--- title: "\"Временные методические указания по определению 2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде хроматографическими методами\"" number: "6161-91" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6161-91" --- ## "Временные методические указания по определению 2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде хроматографическими методами" # "Временные методические указания по определению 2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде хроматографическими методами" (утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6161-91)
Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6161-91
**ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2-АМИНО-4-ДИМЕТИЛАМИНО-6-ХЛОР-1,3,5-ТРИАЗИНА** **В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ** Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды. Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. ## 1. Краткая характеристика вещества N // \ C H N Cl. Cl──C // \ C──NH 5 8 5 | 2 М.м. 173,61. | | --- | N \\ / N \\ /C N / \ H C CH 3 3 2-Амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазин (АДХТ) - метаболит и полупродукт синтеза грамекса. Белое кристаллическое вещество без запаха с Т пл. 210 - 211 °C. Растворимость в воде - 0,049% (25 °C), ацетоне - 1,94%, хлороформе - 0,34%. ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/куб. дм. ## 2. Методика определения 2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на экстракции АДХТ из воды хлороформом с последующим определением газожидкостной (ГЖХ) и тонкослойной (ТСХ) хроматографией. Минимально детектируемое количество с помощью пламенно-ионизационного детектора 0,01 мкг, минимально обнаруживаемое количество на тонкослойных хроматограммах 1 мкг. Предел обнаружения АДХТ в воде 0,008 мг/л (ТСХ) и 0,006 мг/л (ГЖХ). ##### 2.1.2 Избирательность метода Определению АДХТ не мешают другие триазины - полупродукты производства пестицидов - производных сульфанилмочевин. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода приведена в таблице. Таблица | Метод определения | Предел обнаружения, мг/л | Процент определения, % | Средняя квадратичн. ошибка определения, мкг | Доверительный интервал (p = 0,95, n = 10) | | --- | --- | --- | --- | --- | | ГЖХ | 0,006 | 65 | +/- 1,1 | +/- 0,8 | | ТСХ | 0,008 | 72 | +/- 0,44 | +/- 0,3 | ### 2.2. Реактивы и растворы Ацетон чда, ТУ 6-08-3513-75. Бензол чда, [ГОСТ 5955-75](https://bukva.ai/docs/gost-5955-75). Натрий сернокислый б/в, ч, ГОСТ 4106-76. Этиловый эфир уксусной кислоты чда, [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76). Серебро азотнокислое чда, ГОСТ 1277-75. Бромфеноловый синий чда, ТУ 6-09-37-9-83. Лимонная кислота осч, ТУ 6-09-584-75. Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76. Калий иодистый чда, [ГОСТ 4232-74](https://bukva.ai/docs/gost-4232-74). Крахмал растворимый чда, [ГОСТ 10163-76](https://bukva.ai/docs/gost-10163-76). Дистиллированная вода, ТУ 6-09-2502-77. Калий марганцовокислый чда, ГОСТ 20490-75, 3-процентный водный раствор. Хлористоводородная кислота хч, ГОСТ 18290-72, 12-процентный водный раствор. Кальций сернокислый чда, ГОСТ 3210-66. Кальций хлористый ч, ГОСТ 4460-77. Силикагель КСК N 2, ГОСТ 3956-76, ТУ 6-09-2523-72. Силикагель ЛС 5/40 для тонкослойной хроматографии с 13% гипса (Хемапол, ЧССР). Пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол" (Хемапол, ЧССР). Гидроксид натрия хч, ГОСТ 4328-77. Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74. Хроматон N-AW, 0,20 - 0,25 мм, с 5% XE-60. Хромосорб W-HP, 80/100 меш, с 3% OV-17. ### 2.3. Приборы и посуда Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором ("Цвет-106" и т.п.). Мерные колбы на 25 и 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Аппарат для встряхивания, ТУ 69-1-081-73. Водяная баня, ТУ 46-22-60375. Электроплитка, ТУ 92-275-76. Стеклянные пластинки, 15 х 15 см. Сито капроновое, 100/120 меш. Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Камера для обработки пластинок, ТУ 10565-63. Эксикатор, ГОСТ 6371-73. Сушильный шкаф, ТУ 69-1-1411-76. Делительная воронка на 500 мл, ГОСТ 100054-75. Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10М. Фарфоровая ступка. Ротационный испаритель. Стеклянный водоструйный вакуумный насос, МРТУ 42961-64. Весы лабораторные ВЛА-200М. Колбы конические НШ, ГОСТ 1170-74. ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79. ### 2.5. Подготовка к определению ##### 2.5.1 Приготовление пластинок с тонким слоем силикагеля для ТСХ 35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100/120 меш, смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды в фарфоровой ступке или на аппарате для встряхивания в течение 15 минут. Около 10 г сорбционной массы наносят на стеклянную пластинку 15 х 15 см и, покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в горизонтальном положении при комнатной температуре 12 часов и затем активируют в сушильном шкафу при 190 °C в течение 30 минут. Хранят в эксикаторе над слоем хлористого кальция. При использовании для приготовления пластинок силикагеля ЛС 14 г этого силикагеля смешивают с 38 мл дистиллированной воды. На одну пластинку наносят 5 - 7 г сорбционной массы и далее поступают так, как это описано выше. ##### 2.5.2 Приготовление стандартного раствора Стандартный раствор АДХТ в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10,0 мг вещества в мерной колбе на 100 мл. ##### 2.5.3 Приготовление проявляющих реактивов для ТСХ Проявляющий реактив N 1: раствор N 1 - в мерную колбу на 100 мл помещают 0,4 г бромфенолового синего и доводят до метки дистиллированной водой; раствор N 2 - в мерную колбу на 100 мл помещают 2 г. азотнокислого серебра и доводят до метки дистиллированной водой; пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов N 1 и N 2 и затем 4-процентным водным раствором лимонной кислоты. Проявляющие растворы при хранении в плотно закрытых склянках без доступа света годны для применения в течение месяца. Проявляющий реактив N 2: раствор N 1 - в мерную колбу на 25 мл помещают 0,25 г иодистого калия и доводят до метки дистиллированной водой; раствор N 2 - 0,75 г растворимого крахмала заваривают в 25 мл дистиллированной воды и затем охлаждают; пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов N 1 и N 2. Проявляющий реактив готовят перед употреблением. ##### 2.5.4 Построение градуировочного графика для определения АДХТ методом ГЖХ Для построения градуировочного графика в пробы воды (250 мл) вносят 1,5; 2,5; 5,0 и 7,5 мкг АДХТ в виде раствора в ацетоне и далее осуществляют извлечение АДХТ из проб и хроматографирование так, как описано в [п. 2.6.2](#p100092). Хроматографирование одной пробы проводят дважды, измеряют на хроматограммах высоты пиков АДХТ и строят график зависимости высоты пика АДХТ от его содержания в воде. Полученные данные обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают уравнение калибровочного графика в виде: H = A + B x X, где: H - высота пика АДХТ на хроматограмме, мм; X - содержание АДХТ в воде, мг/л; A и B - коэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов. ### 2.6. Описание определения ##### 2.6.1 Тонкослойная хроматография Пробу воды (250 мл) помещают в делительную воронку, доводят pH до 8 с помощью 1М водного раствора гидроксида натрия и трижды экстрагируют хлороформом (3 x 25 мл). Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 0,5 - 1 часа при периодическом перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45 °C до объема ~ 1 мл. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку с тонким слоем силикагеля (могут быть использованы пластинки, приготовленные в лабораторных условиях, и пластинки "Силуфол"). На эту же пластинку наносят стандартные количества (1 и 2 мкг) АДХТ в виде раствора в ацетоне и проводят хроматографирование в системе растворителей этилацетат - хлороформ (1:1) в хроматографической камере, насыщенной в течение 2 часов парами подвижных растворителей. Для насыщения стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, которая пропитывается смесью подвижных растворителей. После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения АДХТ пластинку обрабатывают смесью N 1 и N 2 (1:1) и затем 4-процентным водным раствором лимонной кислоты. АДХТ обнаруживается в виде синих пятен на желтом фоне с величиной R = 0,61 +/- 0,05. f Для повышения надежности идентификации АДХТ хроматографирование может быть также проведено в системе растворителей ацетон - бензол (3:2). Для обнаружения АДХТ пластинку предварительно помещают в эксикатор (камера для хлорирования) на 2 минуты, на дно которого наливают смесь (1:1) 3-процентного водного раствора марганцовокислого калия и 12-процентного водного раствора хлористоводородной кислоты (камера насыщается парами хлора через 5 - 10 минут после помещения в нее растворов марганцовокислого калия и хлористоводородной кислоты). Затем пластинку вынимают из эксикатора, помещают в вытяжной шкаф на 40 минут для удаления паров хлора и обрабатывают проявляющим реактивом N 2. АДХТ обнаруживается в виде синих пятен на светло-голубом фоне с величиной R = 0,82 +/- 0,05 (пластинки f "Силуфол"). ##### 2.6.2 Газожидкостная хроматография Извлечение АДХТ из пробы воды проводят так, как это описано в [п. 2.6.1](#p100089). Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 0,5 - 1 часа при периодическом перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45 °C до объема ~ 0,5 мл. Остаток растворителя удаляют потоком теплого воздуха досуха и сухой остаток количественно переносят ацетоном (~ 1 мл) в градуированную центрифужную пробирку. Потоком теплого воздуха упаривают содержимое пробирки до 0,2 мл и вводят в хроматограф 2 мкл. Условия хроматографирования (хроматограф "Цвет-106" с пламенным ионизационным детектором): стеклянная колонка (длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм), заполненная хромосорбом W-HP с 3% OV-17; температура термостата колонки и испарителя 150 и 260 °C соответственно; скорость газа-носителя (азот особой чистоты) через колонку 40 мл/мин., шкала -12 электрометра 10 x 10 А, скорость диаграммной ленты потенциометра 240 мм/час. Время удерживания АДХТ в этих условиях 6 минут. Для повышения надежности идентификации АДХТ может быть использовано хроматографическое определение на колонке (длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм), заполненной хроматоном N-AW с 5% XE-60. Температура термостата колонки 180 °C, остальные условия хроматографирования те же. Время удерживания АДХТ в этом случае 4 минуты 26 сек. Содержание АДХТ в воде определяют с помощью предварительно построенного калибровочного графика. ### 2.7. Обработка результатов анализа Содержание АДХТ в пробах при определении с помощью тонкослойной хроматографии рассчитывают по формуле: 5 10 x A X = -------, V x P где: X - содержание в пробе АДХТ, мг/л; A - количество АДХТ в анализируемом объеме пробы, мг; V - объем пробы, мл; P - процент определения, % (см. [табл.](#p100017)). Количественную оценку АДХТ на хроматограммах проводят путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов или по величине площади пятен по формуле: A - A 2 1 A = A - ------- x (S - S), 2 S - S 2 2 1 где: A, S - количество (мкг) и площадь (кв. мм) пятна АДХТ в анализируемой пробе; A , A , S и S - количество (мкг) и площадь (кв. мм) пятен стандартных 1 2 1 2 растворов АДХТ с большим и меньшим содержанием по сравнению с анализируемой пробой. Величину площади пятен определяют, накладывая на пластинку прозрачную бумагу или кальку; очерчивают контур пятна, переносят его на миллиметровку и подсчитывают число кв. мм, входящих в контур. Содержание АДХТ в пробах (X, мг/л) при определении с помощью газожидкостной хроматографии рассчитывают по формуле: H - A X = -----, B где: H - высота пика АДХТ на хроматограмме анализируемой пробы, мм (среднее значение из двух параллельных определений). ## 3. Требования безопасности Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе в химических лабораториях. ---