Методические указания по определению трефлана в зеленой массе и зерне зерновых культур методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6125-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРЕФЛАНА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика вещества

Название по номенклатуре СЭВ, ИСО: трефлан (нитран, олитреф, трифлуралин).

Химическое название: 2,6-динитро-4-трифторметил-N,N-дипропиланилин.

           NO

         _____/  2
    F O_//   \\___N(C H )
     3  \ ___ /      3 7 2

           NO
             2

Эмпирическая формула: C H F № O . 13 17 3 3 4

Молекулярная масса: 335,28.

    Физико-химические     свойства:    кристаллическое    вещество
желто-оранжевого  цвета; Т. пл. 48,5 - 49 °C, Т. кип. 139 - 140 °C

                                                            -6

при  4,2  мм рт. ст. Растворимость в 100 г воды при 27 °C 1 x 10
г.   Хорошо   растворим   в   ароматических   углеводородах  и  их
хлорпроизводных,  ацетоне,  этилацетате,  дихлорэтане. Растворим в

гексане.

Трефлан устойчив при хранении в темноте. В тонком слое и в растворе на солнечном свету разлагается.

МДУ в мг/кг: в луке, чесноке, капусте, томате, баклажанах, перце, сое, табаке, семенах подсолнечника — 0,5; моркови — 0,01; соевом и подсолнечном масле — 0,1.

Применяется в качестве гербицида в посевах хлопчатника, сои, гороха, подсолнечника, табака, фасоли, томатов. В смесевых препаратах применяется в посевах зерновых культур.

2. Методика определения трефлана в зеленой массе и зерне зерновых культур методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на извлечении трефлана из зеленой массы культур экстракцией органическим растворителем, очистке экстракта колоночной хроматографией и газохроматографическом определении на приборе с детектором по захвату электронов. Количественное определение проводят по методу абсолютной калибровки.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций 0,0005 — 1,25 мг/кг.

Предел обнаружения в анализируемом объеме 0,0001 мкг.

Предел обнаружения в пробе 0,0005 мг/кг.

Среднее значение определения стандартных количеств 92,7%.

Число параллельных определений n = 9.

Стандартное отклонение +/- 2,5%.

Относительное стандартное отклонение 0,03.

Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 1 составляет 92,7 +/- 1,6%.

2.1.3 Избирательность метода

Определению не мешают пестициды ряда феноксиалканкарбоновых кислот и тиокарбаматы.

2.2. Реактивы и материалы

Трефлан с содержанием основного вещества не менее 96%.

Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-74.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Алюминия оксид Л 40/250 щелочной для колоночной хроматографии производства ЧССР.

Насадка для хроматографической колонки — хроматон N-AW-DMCS (фр. 0,20 — 0,25 мм) с 5% ДС-550 фирмы «Хемапол».

Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ 9293-74, в баллоне с редуктором.

Бумага фильтровальная.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Хроматограф с детектором по захвату электронов.

Колонка стеклянная 200 x 0,3 см.

Колонка стеклянная 30 x 0,8 см.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Колбы мерные, цилиндры, мензурки, ГОСТ 1770-74.

Колбы грушевидные для отгонки растворителя вместимостью 100 мл, ГОСТ 25336-82.

Пипетки различной вместимости, ГОСТ 20292-74.

Воронки конусообразные, ГОСТ 25336-82.

Мельница лабораторная (кофемолка).

Микрошприц МИ-10М, ТУ 2-833-106.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Приготовление стандартных растворов

Стандартный раствор № 1 трефлана концентрации 1000 мкг/мл готовят в мерной колбе на 100 мл растворением навески 0,1 г в гексане.

Стандартные растворы № 2 — 7 трефлана концентрации 0,05; 0,10; 0,25; 0,50; 1,00 и 2,50 мкг/мл готовят в мерных колбах на 100 мл разбавлением 0,005; 0,010; 0,025; 0,050; 0,100 и 0,250 мл стандартного раствора № 1 гексаном.

Срок хранения растворов один месяц в холодильнике.

2.4.2 Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика трижды хроматографируют по 2 мкл стандартных растворов № 2 — 7 при условиях, описанных в разделе 2.6. Измеряют высоты пиков трефлана и по средним значениям трех измерений строят график зависимости высоты в мм от количества трефлана в аликвоте в нг.

2.4.3 Подготовка колонки для очистки экстракта

Стеклянную колонку 30 x 0,8 см заполняют при легком постукивании щелочным оксидом алюминия на высоту 10 см.

2.5. Отбор пробы

Отбор пробы проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР за № 2051-79 от 21 августа 1979 года.

2.6. Проведение определения

Навеску зеленой массы и зерна (20 г) измельчают на кофемолке.

Муку помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают 20 мл ацетонитрила, встряхивают в течение 0,5 ч и отфильтровывают под вакуумом. Экстракцию повторяют свежей порцией ацетонитрила (20 мл). Экстракты после фильтрации последовательно пропускают через бумажный фильтр и концентрируют до 0,5 — 1 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, затем до отсутствия ацетонитрила — в токе воздуха. Маслянистый остаток очищают колоночной хроматографией. До внесения экстракта колонку с оксидом алюминия промывают гексаном (10 мл). Остаток экстракта растворяют в 1 мл гексана и переносят в колонку. Колбу обмывают 3 раза 1 мл гексана и смывы также переносят в колонку. Растворитель отсасывают под вакуумом, трефлан элюируют в отгонную колбу со скоростью 60 — 80 капель в мин. 40 мл гексана. Элюат концентрируют до 0,5 — 10 мл и 2 мкл раствора хроматографируют на приборе с электронзахватным детектором при следующих условиях: -11

рабочая шкала электрометра — 9 x 10 А;

скорость протяжки картограммы — 200 мм/час;

колонка стеклянная длиной 200 см, диаметром 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-DMCS (фр. 0,20 — 0,25 мм) с 5% ДС-550;

температура в °C: термостата колонок — 180, испарителя — 250, детектора — 230;

расход газа-носителя в мл/мин.: через колонку — 40, через продувочную камеру детектора — 60;

объем раствора пробы, вводимый в испаритель, — 2 мкл;

линейность детектирования 0,1 — 5 нг;

абсолютное время удерживания — 2,11 мин.

Хроматографирование каждого экстракта проводят трижды, измеряют высоты пиков, вычисляют среднее значение высоты. По градуировочному графику и высоте пика находят количество трефлана в анализируемом объеме экстракта.

2.7. Обработка результатов анализа

Содержание трефлана в пробе (X) в мг/кг вычисляют по формуле:

                        А x V  x 100
                             2

X = ------------, V x P x R 1

где:

A — количество трефлана в хроматографируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочному графику, нг;

V — объем аликвоты раствора пробы, вводимой в прибор, мкл; 1

V — общий объем раствора пробы, мл; 2

P — навеска пробы, г;

R — среднее значение определения стандартных количеств

3. Требования безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Минздрава СССР», № 2455-81 от 20.10.81.

---