--- title: "\"Методические указания по определению байфидана в зерновых и лекарственных культурах, в воде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии\"" number: "6131-91" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6131-91" --- ## "Методические указания по определению байфидана в зерновых и лекарственных культурах, в воде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии" # "Методические указания по определению байфидана в зерновых и лекарственных культурах, в воде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6131-91) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6131-91
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЙФИДАНА В ЗЕРНОВЫХ** **И ЛЕКАРСТВЕННЫХ КУЛЬТУРАХ, В ВОДЕ И ПОЧВЕ МЕТОДАМИ** **ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. ## 1. Краткая характеристика препарата Байфидан (триадименол) - 1-4-(хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1-H-1,2,4-триазол-1-ил)бутанол-2. OH Cl_// \\_O__CH__CH__C(CH ) C H ClN O . ```text \ ___ / │ 3 3 14 18 3 2 ─── N /\ М.м. 295,8. / \N ││__││ ``` N Химически чистый байфидан - бесцветный кристаллический порошок, устойчив в кислых, нейтральных и щелочных средах. ЛД для крыс 700 - 1200 мг/кг. 50 Байфидан - высокоэффективный фунгицид с системными свойствами из группы действующих веществ, относящихся к азоловым соединениям. Продукт отличается очень хорошим действием против настоящих мучнисто-росяных грибов и против различных ржавчинных болезней. Наряду с хорошим защитным действием байфидан обладает также лечебным и искореняющим действием. Байфидан применяется при воздействии зерновых культур, в овощеводстве, виноградарстве, при выращивании огурцов и дынь, а также в декоративном цветоводстве. Норма расхода - 125 г д.в. на га, то есть 0,5 л препарата на га. Байфидан выпускается в виде эмульгирующего концентрата с 250 г триадеменола на 1 л (250 к.э.). ## 2. Методика определения байфидана ### 2.1. Основные положения Метод основан на извлечении байфидана из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта на колонке окиси алюминия с последующим определением методами газожидкостной хроматографии с термоионным (ТИД) детектором и тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол". ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода (см. табл. 1) Таблица 1 **МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАЙФИДАНА** | Препарат | Объект | Минимальное детектируемое количество, мкг | Нижний предел определения, мг/л, мг/кг | Размах варьирования, % | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, % | Доверительный интервал среднего при n = 5, P = 0,95 | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Байфидан ТСХ | зерно почва вода лекарственные культуры | 0,004 1,0 | 0,020 0,012 0,007 0,1 | 70,0 - 90,0 72,0 - 95,0 95,0 - 100 70 - 88 | 83,3 90,8 98,3 78,9 | +/- 2,67 +/- 2,84 +/- 3,99 +/- 4,77 | 83,5 +/- 5,6 90,8 +/- 6,8 98,3 +/- 7,7 +/- 5,99 | ##### 2.1.3 Избирательность метода Другие препараты по сфере применения в данных условиях хроматографирования определению не мешают. ### 2.2. Реактивы и растворы Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79. Этилацетат, хч, [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76). Хлористый кальций, ГОСТ 4161-77. Хлороформ медицинский, фармакопея, ГОСТ 20015-74. Спирт этиловый, [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67). Окись алюминия II ст. активности, [ГОСТ 8136-85](https://bukva.ai/docs/standart-gost-8136-85). Натрий сернокислый, безводный, хч, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76). Лимонная кислота, чда, ГОСТ 908-79. Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74. Водород из баллона, [ГОСТ 3022-80](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-3022-80), или получаемый из генератора водорода. Воздух из баллона, ГОСТ 9.010-80, или нагнетаемый компрессором. 3% OV-17 на газохроме (0,16 - 0,20 мм). 5% E-301 на хроматоне N-AW-DMCS. Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530-77. Азотнокислое серебро, ГОСТ 1277-75. Стандартный раствор байфидана в спирте или ацетоне 1 мг/мл (I), из него готовится серия растворов с концентрацией 25 мкг/мл (II), 10 мкг/мг (III). Проявляющие реактивы: 1. 0,4% ацетоновый раствор бромфенолового синего с 2% водным раствором азотнокислого серебра в равных объемах. 2. 2% водный раствор лимонной кислоты. ### 2.3. Приборы, аппаратура и посуда Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76. Мерные колбы, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), на 100 мл. Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 300 мл. Круглодонные колбы, ГОСТ 25336-82, на 250 мл. Микропипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74), на 0,1 или 0,2 мл. Воронки конические, ГОСТ 25336-82. Цилиндры мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), емк. 50 мл. Микропипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Микрошприц МШ N 10, ТУ 2-833-024. Делительные воронки, ГОСТ 25336-82. Хроматограф "Цвет-106", "Цвет-500" или аналогичный с ТИД. ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб" N 2051-79 от 21.08.79. ### 2.5. Проведение определения ##### 2.5.1 Экстракция Вода. 200 мл воды в делительной воронке экстрагируют дважды по 100 - 200 мл этилацетата в течение 3 - 5 минут. Осушенный и объединенный экстракт концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, аликвоту вводят в хроматограф. Почва, зерно. 100 г почвы или 10 - 20 г измельченного зерна экстрагируют 100 - 200 мл этилацетата на встряхивателе в течение 1 часа. Затем экстракцию повторяют, встряхивая анализируемую пробу в течение 30 минут со 100 мл этилацетата. Осушенный и объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе до объема 2 - 3 мл и проводят очистку. Лекарственное сырье. Измельченную навеску лекарственного сырья (30 г сырого и 5 г сухого) заливают ацетоном (100 и 30 мл). Остаток промывают на фильтре дважды ацетоном. Ацетон отгоняют до 5 - 10 мл. ##### 2.5.2 Очистка экстракта Почва, зерно. Сконцентрированный экстракт переносят в бюкс, заполненный 5 - 10 г окиси алюминия. Колбу дважды смывают этилацетатом по 1 мл и также переносят в бюкс. Затем ставят бюкс на песочную баню (60 °C) и выдерживают до полного улетучивания этилацетата. Стеклянной палочкой тщательно перемешивают сорбент в бюксе и переносят в делительную воронку, в узкий конец которой помещают тампон из гигроскопической ваты. Для элюирования байфидана через колонку пропускают 400 мл воды. Скорость вытекания 120 кап./мин. Водный раствор экстрагируют хлороформом (3 раза по 50 мл), встряхивая каждый раз в течение 2 мин. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр и безводный сернокислый натрий в грушевидную колбу и выпаривают на ротационном испарителе до 0,2 мл, а затем остаток высушивают током воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона. Лекарственное сырье. К ацетоновому экстракту добавляют 5 мл 0,05 н и CaCl и ставят в морозильную камеру на 1 час. Затем 2 экстракт фильтруют через фильтр "синяя лента", добавляют 25 мл воды и экстрагируют байфидан этилацетатом (3 раза по 25 мл). Объединенный этилацетатный экстракт упаривают на ротационном испарителе до объема 5 мл. Далее поступают, как при очистке почвы и зерна. Остаток растворяют в 0,5 мл ацетона или спирта. ##### 2.5.3 Условия газожидкостной хроматографии Определение проводят на хроматографе "Цвет" с термоионным детектором. Используют стеклянную колонку длиной 1 м, диаметром 3 мм, носитель - газохром (0,16 - 0,20 мм с 3% OV-17), температура колонки - 230 °C, испарителя - 290 °C. Время удерживания - 1 мин. 30 сек. Линейность детектирования сохраняется в пределах 1 - 6 нг. -10 Рабочая шкала 2 x 10 . Для колонки с 5% E-301 температура испарителя 230 °C, температура колонки 210 °C, рабочая шкала ИМТ - -10 2 x 10 . Время удерживания - 1 мин. 15 сек. Для обеих колонок расход азота 75 мл/мин., воздуха - 150 мл/мин., водорода - 27 мл/мин. Скорость движения ленты самописца - 600 мм/час. ##### 2.5.4 Условия хроматографирования в тонком слое Определение байфидана проводят методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол". С помощью микропипетки наносят на пластинку 0,1 мл экстракта. На расстоянии 2 - 3 см наносят 3 - 4 пятна стандартного раствора байфидана (1 мкг, 3 мкг, 5 мкг, 10 мкг). Пластинку хроматографируют в системе гексан:ацетон (3:2). После того как фронт растворителя поднимается на 10 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе и опрыскивают последовательно проявляющими реактивами 1 и 2. При наличии в пробе байфидана появляется синее пятно. R препарата - 0,72.
f
### 2.6. Обработка результатов анализа Газожидкостное определение Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пика. Для количественного определения измеряют высоту пиков проб и стандартных растворов. Содержание в пробе рассчитывают по формуле: M x H x V ст пр k X = --------------, H x V x M ст x где: X - содержание в пробе, мг/кг или мг/л; M - содержание в стандартном растворе, нг; ст H - высота пика стандартного раствора, мм; ст H - высота пика пробы, мм; пр V - объем конечного экстракта, мл; k V - объем экстракта пробы, введенного в испаритель, мкл; x M - навеска или объем пробы в г или мл. Тонкослойная хроматография Количественное определение содержания байфидана в пробах проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартных растворов. Содержание препарата в пробе рассчитывается по формуле: A x V 1 X = ------, V x P 2 где: X - содержание байфидана в пробе, мг/кг; A - количество препарата, найденное путем визуального сравнения со стандартным раствором, в мкг; V - объем пробы перед нанесением на пластинку в мл; 1 V - объем раствора, нанесенного на пластинку, в мл; 2
P - навеска в г.
## 3. Требования техники безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами. ---