Методические указания по определению картолина-2 в биосубстратах методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6115-91)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КАРТОЛИНА-2 В БИОСУБСТРАТАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

(Дополнение к № 4355 от 08.06.87)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика вещества

Краткая характеристика представлена во Временных методических указаниях.

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на извлечении препарата из биосубстрата растворителем, очистке экстрактов и хроматографировании в тонком слое пластинок «Силуфол» с подвижной фазой гексан — ацетон в соотношении 15:12. Места локализации препарата обнаруживают обработкой пластинок водно-аммиачным раствором азотнокислого серебра или реактивом Эрлиха.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода определения картолина-2 в биосубстратах представлена в таблице 1.

Таблица 1

(ПРИ P = 0,95, N = 20)

Анализируемый объект	Метрологические параметры
	диапазон опр. концентраций, мкг/г (мл)	среднее значение процента обнаружения, %	стандартное отклонение, +/- %	доверительный интервал среднего значения, %
Кровь	0,2 — 2,0	77,4	+/- 7,2	15,5
Легкие	0,2 — 2,0	74,1	+/- 4,3	9,2
Селезенка	0,2 — 2,0	76,4	+/- 5,9	12,6
Сердце	0,2 — 2,0	81,55	+/- 4,2	9,1
Почки	0,2 — 2,0	76,25	+/- 4,8	10,2
Печень	0,2 — 2,0	70,90	+/- 3,2	6,8
Мозг	0,2 — 2,0	73,75	+/- 4,4	9,4
Моча	0,2 — 2,0	65,20	+/- 4,9	10,4
Кал	0,2 — 2,0	71,71	+/- 3,8	8,2

2.1.3 Избирательность метода

Определению не мешают хлорорганические и фосфорорганические пестициды, гербициды группы хлорзамещенных феноксиалканкарбоновых кислот и карбаматов.

2.2. Реактивы и материалы

Картолин-2, хч (содержание основного вещества не ниже 96%).

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-74.

Кислота хлористоводородная, хч, ГОСТ 3118-77.

Натрий сернокислый безводный, хч, ГОСТ 4166-76.

Этанол, хч, ГОСТ 5962-81.

Бутанол, чда, ГОСТ 6006-78.

Фильтры бумажные «синяя лента», ТУ 6-09-1678-77.

Азотнокислое серебро, хч, ГОСТ 1277-81.

Аммиак концентрированный, хч, ГОСТ 3760-79.

Стандартные растворы картолина-2 в ацетоне с содержанием препарата 100 и 1 мкг/мл. Растворы хранить в холодильнике не более трех месяцев.

п-Диметиламинобензальдегид, ч, ТУ 6-09-3272-77.

Водно-аммиачный раствор азотнокислого серебра. 0,85 г азотнокислого серебра помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в нескольких мл дистиллированной воды, прибавляют 2,5 мл концентрированного аммиака. Содержимое колбы перемешивают и доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Хранить проявляющий раствор в темной склянке не более двух недель.

Реактив Эрлиха (модифицированный). 1 г п-диметиламинобензальдегида растворяют в смеси 30 мл этанола, 3 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и 180 мл бутанола-1. Проявляющий раствор хранить в холодильнике три недели.

2.3. Приборы, посуда и аппаратура

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Колбы для отгонки растворителя, ГОСТ 25336-82.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Пластинки «Силуфол» UV-254 (ЧССР), 15 x 15 см.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Делительные воронки, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 50, 100 и 250 мл.

Пипетки, ГОСТ 1770-74, на 1, 5 и 10 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1 мл.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82.

Ртутно-кварцевая лампа ПРК-4, ТУ 16-336-280-74.

Сушильный шкаф ШС-40М, МРТУ 42-1359-67.

2.4. Отбор проб

Пробы отбирают в лабораторных условиях и сразу же помещают в испарительную камеру холодильника (-5 — 8 °C). Образцы хранят на льду не более пяти суток.

2.5. Описание определения

2.5.1 Экстракция и очистка

Легкие, сердце, печень, селезенка, почки, мозг, кровь и кал. 5 г кала или биосубстрата, тщательно измельченного ножницами, или 5 мл крови помещают в коническую колбу на 100 мл, заливают 50 мл хлороформа и оставляют на 2 — 3 часа, периодически перемешивая. Хлороформ осторожно сливают через фильтр «синяя лента» со слоем безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют еще 2 x 3 мл хлороформа и сливают туда же. Растворитель выпаривают досуха на ротационном испарителе при 60 — 70 °C и сухой остаток ацетонитрилом количественно переносят на пластинку для тонкослойного хроматографирования.

Моча. 5 мл мочи помещают в коническую колбу на 250 мл, разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:9 и подщелачивают 5% раствором едкого натра до pH 8. Сюда же добавляют 50 мл хлороформа и оставляют на 3 — 4 часа, периодически перемешивая. Растворитель отделяют от водной фазы в делительной воронке и сливают через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют 2 x 50 мл хлороформом. Объединенный экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе и переносят ацетонитрилом на пластинку.

2.5.2 Условия хроматографирования

Пластинку «Силуфол» с нанесенными пробами и стандартами картолина-2 известных количеств помещают в хроматографическую камеру со смесью гексан:ацетон в соотношении 15:12. После поднятия фронта растворителя на 10 — 12 см пластинку достают и сушат на воздухе.

Пластинки проявляют водно-аммиачным раствором азотнокислого серебра или реактивом Эрлиха. При проявлении раствором азотнокислого серебра пластинку предварительно помещают под УФ-лампу на 30 — 40 мин. После опрыскивания реактивом Эрлиха пластинку нагревают в сушильном шкафу при 120 °C в течение 15 — 20 мин.

Картолин-2 проявляется с R = 0,66 +/- 0,02 в виде коричневых f пятен при проявлении водно-аммиачным раствором азотнокислого

2.6. Обработка результатов анализа

Количество препарата в пробе определяют сравнением площадей пятна пробы и стандартных растворов по формуле:

                              A

X = -, P

где:

X — содержание препарата в пробе, мкг/г, мкг/мл;

A — количество препарата, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

---