---
title: "\"Методические указания по определению эфаля в зерновых культурах методом газожидкостной хроматографии\""
number: "6145-91"
issuer: "Министерство здравоохранения СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6145-91"
---

## "Методические указания по определению эфаля в зерновых культурах методом газожидкостной хроматографии"

# "Методические указания по определению эфаля в зерновых культурах методом газожидкостной хроматографии"

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6145-91)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждены<br>
Министерством здравоохранения СССР

</div>

<div align="center">

29 июля 1991 г. N 6145-91

</div>


<a id="p100002"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭФАЛЯ В ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУРАХ**
**МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**


> <a id="p100003"></a>*(Дополнение к Методическим [указаниям](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6132-91) N 6132-91)*


<a id="p100004"></a>Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
<a id="p100005"></a>Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.


## 1. <a id="p100006"></a>Краткая характеристика метода


<a id="p100007"></a>Эфаль - смесевой препарат:
<a id="p100008"></a>(I) трис-O-(этилортофосфит)алюминия (аналог альетта):

          O
<a id="p100009"></a>          \\                                     C H  AlO P .
    (C H O-PO) Al.                                6 18   9 3
      2 5  \  3
<a id="p100010"></a>            H                                    М.м. 354,0.

<a id="p100011"></a>    (II) фосфит алюминия:
<a id="p100012"></a>    AlPO .                                       М.м. 106,0.
        3
<a id="p100013"></a>    (III) фосфористая кислота:
<a id="p100014"></a>    H PO .                                       М.м. 82,02.
     3  3
<a id="p100015"></a>Эфаль - 66,6% к.э. - вязкая прозрачная жидкость, хорошо растворима в воде. Компоненты препарата I, III в воде растворимы, II - труднорастворимы; в органических растворителях практически не растворимы.
<a id="p100016"></a>МДУ эфаля в огурцах - 0,5 мг/кг, винограде - 0,8 мг/кг, в воде - 0,3 мг/л.


## 2. <a id="p100017"></a>Методика определения эфаля в зерновых культурах (пшеница, рожь) методом газожидкостной хроматографии



### <a id="p100018"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100019"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100020"></a>Метод основан на извлечении эфаля из исследуемого объекта водой, концентрировании и последующем определении методом реакционной газожидкостной хроматографии в виде метилпроизводных.

##### <a id="p100021"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100022"></a>Минимально детектируемое количество:
<a id="p100023"></a>этилфосфита алюминия - 0,1 нг;
<a id="p100024"></a>фосфористой кислоты - 0,1 нг.
<a id="p100025"></a>Предел обнаружения в пробе - 0,2 мг/кг.
<a id="p100026"></a>Среднее значение определения при n = 5, %, - 73 и 71 соответственно.
<a id="p100027"></a>Размах варьирования, %, - 70 - 78 и 64 - 76.
<a id="p100028"></a>Стандартное отклонение, %, - 3,6 и 5,7.
<a id="p100029"></a>Доверительный интервал среднего при P = 0,95, n = 5 - +/- 6,8% и +/- 10%.

##### <a id="p100030"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100031"></a>Условия экстракции и последующего газохроматографического определения эфаля (этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты) позволяют избирательно определять препарат в присутствии фосфорорганических и пестицидов других групп.


### <a id="p100032"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100033"></a>Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.
<a id="p100034"></a>Метилгликоль (метилцеллозоль), чда, МРТ 6-09-6347-69.
<a id="p100035"></a>Гидразингидрат, чда.
<a id="p100036"></a>Кали едкое, ч, [ГОСТ 24363-80](https://bukva.ai/docs/gost-24363-80).
<a id="p100037"></a>Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.
<a id="p100038"></a>Кислота уксусная (ледяная), хч, [ГОСТ 18270-81](https://bukva.ai/docs/gost-18270-72).
<a id="p100039"></a>Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77, 20-процентный раствор.
<a id="p100040"></a>Метиловый спирт, хч, ГОСТ 6996-77.
<a id="p100041"></a>Диэтиловый эфир, хч, [ГОСТ 6262-79](https://bukva.ai/docs/gost-6262-79).
<a id="p100042"></a>Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
<a id="p100043"></a>Водород в баллоне, ГОСТ 3022-88.
<a id="p100044"></a>Неподвижная фаза - 15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм).
<a id="p100045"></a>Этилфосфит алюминия, хч.
<a id="p100046"></a>Фосфористая кислота, хч.
<a id="p100047"></a>Основные стандартные растворы (ОСР) этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты с концентрацией по 100 мкг/мл готовят взятием навески каждого вещества 10 мг (0,0100 г) хч и растворением в дистиллированной воде в мерных колбах емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике не более 10 дней.
<a id="p100048"></a>Рабочие стандартные растворы с содержанием 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл готовят разбавлением ОСР водой. Хранить не более 2 дней.


### <a id="p100049"></a>2.3. Приборы, аппаратура и посуда


<a id="p100050"></a>Газовый хроматограф серии "Цвет" или аналогичный с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).
<a id="p100051"></a>Колонка стеклянная, длина 2 м, диаметр 3,5 мм.
<a id="p100052"></a>Мельница ручная типа РСТ УССР 1913-82 или электрическая, позволяющая измельчать зерно до 1 - 3 мм.
<a id="p100053"></a>Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
<a id="p100054"></a>Колбы грушевидные (круглодонные), ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 мл, 100 мл, 50 мл ОКШ 500-29/50-14.
<a id="p100055"></a>Колбы мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), вместимостью 50, 100 мл.
<a id="p100056"></a>Пробирки мерные на шлифах, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), вместимостью 5 мл.
<a id="p100057"></a>Пипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74), на 0,1; 0,2; 1; 5; 10 мл.
<a id="p100058"></a>Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ SE-2.833.024.
<a id="p100059"></a>Прибор для получения диазометана (рис. 1 - не приводится):
- <a id="p100060"></a>колба круглодонная, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);
- <a id="p100061"></a>холодильник Либиха на шлифах;
- <a id="p100062"></a>делительная воронка на шлифе (капельница);
- <a id="p100063"></a>П-образный переходник на шлифах;
- <a id="p100064"></a>капилляр.


### <a id="p100065"></a>2.4. Подготовка к определению



##### <a id="p100066"></a>2.4.1 Отбор проб

<a id="p100067"></a>Отбор проб и доставка проб производятся в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР, N 2051-79 от 21.08.79.

##### <a id="p100068"></a>2.4.2 Подготовка колонки для ГЖХ

<a id="p100069"></a>Колонку заполняют стандартной фазой (15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS), подключив ее к вакууму водоструйного насоса. Заполненную колонку кондиционируют в термостате колонок в течение 6 часов без подключения к детектору, продувая азотом (20 - 24 мл/мин.) и постепенно поднимая температуру от 100 °C до 150 °C. Затем колонку присоединяют к детектору.


### <a id="p100070"></a>2.5. Описание определения



##### <a id="p100071"></a>2.5.1 Экстракция

<a id="p100072"></a>    Зерно измельчают и просеивают через сита 1 - 3 мм. Для анализа
берут  25 г средней пробы подготовленного зерна. Приливают к зерну
50  мл  хлороформа и 50 мл воды. Встряхивают пробу на аппарате для
встряхивания  30  минут.  Дают 15 минут отстояться. Сливают жидкую
фазу,  фильтруя под вакуумом на воронке Бюхнера через тройной слой
марли. К остатку в колбе прибавляют 25 мл хлороформа и 25 мл воды,
энергично  встряхивают  и  фильтруют, как  описано  выше. Фильтрат
переносят  в делительную воронку и отбрасывают нижний хлороформный
слой. Водную фазу переносят в колбу для отгонки и концентрируют до
10  мл  под  вакуумом водоструйного насоса при температуре бани не
более  45  °C. Измеряют точно объем сконцентрированной пробы (V ),
                                                               1
отбирают  0,2  мл,  переносят  в мерную пробирку и доводят до 2 мл
смесью растворителей  метилгликоль - ацетонитрил (1:1). Полученную
смесь  переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000
об./мин.  в  течение 15 минут, после чего отбирают для дальнейшего
метилирования  1  мл  центрифугата; либо фильтруют через небольшой
бумажный фильтр "красная лента" и также отбирают для метилирования
точно   1  мл  смеси,  что  соответствует  аликвоте  0,1  мл  (V )
                                                                2
сконцентрированного (V ) экстракта.
                      1

##### <a id="p100073"></a>2.5.2 Получение метилпроизводных эфаля (этилфосфита алюминия

и фосфористой кислоты)
<a id="p100074"></a>    Подготовленные    аликвоты    экстрактов    (V )    метилируют
                                                  2
диазометаном.   Одновременно   метилируют   стандартные   растворы
этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты. Для этого берут 0,1 мл
рабочих стандартных растворов (10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл) и по
0,9  мл смеси растворителей метилгликоль - ацетонитрил (1:1), т.е.
подготовленные       к       метилированию      и      дальнейшему
газохроматографическому  анализу  стандарты содержат 1 мкг/мл, 0,5
мкг/мл, 0,2 мкг/мл этилфосфита алюминия или фосфористой кислоты.

###### <a id="p100075"></a>2.5.2.1 Получение диазометана

<a id="p100076"></a>Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.
<a id="p100077"></a>В реакционную колбу (см. рис. 1) помещают 6 г кали едкого, 3 мл метанола и 3 мл гидразингидрата. Через смесь продувают азот с расходом ~ 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 капля за 1 - 2 с.
<a id="p100078"></a>2.5.2.2. В подготовленные пробы и стандарты вводят по 5 - 6 мкл ледяной уксусной, 3 - 5 мкл 20-процентной серной кислоты и продувают получаемый в описанном выше приборе диазометан до появления интенсивной желтой окраски раствора пробы или стандарта. Затем немедленно нейтрализуют избыток диазометана в пробе (стандарте) прибавлением нескольких микролитров уксусной кислоты до исчезновения окраски. Пробы и стандарты готовы к газохроматографическому определению.
<a id="p100079"></a>После окончания метилирования прекращают подачу в реакционную колбу хлороформа, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.

##### <a id="p100080"></a>2.5.3 Хроматографический анализ

<a id="p100081"></a>Газовый хроматограф серии "Цвет" с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).
<a id="p100082"></a>Колонка хроматографическая стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3,5 мм.
<a id="p100083"></a>Неподвижная фаза 15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS.
<a id="p100084"></a>Температура колонки 145 °C.
<a id="p100085"></a>Температура испарителя 180 °C.
<a id="p100086"></a>Газ-носитель - азот с расходом 50 мл/мин.
<a id="p100087"></a>Расход водорода - 65 мл/мин.
<a id="p100088"></a>Вводимый объем - 1 - 3 мкл.
                               -9
<a id="p100089"></a>    Шкала множителя 2 x 64 x 10  .
<a id="p100090"></a>Скорость диаграммной ленты 240 мм/час.
<a id="p100091"></a>Время удерживания:
<a id="p100092"></a>диметилфосфоната (метилирование фосфористой кислоты): 2,1 мин.;
<a id="p100093"></a>метилэтилфосфоната (метилирование этилфосфита алюминия): 2,6 мин.
<a id="p100094"></a>Предел определения:
<a id="p100095"></a>диметилфосфоната - 0,1 нг;
<a id="p100096"></a>метилэтилфосфоната - 0,1 нг.
<a id="p100097"></a>Количественную оценку проводят методом соотношения со стандартом по сравнению со стандартами этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты.
<a id="p100098"></a>Расчет результатов анализа проводят по формуле:

                          C x H  x V  x V
                               2    3    1
<a id="p100099"></a>                      X = ----------------,
                          H  x V  x V  x P
                           1    2    4

<a id="p100100"></a>    где:
<a id="p100101"></a>    X  -  содержание  этилфосфита алюминия (фосфористой кислоты) в
анализируемой пробе, мг/кг;
<a id="p100102"></a>    C  -  концентрация  стандартного раствора для ГЖХ, вводимого в
хроматограф, мкг/мл;
<a id="p100103"></a>    H  - высота пика стандартного раствора, мм;
     1
<a id="p100104"></a>    H  - высота пика пробы, мм;
     2
<a id="p100105"></a>    V  - конечный объем сконцентрированного экстракта пробы, мл;
     1
<a id="p100106"></a>    V  - часть экстракта V , взятая для метилирования, мл;
     2                    1
<a id="p100107"></a>    V   -  объем  стандартного раствора, введенного в хроматограф,
     3
мкл;
<a id="p100108"></a>    V  - объем пробы, введенной в хроматограф;
     4

<div align="center">

<a id="p100109"></a>    P - масса анализируемой пробы, г.

</div>



## 3. <a id="p100110"></a>Техника безопасности


<a id="p100111"></a>Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также [Правила](https://bukva.ai/docs/pravila-2455-81) устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, N 2455-81 от 20.10.81.
<a id="p100112"></a>Особое внимание обратить при работе с гидразингидратом и диазометаном. Соблюдать требования безопасности, описанные в методике. Гидразингидрат - токсичная, пожароопасная жидкость (температура воспламенения 59°, самовоспламенения - 267°). При попадании гидразингидрата на окружающие предметы, руки, одежду его немедленно смывают большим количеством воды.



<a id="p100113"></a>

---