Методические указания по измерению концентраций 2-амино-4,6-диметил-1,3-пиримидина в воде методом жидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6152-91)
29 июля 1991 г. № 6152-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ 2-АМИНО-4,6-ДИМЕТИЛ-1,3-ПИРИМИДИНА В ВОДЕ МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика препарата
2-Амино-4,6-диметил-1,3-пиримидин (аминопиримидин) является полупродуктом получения препаратов «Анкор-5» и «Анкор-85», рекомендуемых в качестве гербицидов, и представляет собой тонкодисперсный порошок светло-серого и белого цвета.
N___________CH
// \\ 3
NH // \\
2\ /
\______/
N───────────CH
3
Эмпирическая формула С H N . 6 9 3
Растворяется в воде, метаноле, этаноле, метиленхлориде и хлороформе.
ОБУВ аминопиримидина для воды — 20 мкг/л.
2. Методика определения аминопиримидина
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Определение основано на извлечении анализируемого вещества из воды, насыщенной NaCl, экстракцией метиленхлоридом, концентрировании вещества упариванием растворителя и последующем определении его методом жидкостной хроматографии с УФ-детектором (226 нм) на колонке, заполненной насадкой «Силасорб-600».
2.1.2 Избирательность метода
Метод обеспечивает полную селективность. Определению не мешают полупродукты получения.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
Диапазон измеряемых концентраций аминопиримидина в воде от 10 до 50 мкг/л.
Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме 2 мкг.
Нижний предел измерения в воде 10 мкг/л.
Суммарная погрешность не превышает 11,40%.
Время выполнения определения (включая отбор образца) аминопиримидина в одной пробе при одновременной подготовке двух параллельных образцов 3 часа.
2.2. Реактивы, растворы и материалы
Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76.
Метилен хлористый техн., ТУ 6-09-2662-77.
Спирт изопропиловый хч, ТУ 6-09-402-81.
Гептан нормальный эталонный, ГОСТ 5.395-70.
Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72.
Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75.
Раствор 1:10 в изопропиловом спирте.
Бумага индикаторная универсальная.
Натрий хлористый чда, ГОСТ 4233-77.
2-Амино-4,6-диметил-1,3-пиримидин с установленным содержанием не ниже 98%.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Жидкостный хроматограф Милихром с УФ-детектором, ТУ 25-05-2095-77.
Потенциометр ЛКСУ-003, ТУ 25-05-2095-77.
Колонка металлическая 6,3 см с внутренним диаметром 2 мм, заполненная силикагелем «Силосорб-600», с размером частиц 5 мкм.
Цилиндр 4-50, ГОСТ 1770-74.
Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 мл, 50 мл и 25 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 10, 5, 2 мл с делениями.
Делительные воронки, ГОСТ 25336-82, вместимостью 1000 мл.
Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106.
Колбы грушевидные, ГОСТ 9737-70, вместимостью 50 мл.
Воронка В-36-50 ХС, ГОСТ 25336-82.
Чашка фарфоровая, ГОСТ 9147-73, вместимостью 250 мл.
Холодильник Х111-1-200-14/23 ХС, ГОСТ 25336-82.
Линейка измерительная, цена деления 1 мм, ГОСТ 4272-75.
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.
Регулятор температуры УКТ-4 У-2, ТУ 25-111378-77.
Термометр контактный типа ТПК, ГОСТ 9871-61.
Термометр, ГОСТ 215-73, ТЛ-2, цена деления 1 °C.
Секундомер механический СОП-пр.2а3-000, ГОСТ 5072-79.
Барометр БК-75, ТУ 35-04-223-75, цена деления 0,1 кПа.
Весы аналитические лабораторные общего назначения, тип ВЛА-200М, ТУ 25-06-1049-72.
Весы лабораторные технические ВЛКТ-500М, 4-ый класс, ГОСТ 24104-80.
Набор разновесов Г-2-210, ГОСТ 7328-82.
Насос водоструйный, ГОСТ 25336-82.
Шкаф сушильный электрический 2В-151, ТУ 64-1-1411-76.
Бюксы СН-60/14 или СН-85/15, ГОСТ 7148-70.
2.4. Отбор пробы
Отбор пробы воды производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными зам. Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 № 2051-79. Объем средней пробы должен составлять 2 л.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Подготовка колонки и элюента
Для кондиционирования колонки через нее пропускают 6 мл элюента со скоростью 200 мкл/мин.
Для приготовления элюента смешивают гептан, метанол, изопропанол, хлороформ и уксусную кислоту (1:10 в изопропиловом спирте) в соотношении 60:5,5:3,5:1,5:0,1 по объему.
Метанол перед употреблением сушат окисью бария (0,5 л метанола — 50 г окиси бария), фильтруют и перегоняют.
2.5.2 Подготовка стандартных и градуировочных растворов
Стандартные растворы аминопиримидина 500 мкг/мл — раствор № 1.
Стандартный раствор используют для приготовления из него градуировочных растворов. Для этого 25 мг аминопиримидина взвешивают в мерной колбе вместимостью 50 мл на аналитических весах, записывая результат до четвертого знака.
После растворения аминопиримидина в хлористом метилене доводят объем до метки, тщательно перемешивая содержимое колбы, и рассчитывают концентрацию стандартного раствора с учетом чистоты вещества.
Стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартного раствора № 2. Для этого 10 мл раствора № 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем до метки хлористым метиленом.
Концентрация раствора № 2 соответствует 50 мкг/мл.
Для приготовления воды с известным содержанием аминопиримидина готовят стандартный раствор № 3. Для этого 1 мл раствора № 1 помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем до метки этанолом. Концентрация раствора № 3 соответствует 10 мкг/мл.
Затем, используя стандартный раствор № 2, готовят градуировочные растворы в хлористом метилене:
Стандартные растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 месяца при условиях, исключающих испарение раствора.
Способ приготовления градуировочных растворов из стандартного раствора № 2 представлен в таблице 1.
| Номер градуировочного раствора | Стандартный раствор № 2 (50 мкг/мл), мл | Растворитель хлористый метилен, мл | Концентрация градуиров. раствора, мкг/мл |
|---|---|---|---|
| 4 | 5,00 | 20,00 | 10,00 |
| 5 | 10,00 | 15,00 | 20,00 |
| 6 | 15,00 | 10,00 | 30,00 |
| 7 | 20,00 | 5,00 | 40,00 |
| 8 | 25,00 | - | 50,00 |
2.5.3 Построение градуировочного графика
Для градуировки прибора вводят в хроматограф по 10 мкл каждого градуировочного раствора не менее 3-х раз, измеряют высоту пика линейкой и строят градуировочный график зависимости высоты пика от массовой концентрации аминопиримидина в градуировочном растворе. При данной градуировке необходимо провести измерение коэффициента экстракции аминопиримидина из воды. Коэффициент экстракции определяют по отношению высоты пика аминопиримидина (экстракт из воды с дозированным количеством аминопиримидина — раствор № 3) к высоте пика аминопиримидина градуировочного раствора с той же концентрацией. При использовании градуировочного графика, построенного на основании данных, полученных после экстракции, вводить коэффициент экстракции в расчетную формулу не требуется.
2.6. Описание определения
2.6.1 Экстракция
500 мл анализируемой воды помещают в делительную воронку вместимостью 1000 мл, насыщают ее NaCl (150 г). Проводят экстракцию 3 x 50 мл хлористым метиленом в течение 1 мин. Объединенные экстракты переносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, фильтруя через бумажный фильтр, смоченный хлористым метиленом. Раствор упаривают порциями в круглодонной колбе вместимостью 50 мл с дефлегматором (10 — 12 см) при температуре бани 60 +/- 5 °C (рис. 1 — не приводится). Затем баню убирают и проводят охлаждение установки до комнатной температуры. Через дефлегматор в колбу наливают 0,5 мл хлористого метилена. Колбу снимают, сушат образец на воздухе досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл хлористого метилена, тщательно ополаскивая стенки колбы. Полученный раствор хроматографируют.
2.6.2 Условия хроматографирования
Анализируемый экстракт, подготовленный, как было изложено выше, в количестве 10 мкл вводят с помощью дозирующего устройства в колонку хроматографа и записывают хроматограмму не менее 3-х раз.
Проводят определение высоты пика и фиксируют среднее из трех определений.
Хроматограмма ацетонового экстракта представлена на рис. 2 (не приводится).
Условия хроматографирования градуировочных растворов и анализируемых проб
Длина колонки, см 6,3 Внутренний диаметр колонки, мм 2,0 Насадка колонки Силосорб-600
зернением 5 мкм
Скорость потока элюента через колонку, мкл/мин. 200 Скорость диаграммной ленты, мм/час 600 Диапазон чувствительности 0,4 - 0,8 Объем вводимой пробы, мкл 10 Объем удерживания, мкл 1000 Линейный диапазон определения, нг 20,0 - 100,0
2.7. Обработка результатов анализа
Перед проведением измерений ежедневно по градуировочному раствору с массовой концентрацией 30,00 мкг/мл проводят коррекцию градуировочной прямой.
Расчет содержания анализируемого вещества в пробе воды проводится по высоте пика методом соотношения со стандартом по формуле:
C x h x v x K x a
X = -----------------, hгр х V х в
X — содержание аминопиримидина, мкг/л;
C — концентрация анализируемого вещества в градуировочном растворе, мкг/мл;
hгр и h — высоты пиков на хроматограммах градуировочного раствора и экстракта, мм;
v — объем экстракта после растворения остатка, мл;
a — объем градуировочного раствора, введенного в хроматограф, мкл;
в — объем пробы экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
V — объем пробы воды, взятой для анализа, л;
K — коэффициент, учитывающий потери при концентрировании.
Коэффициент K находят после анализа проб воды, содержащих определенное количество анализируемого вещества по формуле:
А внесено
А обнаружено
3. Требования безопасности
При проведении анализов необходимо выполнять правила техники безопасности при работе со стеклом, электрооборудованием, ЛВЖ, кислотами, а также соблюдать правила производственной санитарии и личной гигиены при работе в химической лаборатории.