--- title: "\"Методические указания по определению трефлана в зеленой массе и зерне зерновых культур методом газожидкостной хроматографии\"" number: "6125-91" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6125-91" --- ## "Методические указания по определению трефлана в зеленой массе и зерне зерновых культур методом газожидкостной хроматографии" # "Методические указания по определению трефлана в зеленой массе и зерне зерновых культур методом газожидкостной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6125-91) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
**В.И.ЧИБУРАЕВ**
29 июля 1991 г. N 6125-91
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРЕФЛАНА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ** **ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. ## 1. Краткая характеристика вещества Название по номенклатуре СЭВ, ИСО: трефлан (нитран, олитреф, трифлуралин). Химическое название: 2,6-динитро-4-трифторметил-N,N-дипропиланилин. NO _____/ 2 F O_// \\___N(C H ) 3 \ ___ / 3 7 2 NO 2 Эмпирическая формула: C H F N O . 13 17 3 3 4 Молекулярная масса: 335,28. Физико-химические свойства: кристаллическое вещество желто-оранжевого цвета; Т. пл. 48,5 - 49 °C, Т. кип. 139 - 140 °C -6 при 4,2 мм рт. ст. Растворимость в 100 г воды при 27 °C 1 x 10 г. Хорошо растворим в ароматических углеводородах и их хлорпроизводных, ацетоне, этилацетате, дихлорэтане. Растворим в гексане. Трефлан устойчив при хранении в темноте. В тонком слое и в растворе на солнечном свету разлагается. МДУ в мг/кг: в луке, чесноке, капусте, томате, баклажанах, перце, сое, табаке, семенах подсолнечника - 0,5; моркови - 0,01; соевом и подсолнечном масле - 0,1. Применяется в качестве гербицида в посевах хлопчатника, сои, гороха, подсолнечника, табака, фасоли, томатов. В смесевых препаратах применяется в посевах зерновых культур. ## 2. Методика определения трефлана в зеленой массе и зерне зерновых культур методом газожидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на извлечении трефлана из зеленой массы культур экстракцией органическим растворителем, очистке экстракта колоночной хроматографией и газохроматографическом определении на приборе с детектором по захвату электронов. Количественное определение проводят по методу абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода Диапазон определяемых концентраций 0,0005 - 1,25 мг/кг. Предел обнаружения в анализируемом объеме 0,0001 мкг. Предел обнаружения в пробе 0,0005 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств 92,7%. Число параллельных определений n = 9. Стандартное отклонение +/- 2,5%. Относительное стандартное отклонение 0,03. Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 1 составляет 92,7 +/- 1,6%. ##### 2.1.3 Избирательность метода Определению не мешают пестициды ряда феноксиалканкарбоновых кислот и тиокарбаматы. ### 2.2. Реактивы и материалы Трефлан с содержанием основного вещества не менее 96%. Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-74. Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78. Алюминия оксид Л 40/250 щелочной для колоночной хроматографии производства ЧССР. Насадка для хроматографической колонки - хроматон N-AW-DMCS (фр. 0,20 - 0,25 мм) с 5% ДС-550 фирмы "Хемапол". Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ 9293-74, в баллоне с редуктором. Бумага фильтровальная. ### 2.3. Приборы, аппаратура и посуда Хроматограф с детектором по захвату электронов. Колонка стеклянная 200 x 0,3 см. Колонка стеклянная 30 x 0,8 см. Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74. Колбы мерные, цилиндры, мензурки, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Колбы грушевидные для отгонки растворителя вместимостью 100 мл, ГОСТ 25336-82. Пипетки различной вместимости, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Воронки конусообразные, ГОСТ 25336-82. Мельница лабораторная (кофемолка). Микрошприц МИ-10М, ТУ 2-833-106. ### 2.4. Подготовка к определению ##### 2.4.1 Приготовление стандартных растворов Стандартный раствор N 1 трефлана концентрации 1000 мкг/мл готовят в мерной колбе на 100 мл растворением навески 0,1 г в гексане. Стандартные растворы N 2 - 7 трефлана концентрации 0,05; 0,10; 0,25; 0,50; 1,00 и 2,50 мкг/мл готовят в мерных колбах на 100 мл разбавлением 0,005; 0,010; 0,025; 0,050; 0,100 и 0,250 мл стандартного раствора N 1 гексаном. Срок хранения растворов один месяц в холодильнике. ##### 2.4.2 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика трижды хроматографируют по 2 мкл стандартных растворов N 2 - 7 при условиях, описанных в [разделе 2.6](#p100059). Измеряют высоты пиков трефлана и по средним значениям трех измерений строят график зависимости высоты в мм от количества трефлана в аликвоте в нг. ##### 2.4.3 Подготовка колонки для очистки экстракта Стеклянную колонку 30 x 0,8 см заполняют при легком постукивании щелочным оксидом алюминия на высоту 10 см. ### 2.5. Отбор пробы Отбор пробы проводится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР за N 2051-79 от 21 августа 1979 года. ### 2.6. Проведение определения Навеску зеленой массы и зерна (20 г) измельчают на кофемолке. Муку помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают 20 мл ацетонитрила, встряхивают в течение 0,5 ч и отфильтровывают под вакуумом. Экстракцию повторяют свежей порцией ацетонитрила (20 мл). Экстракты после фильтрации последовательно пропускают через бумажный фильтр и концентрируют до 0,5 - 1 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, затем до отсутствия ацетонитрила - в токе воздуха. Маслянистый остаток очищают колоночной хроматографией. До внесения экстракта колонку с оксидом алюминия промывают гексаном (10 мл). Остаток экстракта растворяют в 1 мл гексана и переносят в колонку. Колбу обмывают 3 раза 1 мл гексана и смывы также переносят в колонку. Растворитель отсасывают под вакуумом, трефлан элюируют в отгонную колбу со скоростью 60 - 80 капель в мин. 40 мл гексана. Элюат концентрируют до 0,5 - 10 мл и 2 мкл раствора хроматографируют на приборе с электронзахватным детектором при следующих условиях: -11 рабочая шкала электрометра - 9 x 10 А; скорость протяжки картограммы - 200 мм/час; колонка стеклянная длиной 200 см, диаметром 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-DMCS (фр. 0,20 - 0,25 мм) с 5% ДС-550; температура в °C: термостата колонок - 180, испарителя - 250, детектора - 230; расход газа-носителя в мл/мин.: через колонку - 40, через продувочную камеру детектора - 60; объем раствора пробы, вводимый в испаритель, - 2 мкл; линейность детектирования 0,1 - 5 нг; абсолютное время удерживания - 2,11 мин. Хроматографирование каждого экстракта проводят трижды, измеряют высоты пиков, вычисляют среднее значение высоты. По градуировочному графику и высоте пика находят количество трефлана в анализируемом объеме экстракта. ### 2.7. Обработка результатов анализа Содержание трефлана в пробе (X) в мг/кг вычисляют по формуле: А x V x 100 2 X = ------------, V x P x R 1 где: A - количество трефлана в хроматографируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочному графику, нг; V - объем аликвоты раствора пробы, вводимой в прибор, мкл; 1 V - общий объем раствора пробы, мл; 2 P - навеска пробы, г; R - среднее значение определения стандартных количеств
трефлана, найденное предварительно, %.
## 3. Требования безопасности Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также "[Правила](https://bukva.ai/docs/pravila-2455-81) устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Минздрава СССР", N 2455-81 от 20.10.81. ---