далее проводят анализ так, как описано выше для растительного материала.

Определение методом ГЖХ

Хроматограф с термоионным детектором.

Колонка длиной 1 м, диаметр 3 мм.

Носитель — Хроматон N-AW с 5% SE-30.

Температура колонки — 210 °C.

Температура испарителя — 230 °C.

Расходы газов: азот — 30 — 32, водород 11 — 13, воздух — 100 — 150 мл/мин. -10

Рабочая шкала электрометра — 32 x 10 .

Объем вводимой пробы — 3 мкл.

Время удерживания — 1 пик — 2,8 мин.; 2 пик — 5 - 6 мин.

Количественный расчет ведут методом соотношения со стандартом.

Концентрацию ципроконазола в пробе определяют по формуле (по сумме двух пиков):

                        C x h   x V   x V
                             пр    ст    общ

X = --------------------,

                           h   x V   x P
                            ст    пр

где:

X — содержание ципроконазола в пробе, мг/кг (мг/л);

C — концентрация ципроконазола в стандартном растворе, мкг/мл;

h — высота пика пробы, мм; пр

h — высота пика стандартного раствора, мм; ст

V — объем пробы, введенный в хроматограф, мкл; пр

V — объем стандартного раствора, введенный в хроматограф, ст мкл;

V — общий объем пробы, мл; общ

P — навеска пробы, (г, мл).

Определение методом ТСХ

Пробу после упаривания количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую пластину так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Колбу с экстрактом 2 — 3 раза смывают небольшими порциями ацетона, который также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят серию стандартов, содержащих 2, 5, 7 и 10 мкг препарата. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую за 30 минут до хроматографирования залита смесь хлороформ — ацетон 9:1. После поднятия фронта подвижной фазы на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. После этого пластинку обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового синего.

    После  высушивания  пластинку  обрабатывают  для удаления фона
растворителя  2-процентным  раствором лимонной (уксусной) кислоты.
Альто проявляется в виде пятен (2 изомера) ярко-голубого  цвета на
                              1          2
светло-желтом фоне. Величина R  - 0,45, R  - 0,60.
                              f          f

Количественное определение пестицида проводят путем сравнения интенсивности (по сумме) окраски и площадей пятен пробы и стандартного раствора. Прямолинейная зависимость между площадью пятна и содержанием препарата соблюдается в интервале 1 — 10 мкг. Если содержание препарата в пробе превышает верхнюю границу диапазона 10 мкг, то для нанесения на пластинку необходимо брать аликвотную часть экстракта (0,1 — 0,2 мл) параллельной пробы.

Концентрацию препарата в пробе вычисляют по формуле:

                              A

X = -, P

где:

X — содержание препарата в пробе, мг/кг (мг/л);

A — количество препарата, найденное в анализируемой пробе, мкг;

3. Требования безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами.

---