--- title: "\"Временные методические указания по определению глуфосинат аммония (баста) в воде и растительных культурах методом тонкослойной хроматографии\"" number: "6106-91" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6106-91" --- ## "Временные методические указания по определению глуфосинат аммония (баста) в воде и растительных культурах методом тонкослойной хроматографии" # "Временные методические указания по определению глуфосинат аммония (баста) в воде и растительных культурах методом тонкослойной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6106-91) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6106-91
**ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГЛУФОСИНАТ АММОНИЯ (БАСТА) В ВОДЕ И** **РАСТИТЕЛЬНЫХ КУЛЬТУРАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. ## 1. Краткая характеристика Глуфосинат аммоний (баста), XOE 039866-DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфонат аммония (по номенклатуре ИЮПАК). O CH P-CH -CH -CH-COOH/ NH C H N O P. | 3 2 2 | 4 5 15 2 4 | | --- | --- | \\ NH O 2 М.м. 198,19. Белое кристаллическое вещество, температура плавления 215 °C. Растворим в воде, нерастворим в органических растворителях. ОДУ в воде водоемов 0,02 мг/л. Гербицид для борьбы с широким спектром одно- и многолетних двудольных и злаковых сорняков в овощеводстве, виноградарстве, садоводстве.
2. Методика определения глуфосината аммония (баста) в воде
и растительных культурах <*> --- <*> Примечание: методика разрабатывалась на яблоках различных сортов, кожуре цитрусовых, травянистой растительности, хвое, зерне, картофеле; при определении в других культурах необходимо предварительно провести анализ контрольной пробы исследуемого продукта. ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на концентрировании водного экстракта, очистке и выделении глуфосината аммония на колонке с полисорбом и определении препарата из аликвоты подготовленного экстракта хроматографией на пластинках "Силуфол" с обнаружением басты по реакции с нингидрином. ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода Минимально детектируемое количество - 0,1 мкг. Нижний предел определения: вода - 0,025 мг/л растения: овощи, фрукты - 0,1 мг/кг зерно - 0,2 мг/кг зеленая масса (травянистая растительность, хвоя) - 0,5 мг/кг Размах варьирования, %: вода - 70 - 102 растения - 66 - 105 Среднее значение определения, %: вода - 87 растения - 83 Стандартное отклонение, %: вода - 5,6 растения - 6,4 Доверительный интервал среднего при p = 0,95, n = 5: вода +/- 15,6 растения +/- 18 Поправочный коэффициент, учитывающий потери при концентрировании вымораживанием до 2 - 3 мл, равен 1,2. ##### 2.1.3 Избирательность метода Определению не мешают другие ФОП, в том числе водорастворимые, глифосат фосфамид. Определению могут мешать водорастворимые коэкстрактивные вещества, содержащие аминогруппу. В связи с этим проводится ТСХ-анализ контрольного образца исследуемой культуры, как описано ниже [(п. 2.5.1)](#p100078). ### 2.2. Реактивы и растворы Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79. н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78. Полисорб С-60/100, ТУ 6-05-211-1313-86. Метанол, хч, [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77). Аммиак водный, 25%, ч, ГОСТ 3760-79. Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-81. Этанол 96%, ГОСТ 5962-81. Медь сернокислая, чда, ГОСТ 19347-84, прокаленная при t = 160 °C до светло-голубого цвета. Натрия хлорид, ч, ГОСТ 4233-77. Диэтиловый эфир медицинский, ГОСТ 6265-74. Вата обезжиренная (промытая эфиром). Бинт или марля. Глуфосинат аммоний с содержанием основного вещества не менее 99%. Основной стандартный раствор (ОСР) глуфосината аммония: 100 мг вещества растворяют в 100 мл 1-процентного водного раствора аммиака. Раствор хранить в холодильнике не более 3-х месяцев. Рабочие стандартные растворы 1 - 100, 2 - 10 мкг/мл, 3 - 1 мкг/мл готовят разведением ОСР 1-процентным раствором аммиака. Растворы хранить в холодильнике не более 2-х недель. Проявляющий реагент: 2-процентный раствор нингидрина в ацетоне. Хранить в темной склянке. ### 2.3. Приборы и посуда Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-11081-83. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с набором колб, ТУ 25-11-917-74. Вакуумный водоструйный насос. Колба Бунзена емк. 250 мл, ГОСТ 25336-82. Воронка Бюхнера, d = 75 мм, ГОСТ 9147-80. Электроплитка с закрытой спиралью. Холодильник бытовой с морозильной камерой. Колбы конические, 250, 50 мл, ГОСТ 25336-82. Колбы мерные, 100, 50 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Цилиндры мерные,50,100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Пробирки мерные, 10 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Выпарительные чашки 40 - 50 мл, ГОСТ 9147-80. Колонки хроматографические, альфа = 18 мм, высота 20 см. Пипетки на 1 - 10 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Микропипетки на 0,1; 0,2 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), или дозаторы пипеточные на 0,1; 0,2 мл, III, ТУ 84-1-3329-81, или шприц на 1 мл. ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79. ### 2.5. Проведение определения ##### 2.5.1 Экстракция глуфосината аммония из воды и растений Вода. 200 мл анализируемой пробы помещают в круглодонную колбу емкостью 500 мл. Присоединяют колбу к ротационному испарителю, помещают ее в баню с мелко раздробленным льдом с солью (10:3) <*>. Вращают колбу на ротационном испарителе (без включения вакуума), чтобы вода в колбе начала кристаллизоваться. Кристаллизацию проводят до тех пор, пока в колбе не останется ~= 20 мл воды. Оставшуюся воду переносят в отгонную колбу емкостью 50 - 100 мл и продолжают кристаллизацию до тех пор, пока в колбе не останется 2 - 3 мл. Быстро сливают воду в мерную пробирку (V ). Либо 1 оставшуюся воду (~= 20 мл) сливают в выпарительную чашку и упаривают на кипящей водяной бане до объема ~= 2 мл. (Осторожно! Не выпаривать досуха, чашку периодически ополаскивают водой, оставшейся в чашке.) Переносят оставшуюся воду в мерную пробирку. Измеряют объем (V ). Отбирают 1 мл пробы, прибавляют к нему 1 мл 1 этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают, дают отстояться и аликвоту 0,1 - 0,3 мл наносят на хроматографическую пластинку. --- <*> Примечание: приготовленную смесь лед с солью можно повторно заморозить в холодильнике, чтобы использовать в дальнейшем. Растительные продукты. Овощи, фрукты, траву измельчают до 0,5 - 1 см, зерно до 2 - 3 мм (отсеивают от муки) и отбирают среднюю пробу: овощи, фрукты - 100 г, трава - 20 г, зерно - 50 г. Пробу помещают в плоскодонную колбу и заливают точно измеренным объемом воды: овощи, фрукты - 150 мл, траву, зерно - 100 мл. Встряхивают пробу в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Отбирают часть экстракта (овощи, фрукты - 80 - 90 мл, зерно, трава - 60 - 70 мл), фильтруя его под вакуумом водоструйного насоса в колбу Бунзена через двойной слой марли, вложенной в воронку Бюхнера. Из колбы Бунзена отбирают в цилиндр точно половину прибавленного к исследуемому образцу объема воды: овощи, фрукты - 75 мл (соответствует массе "P" - 50 г), трава, зерно - 50 мл (масса 10 и 25 г соответственно). Измеренный водный экстракт переносят в делительную воронку и промывают этилацетатом 2 x 30 мл; этилацетат (верхний слой) отбрасывают. Водный экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей емкостью 100 - 150 мл и концентрируют вымораживанием до 2 - 3 мл, как описано для воды. Далее проводят очистку образца на колонке, как описано ниже. Одновременно с анализируемым образцом подготавливают экстракт аналогичного контрольного образца. Очистку экстрактов проводят на колонке с полисорбом. Подготовка колонки. Колонку присоединяют к колбе Бунзена, соединенной с водоструйным насосом. В колонку помещают тампон из обезжиренной ваты, насыпают 15 куб. см полисорба, наливают 10 мл ацетона и включают водоструйный насос. Затем на слой полисорба помещают ватный тампон и промывают слой еще 40 мл ацетона при легком просасывании водоструйным насосом, чтобы полностью удалить ацетон. Затем насос отключают. К подготовленному, как описано выше, экстракту (2 - 3 мл) прибавляют 50 мл ацетона и хорошо перемешивают. Пропускают полученный ацетоновый раствор через колонку под вакуумом водоструйного насоса, промывают колонку 20 мл ацетона (под вакуумом), затем 20 мл смеси ацетон - вода 9:1 (под вакуумом) и весь элюат отбрасывают. Колбу отключают от вакуума, пропускают через колонку 15 мл воды при прокапывании без отсоса. Когда над слоем сорбента останется ~ 0,5 см воды, подключают колбу с колонкой к водоструйному насосу. Сливают элюат из колбы в мерную пробирку и измеряют точно объем - V - (должно быть ~ 10 мл). 1 Отбирают 1 мл экстракта, прибавляют к нему 1 мл этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают, дают отстояться и аликвоту 0,1 - 0,2 мл анализируют методом ТСХ. Примечание: можно (за исключением образцов, содержащих крахмал, например картофеля, зерна) вместо концентрирования вымораживанием использовать только способ концентрирования упариванием, но при этом использовать небольшие выпарительные чашки, а пробу доливать в чашку по мере упаривания. Упаривать осторожно, чтобы остаток в чашке каждый раз был не менее 2 мл. При этом способе концентрирования перед очисткой на колонке экстракт в чашке (2 - 3 мл) охлаждают 10 минут в холодильнике (t +4 - 6 °C). К охлажденному экстракту прибавляют ацетон, как описано ниже. Одновременно готовят элюат контрольного образца. Из полученного контрольного элюата (10 мл) отбирают в две пробирки по 1 мл, в одну из которых прибавляют микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония (0,1 мл рабочего стандартного раствора 2). Если нет возможности подготовить экстракт контрольного образца (см. [п. 2.1.3](#p100039)), то обязательно от полученного элюата исследуемого образца отбирают 1 мл и прибавляют в него микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония. Далее прибавляют по 1 мл этанола и поступают, как описано выше для исследуемого образца. ##### 2.5.2 Тонкослойная хроматография Пластинку "Силуфол" размером 15 x 15 см делят на 5 полосок шириной 3 см. С нижнего края пластинки, на расстоянии 1,5 см от края, по центру каждой полосы наносят микропипеткой (шприцом) или пипеточным дозатором по 0,2 мл контрольного элюата, элюата с внесенным глуфосинатом аммония, элюата исследуемого образца, 0,2 мл рабочего стандартного раствора 3, что соответствует 0,2 мкг, и 0,1 мл рабочего стандартного раствора 2, что соответствует 1 мкг. Пластинку при нанесении проб и стандартов для более быстрого испарения воды можно подогревать на электрогрелке. Когда вода испарится, пластинку помещают в хроматографическую камеру, в которую налита смесь метанол - аммиак (7:3). Дают растворителю подняться на 10 см от старта и вынимают пластинку из камеры. Помещают ее под УФ-свет на 25 минут, располагая на расстоянии 20 *см* от источника света. После облучения опрыскивают пластинку проявляющим реагентом и помещают на 1 мин. в сушильный шкаф при температуре 40 °C. Затем вынимают из шкафа и оставляют при комнатной температуре (исключить прямое попадание солнечного света). Через 5 - 7 минут проявляются сиренево-красного цвета пятна глуфосината аммония с R 0,7 +/- 0,5, в том числе стандарт, f внесенный в контрольный экстракт (или элюат исследуемого образца). Сразу после проявления стандартов проводится оценка содержания пестицида в исследуемом образце. Примечание: при увеличении температуры и времени прогрева, а также при более длительном хранении (уже после проявления стандартов) в некоторых образцах проявляются коэкстрактивные вещества с R 0,68 +/- 0,05 и 0,72 +/- 0,05, 0,5 +/- 0,05.
f
### 2.6. Обработка результатов анализа Количественное определение проводится путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и пятен стандартных растворов. При этом следует обратить внимание на пятно стандарта, содержащего 0,2 мкг, и пятно, где 0,2 мкг внесено в пробу. Наиболее точно (ошибка +/- 11%) количественная оценка достигается при концентрациях 0,2 - 1 мкг. При большем содержании баста в исследуемом образце необходимо разбавить элюат (исходный объем V = 10 мл) и повторить ТСХ-определение, как описано выше в 1 [п. 2.5.2](#p100089). Расчет результатов содержания баста в образце проводят по следующей формуле: A x V x B x K 1 X = --------------, V x P 2 где: X - содержание баста в образце, мг/кг; A - содержание баста, найденное в образце на пластинке, мкг; V - общий объем водного элюата, мл; 1 B - кратность разведения V ; 1 V - объем этанольного экстракта, нанесенного на пластинку, 2 мл; P - масса анализируемой пробы, мл или г (для растений с учетом взятой аликвоты соответствует 1/2 навески); K - коэффициент, учитывающий потери при концентрировании
вымораживанием до объема 2 - 3 мл, равен 1,2.
## 3. Техника безопасности Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами. ---