---
title: "\"Методические указания по определению препарата \"Комби\" смеси карбофурана с беномилом и ТМТД в растениях сахарной свеклы тонкослойной хроматографией\""
number: "6135-91"
issuer: "Министерство здравоохранения СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6135-91"
---

## "Методические указания по определению препарата "Комби" смеси карбофурана с беномилом и ТМТД в растениях сахарной свеклы тонкослойной хроматографией"

# "Методические указания по определению препарата "Комби" смеси карбофурана с беномилом и ТМТД в растениях сахарной свеклы тонкослойной хроматографией"

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6135-91)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждены<br>
Министерством здравоохранения СССР

</div>

<div align="center">

29 июля 1991 г. N 6135-91

</div>


<a id="p100002"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРЕПАРАТА "КОМБИ" СМЕСИ КАРБОФУРАНА**
**С БЕНОМИЛОМ И ТМТД В РАСТЕНИЯХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ**
**ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ**

<a id="p100003"></a>Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
<a id="p100004"></a>Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.


## 1. <a id="p100005"></a>Краткая характеристика препарата


<a id="p100006"></a>Препарат "Комби", или Фурадан-300, содержащий 27,2% карбофурана, 5,22% беномила, 5,22% тирама (ТМТД) и 62,36% инертного наполнителя, используется для предпосевной обработки семян с нормой расхода 30 л/т.
<a id="p100007"></a>Карбофуран /N-метил-O-2,2-диметилбензо/2,3-дигидрофурил-7/карбамат/.


<a id="p100008"></a>

| / 3 |
| --- |

     \\ / \ / \
       │   O   CH
<a id="p100009"></a>       O   H     3                                 М.м. 221,3.

     O=C-N
          \
           CH
             3

<a id="p100010"></a>    Эмпирическая формула C  H  O N.
                          12 15 3
<a id="p100011"></a>Синонимы: фурадан, куратер.
<a id="p100012"></a>Белое кристаллическое вещество. Т. пл. 150 - 152 °C. Растворимость в воде 700 мг/л, в ацетоне - 150 г/кг, в ацетонитриле - 140 г/кг, в бензоле - 40 г/кг, в диметилсульфоксиде - 270 г/кг, в циклогексане - 90 г/кг. При нагревании со щелочами и кислотами быстро разлагается. Спиртовыми растворами щелочей разрушается даже при комнатной температуре.
<a id="p100013"></a>    В  странах  Западной  Европы  МДУ в шампиньонах - 0,8 мг/кг, в
кукурузе  -  0,1  мг/кг.  Токсичен  для  пчел  и  других  полезных
насекомых.  СК    для   рыб  0,28  мг/л  (при  экспозиции  96  ч).
              50
Акарицид, нематоцид, системный инсектицид.
<a id="p100014"></a>    Беномил               /N-/1-бутилкарбамоилбензимидазолил-2/-O-
метилкарбамат/.

               NCONHC H
     // \ ─────      4 9

| // 3 М.м. 290,3. |
| --- |


<a id="p100016"></a>    Эмпирическая формула C  H  O N .
                          14 18 3 4
<a id="p100017"></a>Синонимы: бенлат, бенлейт, узген, фунгицид 1991, фундазол.
<a id="p100018"></a>Белое кристаллическое вещество со слабым запахом. Т. пл. 290 °C. Практически нерастворим в воде и в большинстве органических растворителей. Нелетуч.
<a id="p100019"></a>ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м, в воде 0,5 мг/л. В СССР МДУ в сахарной свекле - 0,1 мг/кг, пшенице - 0,5 мг/кг, фруктах, огурцах, томатах и капусте - 0,5 мг/кг.
<a id="p100020"></a>Для теплокровных животных и человека малотоксичен. Слаботоксичен для пчел, птиц и рыб.
<a id="p100021"></a>Основной продукт разложения беномила - N-метил-/бензимидазолил-2/-карбамат (БМК).
<a id="p100022"></a>БМК также обладает фунгицидным действием.


<a id="p100023"></a>     \\ / \  /           3
           NH

<a id="p100024"></a>    Эмпирическая формула C H O N .
                          9 9 2 3
<a id="p100025"></a>Кристаллическое вещество от серого или голубого до темно-коричневого цвета. Т. пл. 307 - 312 °C. Плохо растворим в воде и многих органических растворителях, растворим в кислотах.
<a id="p100026"></a>ПДК в воде 0,1 мг/л.
<a id="p100027"></a>Беномил и БМК - системные фунгициды.
<a id="p100028"></a>Тирам (ТМТД) /тетраметилтиурамдисульфид/.

<a id="p100029"></a>    [(CH ) NCS]                                    М.м. 240,4.
        3 2\\  2
            S

<a id="p100030"></a>    Эмпирическая формула C H  N S .
                          6 12 2 4
<a id="p100031"></a>Кристаллическое вещество белого или кремового цвета. Хорошо растворим в хлороформе, ацетоне, хуже в этаноле, диэтиловом эфире, практически нерастворим в воде.
<a id="p100032"></a>Протравитель семян, используемый для защиты растений от заболеваний, инфекционное начало которых распространяется семенами или находится в почве.
<a id="p100033"></a>ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м. В СССР остаточные количества в продуктах питания не допускаются.


## 2. <a id="p100034"></a>Методика определения смеси



### <a id="p100035"></a>2.1. Основные положения


<a id="p100036"></a>Метод основан на извлечении смеси пестицидов из исследуемой пробы подкисленной водой с pH 3, очистке перераспределением пестицидов в хлороформ с последующим определением в тонком слое сорбента.

##### <a id="p100037"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода


<a id="p100038"></a>Таблица 1

<a id="p100039"></a>**ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ**


| Пестицид | Проявитель | Диапазон определяемых концентраций, мкг | Цвет пятен |
| --- | --- | --- | --- |
| Карбофуран | N 1 А, Б А, В А, Г | 0,1 - 3 0,1 - 3 0,1 - 3 | бордовые желтые синие |
| ТМТД | N 1 А, Б Г N 2 | 0,5 - 3 0,5 - 3 0,05 - 10 | бурые оранжевые голубые |
| Беномил, БМК | N 2 | 0,5 - 10 | голубые |
| ТМТД | N 3 | 0,05 - 5 | светло-зеленые |
| Карбофуран | N 4 | 0,1 - 5 | сине-фиолетовые |
| ТМТД | N 4 | 0,5 - 10 | белые |
| Беномил, БМК | N 4 | 1,0 - 10 | сине-фиолетовые |
| Карбофуран | УФ-свет | 0,05 - 10 | сиреневые |
| ТМТД | УФ-свет | 0,05 - 10 | сиреневые |
| Беномил, БМК | УФ-свет | 0,5 - 10 | сиреневые |


<a id="p100057"></a>Таблица 2

<a id="p100058"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, N = 5, P = 0,95**


| Анализируемая проба | Пестицид | Предел обнаружения, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, % | Доверительный интервал, +/- % |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Семена | Карбофуран Беномил БМК ТМТД | 0,50 1,00 1,00 0,25 | 95,0 83,5 82,4 92,0 | 1,8 4,7 4,9 3,7 | 2,4 7,1 7,5 3,2 |
| Зеленая | Карбофуран | 0,01 | 81,8 | 4,9 | 7,6 |
| масса | Беномил БМК ТМТД | 0,10 0,10 0,01 | 79,0 79,9 80,8 | 7,6 6,5 5,2 | 15,9 10,2 8,1 |
| Корне- | Карбофуран | 0,01 | 91,8 | 3,7 | 5,1 |
| плоды | Беномил БМК ТМТД | 0,10 0,10 0,01 | 79,5 82,5 91,5 | 6,1 5,2 6,5 | 9,7 8,0 9,0 |



##### <a id="p100072"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100073"></a>Метод специфичен.


### <a id="p100074"></a>2.2. Реактивы и растворы


<a id="p100075"></a>Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.
<a id="p100076"></a>Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.
<a id="p100077"></a>Этиловый спирт ректификат 96-процентный, ГОСТ 5962-81.
<a id="p100078"></a>Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.
<a id="p100079"></a>Кислота хлористоводородная, ГОСТ 3118-77.
<a id="p100080"></a>Кислота уксусная, [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76).
<a id="p100081"></a>Кислота лимонная, осч, ГОСТ 908-79.
<a id="p100082"></a>Вода дистиллированная.
<a id="p100083"></a>Натрий сернокислый, безводный, чда, ГОСТ 4266-76.
<a id="p100084"></a>Кали едкое, хч, [ГОСТ 24363-80](https://bukva.ai/docs/gost-24363-80).
<a id="p100085"></a>Перманганат калия, чда, ГОСТ 20490-75.
<a id="p100086"></a>п-Нитроанилин, чда, ТУ 6-09-258-70.
<a id="p100087"></a>Натрий нитрит, хч, ГОСТ 4197-74.
<a id="p100088"></a>Хлорная медь, ч, ГОСТ 4967 -48.
<a id="p100089"></a>Азотнокислое серебро, чда, ГОСТ 1277-81.
<a id="p100090"></a>Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-4530-77.
<a id="p100091"></a>о-Толидин, хч, ТУ 6-09-2232-75.
<a id="p100092"></a>Соли диазонил: прочный синий Б, ГОСТ 11632-65; прочный красный Б, [ГОСТ 11827-79](https://bukva.ai/docs/standart-gost-11827-77); прочный голубой Б, ГОСТ 11632-80.
<a id="p100093"></a>Пластинки "Силуфол" УФ-254.
<a id="p100094"></a>Бумага фильтровальная.
<a id="p100095"></a>Карбофуран - 99,5% д.в.
<a id="p100096"></a>Беномил - 99% д.в.
<a id="p100097"></a>БМК - 50% д.в.
<a id="p100098"></a>ТМТД - 80% д.в.
<a id="p100099"></a>"Комби" - к.э.
<a id="p100100"></a>Приготовление стандартных растворов
<a id="p100101"></a>Для сравнения готовят основные растворы: 0,3-процентный препарат "Комби", стандартные растворы карбофурана, беномила, БМК и ТМТД, содержащие 1000 мкг/мл, в ацетоне.
<a id="p100102"></a>Рабочие стандартные растворы, содержащие 500 мкг/мл и 50 мкг/мл, готовят соответствующим разбавлением ацетоном основных растворов.
<a id="p100103"></a>Хранят растворы в холодильнике в склянках с притертыми пробками: карбофуран - 6 месяцев, БМК - 30 дней, ТМТД - 10 дней, беномил - 10 дней, 0,3-процентный раствор препарата "Комби" - 10 дней.
<a id="p100104"></a>Проявляющие реактивы
<a id="p100105"></a>N 1
<a id="p100106"></a>Реагент А. 15-процентный KOH в спиртово-водном растворе (15 г KOH растворяют в 60 мл этилового спирта и 40 мл воды).
<a id="p100107"></a>Реагент Б. Смешивают перед употреблением 0,1-процентный раствор п-нитроанилина в 0,1 н растворе хлористоводородной кислоты и 4-процентный водный раствор нитрита натрия в соотношении 10:1.
<a id="p100108"></a>Реагент В. 0,0,1-процентный раствор солей диазония в ацетоне.
<a id="p100109"></a>Реагент Г. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане с последующим нагреванием 3 - 5 мин. при 110 - 140 °C.
<a id="p100110"></a>Пластинку опрыскивают реагентом А, подсушивают на воздухе и опрыскивают реагентом Б, или В, или Г.
<a id="p100111"></a>N 2. Бромфеноловый реагент
<a id="p100112"></a>    Опрыскивают  пластинку  смесью (1:1) 0,05-процентного раствора
бромфенолового   синего   в   50-процентном   этиловом   спирте  с
1-процентным  раствором  AgNO   в  ацетоне.   Через  1 - 2  минуты
                             3
опрыскивают   1-процентным   раствором   лимонной   кислоты    или
10-процентным раствором уксусной кислоты.
<a id="p100113"></a>    N 3. 1-процентный раствор CuCl  в этиловом спирте.
                                  2
<a id="p100114"></a>N 4. Галогенирование, о-толидин, йодид калия
<a id="p100115"></a>Пластинку обрабатывают парами хлора, проветривают и опрыскивают проявляющим реагентом.
<a id="p100116"></a>Раствор для хлорирования. Смешивают равные объемы 3-процентного раствора перманганата калия и хлористоводородной кислоты.
<a id="p100117"></a>Проявляющий реагент. 0,2 г о-толидина растворяют в 2 мл уксусной кислоты, 0,8 г йодида калия растворяют в 2 мл дистиллированной воды, смешивают растворы и доводят водой до 200 мл.


### <a id="p100118"></a>2.3. Приборы и посуда


<a id="p100119"></a>Весы технические.
<a id="p100120"></a>Весы аналитические 2 класса, ГОСТ 19491-74.
<a id="p100121"></a>Мерные колбы на 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100122"></a>Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.
<a id="p100123"></a>Микропипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74).
<a id="p100124"></a>Электроплитка, ТУ 92-275-76.
<a id="p100125"></a>Аппарат для встряхивания, ТУ 6921-1084-78.
<a id="p100126"></a>Круглодонные колбы, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл.
<a id="p100127"></a>Пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол" (ЧССР).
<a id="p100128"></a>Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100129"></a>Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100130"></a>Эксикатор, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100131"></a>Колбы плоскодонные со шлифом, ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 мл.
<a id="p100132"></a>Воронка делительная, ГОСТ 25336-82, на 500 мл.
<a id="p100133"></a>Вакуумный насос, ГОСТ 10696-75.
<a id="p100134"></a>Хроматоскоп.


### <a id="p100135"></a>2.4. Подготовка к определению



##### <a id="p100136"></a>2.4.1 Отбор проб

<a id="p100137"></a>Пробы для анализа отбираются в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР за N 2051-79 21.08.1979.


### <a id="p100138"></a>2.5. Проведение определения



##### <a id="p100139"></a>2.5.1 Экстракция

<a id="p100140"></a>Растения сахарной свеклы и корнеплоды. 20 - 50 г образца измельчают, помещают в коническую колбу и заливают 100 - 150 мг подкисленной воды с pH 3. Экстракцию проводят на аппарате для встряхивания в течение часа. Экстракт переносят в делительную воронку и проводят реэкстракцию трижды хлороформом (100, 50, 50 мл) по 5 мин. Полученный экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром и 15 г безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу, отгоняют хлороформ на водяной бане или ротационном испарителе до 0,5 - 1 мл. Остаток переносят в мерную пробирку, доводят до объема 1 - 1,5 мл хлороформом, делят на две равные части и наносят на пластинку с левой и правой стороны на расстоянии 1,5 см от краев. Рядом наносят стандартные растворы "Комби" или смесей препаратов.
<a id="p100141"></a>Семена. 0,4 г семян (20 штук) помещают в коническую колбу на 50 мл, заливают 20 мл хлороформа. Встряхивают в течение часа. Фильтруют через безводный сернокислый натрий, отгоняют хлороформ на ротационном испарителе до 0,5 - 1 мл. Переносят в пробирку, доводят объем до 2 мл, делят на две равные части и проводят анализ, как при определении в растениях.
<a id="p100142"></a>Семена, обработанные "Комби". Для проверки качества обработки семян берут 0,2 г семян (10 штук), заливают 10 мл хлороформа. Экстрагируют в течение часа. Сливают хлороформ в мерную пробирку, измеряют объем, доводят до 10 мл. Аликвотную часть 0,05 - 0,1 мл наносят в две точки в правой и левой части пластинки. Дальше проводят определение, как в растениях.

##### <a id="p100143"></a>2.5.2 Хроматографирование

<a id="p100144"></a>Пластинку помещают в хроматографическую камеру с подвижной фазой из смеси гексан - ацетон (3:2) или хлороформа. Когда растворитель поднимется на 10 см, пластинку вынимают и сушат на воздухе.

##### <a id="p100145"></a>2.5.3 Проявление пластинок

<a id="p100146"></a>Пластинку просматривают под УФ-светом. Светящиеся пятна карбофурана, ТМТД, беномила и БМК обводят простым карандашом. Для дополнительной идентификации соединений можно использовать проявитель N 4 (см. [табл. 1](#p100039)). При использовании других проявителей поступают следующим образом. Правую часть пластинки закрывают фильтровальной бумагой. Левую проявляют, используя проявитель N 1. Затем фильтровальной бумагой закрывают левую, а правую обрабатывают проявителем N 2. Для обнаружения ТМТД можно использовать специфичный проявитель N 3.
<a id="p100147"></a>    Величина   R    в   подвижной  фазе  гексан  -  ацетон  (3:2);
                f
карбофурана -  0,45;  беномила  - 0,65; БМК - 0,25; ТМТД - 0,50; в
хлороформе:  карбофурана  -  0,25;  беномила  -  0,45; БМК - 0,15;

<div align="center">

**ТМТД - 0,55.**

</div>



### <a id="p100148"></a>2.6. Обработка результатов анализа


<a id="p100149"></a>Количество препаратов на пластинке определяют по площади пятен, сравнивая с пятнами стандартных растворов, по формуле:

                             P  x S
                              1    x
<a id="p100150"></a>                        P  = ------- мкг,
                         x      S
                                 1

<a id="p100151"></a>    где:
<a id="p100152"></a>    P   и  P   -  содержание препарата в исследуемом и стандартном
     x      1
растворе в мкг;
<a id="p100153"></a>    S  и S  - площади соответствующих пятен, кв. мм.
     x    1
<a id="p100154"></a>    Количество препаратов в мг/кг рассчитывают по формуле:

                            1000 x P x V
<a id="p100155"></a>                        X = ------------,
                               A x V
                                    a

<a id="p100156"></a>    где:
<a id="p100157"></a>    A - масса анализируемой пробы, г;
<a id="p100158"></a>    V - объем пробы, мл;
<a id="p100159"></a>    V  - объем аликвоты, мкг;
     a

<div align="center">

<a id="p100160"></a>    P - количество препарата в хроматографируемой пробе, мкг.

</div>



### <a id="p100161"></a>2.7. Требования безопасности


<a id="p100162"></a>Необходимо выполнять все требования безопасности работы с токсичными веществами, кислотами и щелочами.



<a id="p100163"></a>

---