--- title: "\"Методические указания по определению 2,4-Д в воде методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии\"" number: "6127-91" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6127-91" --- ## "Методические указания по определению 2,4-Д в воде методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии" # "Методические указания по определению 2,4-Д в воде методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6127-91)
Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6127-91
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2,4-Д В ВОДЕ МЕТОДОМ ОБРАЩЕННО-ФАЗОВОЙ** **ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. ## 1. Краткая характеристика препарата Краткая характеристика препарата приведена в Методических [указаниях](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6128-91#p100006). ## 2. Методика определения 2,4-Д в воде ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на концентрировании 2,4-Д в пробе и последующем определении препарата с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода Среднее значение определения (%) - 90 Стандартное отклонение (%) - 8,06 Относительное стандартное отклонение (%) - 3,61 Доверительный интервал (+/- %) - 2,95 Предел обнаружения (мг/л) в неочищенной и очищенной пробе - 0,7 и 0,002. ##### 2.1.3 Избирательность метода Метод избирателен в присутствии глобальных загрязнителей окружающей среды - производных циклопарафинов (у-ГХЦГ и его изомеры), соединений дифенилметанового ряда (ДДТ и его производные), а также галакона, глифосата и других гербицидов, применяемых на зерновых культурах. ### 2.2. Реактивы и растворы Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72. н-Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78. Метанол, хч, [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77). Натрия сульфат, безводный, ч, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76). Натрия гидрокарбонат, чда, ГОСТ 4201-66. Универсальные индикаторные бумаги pH 0 - 12 "Lachema" (ЧCCP). Фильтры "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77. Хлороформ, Фармакопея СССР, ГОСТ 20015-74. Хлористоводородная кислота, ч, ГОСТ 3118-77. Эфир для наркоза, Фармакопея СССР, ГОСТ 6265-74. Стандартный раствор 2,4-Д в воде с концентрацией 10 мкг/мл. ### 2.3. Приборы и посуда Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 24104-80. Весы технические типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80. Испаритель ротационный типа ИР-1М2, ТУ 25-1173-102-84. Микроколонка стандартная металлическая (50 x 2 мм) с сорбентом "Силасорб C ", 5 мкм, "Chemapol" (ЧССР). 18 Хроматограф микроколоночный жидкостный типа "Милихром". Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на 250 мл. Воронки конические, ГОСТ 25336-82. Колбы конические с пришлифованной пробкой, ГОСТ 25336-82, на 100 мл. Колбы круглодонные со шлифом, ГОСТ 25336-82, на 100 мл. Колбы плоскодонные, ГОСТ 25336-82, на 250 мл. Пипетки мерные, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74), на 1 мл. Пробирки мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), на 10 мл. Цилиндры мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), на 100 и 25 мл. Линейка металлическая, ГОСТ 25706-83. ### 2.4. Отбор, хранение и подготовка проб Отбор, хранение и подготовка проб к анализу проводятся в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79. ### 2.5. Подготовка к определению ##### 2.5.1 Приготовление элюента Элюирующая смесь вода - метанол в объемном соотношении 7:3 готовится заранее, перед проведением хроматографического анализа. Цилиндром вместимостью 100 мл отмеряют 70 мл дистиллированной воды, которую выливают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 100 мл; туда же приливают 30 мл метанола, колбу закрывают пробкой, содержимое перемешивают при легком взбалтывании и дают смеси отстояться в течение 30 - 40 мин., после чего фильтруют в сосуд для элюента. Элюент отстаивают еще некоторое время (до прекращения образования пузырьков воздуха на стенках сосуда) и приступают к подготовке хроматографической системы прибора к анализу. 2.5.2. Подготовка хроматографической системы к проведению определения 2,4-Д. Подготовку прибора к хроматографическому анализу начинают с промывки насоса свежеприготовленным элюентом, после чего насос заполняют элюирующей смесью вода - метанол (7:3) и приступают к промывке хроматографической системы и заполнению кюветы сравнения элюентом. Подготовка хроматографа продолжается до установления равномерного нулевого выходного сигнала детектора и снижения шумов до минимума. ### 2.6. Проведение анализа ##### 2.6.1 Экстракция препарата из анализируемой пробы Чистую пробу воды (прозрачная и бесцветная) фильтруют через складчатый фильтр и проводят хроматографический анализ неочищенной пробы, вводя в колонку от 5 до 40 мкл (вводимый объем берется по усмотрению оператора, но не более 40 мкл). Если проба воды грязная (мутная и окрашена или содержит сопутствующие примеси природных органических соединений, других пестицидов, влияющих на проведение анализа), поступают следующим образом: 100 мл отфильтрованной пробы помещают в плоскодонную коническую колбу вместимостью 250 мл, туда же добавляют 4 г гидрокарбоната натрия, взвешенного на технических весах, и, при перемешивании раствора, его растворяют в пробе, после чего содержимое колбы переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл. Для удаления из пробы влияющих на анализ примесей проводится их переэкстракция сначала в хлороформ (2 раза по 25 мл), а затем в н-гексан (2 раза по 25 мл) при взбалтывании содержимого воронки в течение 1 мин. Растворители, содержащие сопутствующие примеси пробы, отбрасывают, а водный раствор сливают в колбу вместимостью 250 мл и постепенно приливают туда 1 мл хлористоводородной кислоты, раствор перемешивают при легком взбалтывании. После прекращения выделения углекислого газа раствор переносят в делительную воронку и проводят переэкстракцию 2,4-Д в диэтиловый эфир (2 раза по 20 мл) в течение 1 мин. Водный раствор отбрасывают, а объединенный эфирный экстракт отмывают дистиллированной водой (до нейтрального pH), фильтруют через прокаленный сульфат натрия в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл, упаривают на ротационном испарителе при 30 - 35 °C до небольшого объема, переносят в мерную пробирку и упаривают в токе азота особой чистоты досуха. Сухой остаток пробы растворяют в 0,2 мл дистиллированной воды и проводят хроматографический анализ. ##### 2.6.2 Хроматографическое определение 2,4-Д методом ВЭЖХ Количественное определение 2,4-Д проводят при следующих условиях хроматографирования: неподвижная фаза - "Силасорб C ", 5 18 мкм; подвижная фаза - вода с метанолом в объемном соотношении 7:3; скорость элюирующего потока - 200 мкл/мин.; поддиапазон чувствительности измерений - 0,2 А; время измерения выходного сигнала - 0,6 с; скорость протяжки диаграммной ленты - 300 мм/час; длина волны поглощения светового потока - 280 нм; объем удерживания - 235 мкл. После окончания подготовки прибора к анализу проводится хроматографирование градуировочного раствора 2,4-Д (10 мкг/мл) в объеме от 5 до 40 мкл (5, 10, 15, 20, 30, 40 мкл), а затем пробы воды в объеме, необходимом для обнаружения препарата (но не более 40 мкл), как в несконцентрированной, так и в сконцентрированной (при необходимости) пробе. Если содержание в пробе находится за пределом верхней границы обнаружения, часть ее разбавляют в определенном объеме дистиллированной воды и анализ повторяют при тех же условиях хроматографирования. ##### 2.6.3 Обработка результатов анализа Количественное определение 2,4-Д проводят методом соотношения со стандартами, путем сравнения площадей пиков в анализируемом образце воды и стандартном растворе. Расчет проводят по формуле: S x V x C 1 X = ---------- (мг/л), S x P 2 где: S - площадь пика 2,4-Д в пробе, кв. мм; 1 S - площадь пика стандартного раствора, кв. мм; 2 C - концентрация стандартного раствора, мкг/мл; V - объем анализируемой пробы, мл;
P - конечный объем исходной пробы, мл.
## 3. Требования безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, концентрированными кислотами. ---