Временные методические указания по определению глуфосинат аммония (баста) в воде и растительных культурах методом тонкослойной хроматографии
Актуально на 02.11.2026.
Как цитировать: "Временные методические указания по определению глуфосинат аммония (баста) в воде и растительных культурах методом тонкослойной хроматографии". 6106-91. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6106-91
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6106-91)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
29 июля 1991 г. № 6106-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГЛУФОСИНАТ АММОНИЯ (БАСТА) В ВОДЕ И РАСТИТЕЛЬНЫХ КУЛЬТУРАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика
Глуфосинат аммоний (баста), XOE 039866-DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфонат аммония (по номенклатуре ИЮПАК).
O
CH P-CH -CH -CH-COOH/ NH C H № O P.
| 3 2 2 | 4 5 15 2 4 |
|---|
\\ NH O 2 М.м. 198,19.
Белое кристаллическое вещество, температура плавления 215 °C.
Растворим в воде, нерастворим в органических растворителях. ОДУ в воде водоемов 0,02 мг/л.
Гербицид для борьбы с широким спектром одно- и многолетних двудольных и злаковых сорняков в овощеводстве, виноградарстве, садоводстве.
и растительных культурах <*>
<*> Примечание: методика разрабатывалась на яблоках различных сортов, кожуре цитрусовых, травянистой растительности, хвое, зерне, картофеле; при определении в других культурах необходимо предварительно провести анализ контрольной пробы исследуемого продукта.
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на концентрировании водного экстракта, очистке и выделении глуфосината аммония на колонке с полисорбом и определении препарата из аликвоты подготовленного экстракта хроматографией на пластинках «Силуфол» с обнаружением басты по реакции с нингидрином.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество — 0,1 мкг.
зеленая масса (травянистая растительность, хвоя) — 0,5 мг/кг
Среднее значение определения, %:
Доверительный интервал среднего при p = 0,95, n = 5:
Поправочный коэффициент, учитывающий потери при концентрировании вымораживанием до 2 — 3 мл, равен 1,2.
2.1.3 Избирательность метода
Определению не мешают другие ФОП, в том числе водорастворимые, глифосат фосфамид. Определению могут мешать водорастворимые коэкстрактивные вещества, содержащие аминогруппу. В связи с этим проводится ТСХ-анализ контрольного образца исследуемой культуры, как описано ниже (п. 2.5.1).
2.2. Реактивы и растворы
н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Полисорб С-60/100, ТУ 6-05-211-1313-86.
Метанол, хч, ГОСТ 6995-77.
Аммиак водный, 25%, ч, ГОСТ 3760-79.
Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-81.
Медь сернокислая, чда, ГОСТ 19347-84, прокаленная при t = 160 °C до светло-голубого цвета.
Натрия хлорид, ч, ГОСТ 4233-77.
Диэтиловый эфир медицинский, ГОСТ 6265-74.
Вата обезжиренная (промытая эфиром).
Глуфосинат аммоний с содержанием основного вещества не менее 99%.
Основной стандартный раствор (ОСР) глуфосината аммония: 100 мг вещества растворяют в 100 мл 1-процентного водного раствора аммиака. Раствор хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.
Рабочие стандартные растворы 1 — 100, 2 — 10 мкг/мл, 3 — 1 мкг/мл готовят разведением ОСР 1-процентным раствором аммиака.
Растворы хранить в холодильнике не более 2-х недель.
Проявляющий реагент: 2-процентный раствор нингидрина в ацетоне. Хранить в темной склянке.
2.3. Приборы и посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-11081-83.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с набором колб, ТУ 25-11-917-74.
Колба Бунзена емк. 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Воронка Бюхнера, d = 75 мм, ГОСТ 9147-80.
Электроплитка с закрытой спиралью.
Холодильник бытовой с морозильной камерой.
Колбы конические, 250, 50 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные, 100, 50 мл, ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные,50,100 мл, ГОСТ 1770-74.
Пробирки мерные, 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Выпарительные чашки 40 — 50 мл, ГОСТ 9147-80.
Колонки хроматографические, альфа = 18 мм, высота 20 см.
Пипетки на 1 — 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Микропипетки на 0,1; 0,2 мл, ГОСТ 1770-74, или дозаторы пипеточные на 0,1; 0,2 мл, III, ТУ 84-1-3329-81, или шприц на 1 мл.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, № 2051-79.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция глуфосината аммония из воды и растений
Вода. 200 мл анализируемой пробы помещают в круглодонную колбу емкостью 500 мл. Присоединяют колбу к ротационному испарителю, помещают ее в баню с мелко раздробленным льдом с солью (10:3) <*>.
Вращают колбу на ротационном испарителе (без включения вакуума), чтобы вода в колбе начала кристаллизоваться. Кристаллизацию проводят до тех пор, пока в колбе не останется ~= 20 мл воды. Оставшуюся воду переносят в отгонную колбу емкостью 50 - 100 мл и продолжают кристаллизацию до тех пор, пока в колбе не останется 2
- 3 мл. Быстро сливают воду в мерную пробирку (V ). Либо 1
оставшуюся воду (~= 20 мл) сливают в выпарительную чашку и упаривают на кипящей водяной бане до объема ~= 2 мл. (Осторожно! Не выпаривать досуха, чашку периодически ополаскивают водой, оставшейся в чашке.) Переносят оставшуюся воду в мерную пробирку. Измеряют объем (V ). Отбирают 1 мл пробы, прибавляют к нему 1 мл
1
этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают, дают отстояться и аликвоту 0,1 — 0,3 мл наносят на хроматографическую пластинку.
<*> Примечание: приготовленную смесь лед с солью можно повторно заморозить в холодильнике, чтобы использовать в дальнейшем.
Растительные продукты. Овощи, фрукты, траву измельчают до 0,5 — 1 см, зерно до 2 — 3 мм (отсеивают от муки) и отбирают среднюю пробу: овощи, фрукты — 100 г, трава — 20 г, зерно — 50 г. Пробу помещают в плоскодонную колбу и заливают точно измеренным объемом воды: овощи, фрукты — 150 мл, траву, зерно — 100 мл. Встряхивают пробу в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Отбирают часть экстракта (овощи, фрукты — 80 — 90 мл, зерно, трава — 60 — 70 мл), фильтруя его под вакуумом водоструйного насоса в колбу Бунзена через двойной слой марли, вложенной в воронку Бюхнера. Из колбы Бунзена отбирают в цилиндр точно половину прибавленного к исследуемому образцу объема воды: овощи, фрукты — 75 мл (соответствует массе «P» — 50 г), трава, зерно — 50 мл (масса 10 и 25 г соответственно). Измеренный водный экстракт переносят в делительную воронку и промывают этилацетатом 2 x 30 мл; этилацетат (верхний слой) отбрасывают. Водный экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей емкостью 100 — 150 мл и концентрируют вымораживанием до 2 — 3 мл, как описано для воды. Далее проводят очистку образца на колонке, как описано ниже.
Одновременно с анализируемым образцом подготавливают экстракт аналогичного контрольного образца.
Очистку экстрактов проводят на колонке с полисорбом.
Подготовка колонки. Колонку присоединяют к колбе Бунзена, соединенной с водоструйным насосом. В колонку помещают тампон из обезжиренной ваты, насыпают 15 куб. см полисорба, наливают 10 мл ацетона и включают водоструйный насос. Затем на слой полисорба помещают ватный тампон и промывают слой еще 40 мл ацетона при легком просасывании водоструйным насосом, чтобы полностью удалить ацетон. Затем насос отключают.
К подготовленному, как описано выше, экстракту (2 - 3 мл) прибавляют 50 мл ацетона и хорошо перемешивают. Пропускают полученный ацетоновый раствор через колонку под вакуумом водоструйного насоса, промывают колонку 20 мл ацетона (под вакуумом), затем 20 мл смеси ацетон - вода 9:1 (под вакуумом) и весь элюат отбрасывают. Колбу отключают от вакуума, пропускают через колонку 15 мл воды при прокапывании без отсоса. Когда над слоем сорбента останется ~ 0,5 см воды, подключают колбу с колонкой к водоструйному насосу. Сливают элюат из колбы в мерную пробирку и измеряют точно объем - V - (должно быть ~ 10 мл).
1
Отбирают 1 мл экстракта, прибавляют к нему 1 мл этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают, дают
отстояться и аликвоту 0,1 — 0,2 мл анализируют методом ТСХ.
Примечание: можно (за исключением образцов, содержащих крахмал, например картофеля, зерна) вместо концентрирования вымораживанием использовать только способ концентрирования упариванием, но при этом использовать небольшие выпарительные чашки, а пробу доливать в чашку по мере упаривания. Упаривать осторожно, чтобы остаток в чашке каждый раз был не менее 2 мл. При этом способе концентрирования перед очисткой на колонке экстракт в чашке (2 — 3 мл) охлаждают 10 минут в холодильнике (t +4 — 6 °C). К охлажденному экстракту прибавляют ацетон, как описано ниже.
Одновременно готовят элюат контрольного образца. Из полученного контрольного элюата (10 мл) отбирают в две пробирки по 1 мл, в одну из которых прибавляют микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония (0,1 мл рабочего стандартного раствора 2). Если нет возможности подготовить экстракт контрольного образца (см. п. 2.1.3), то обязательно от полученного элюата исследуемого образца отбирают 1 мл и прибавляют в него микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония. Далее прибавляют по 1 мл этанола и поступают, как описано выше для исследуемого образца.
2.5.2 Тонкослойная хроматография
Пластинку "Силуфол" размером 15 x 15 см делят на 5 полосок шириной 3 см. С нижнего края пластинки, на расстоянии 1,5 см от края, по центру каждой полосы наносят микропипеткой (шприцом) или пипеточным дозатором по 0,2 мл контрольного элюата, элюата с внесенным глуфосинатом аммония, элюата исследуемого образца, 0,2 мл рабочего стандартного раствора 3, что соответствует 0,2 мкг, и 0,1 мл рабочего стандартного раствора 2, что соответствует 1 мкг. Пластинку при нанесении проб и стандартов для более быстрого испарения воды можно подогревать на электрогрелке. Когда вода испарится, пластинку помещают в хроматографическую камеру, в которую налита смесь метанол - аммиак (7:3). Дают растворителю подняться на 10 см от старта и вынимают пластинку из камеры. Помещают ее под УФ-свет на 25 минут, располагая на расстоянии 20 *см* от источника света. После облучения опрыскивают пластинку проявляющим реагентом и помещают на 1 мин. в сушильный шкаф при температуре 40 °C. Затем вынимают из шкафа и оставляют при комнатной температуре (исключить прямое попадание солнечного света). Через 5 - 7 минут проявляются сиренево-красного цвета пятна глуфосината аммония с R 0,7 +/- 0,5, в том числе стандарт,
f
внесенный в контрольный экстракт (или элюат исследуемого образца). Сразу после проявления стандартов проводится оценка содержания пестицида в исследуемом образце.
Примечание: при увеличении температуры и времени прогрева, а также при более длительном хранении (уже после проявления стандартов) в некоторых образцах проявляются коэкстрактивные вещества с R 0,68 +/- 0,05 и 0,72 +/- 0,05, 0,5 +/- 0,05.
f
2.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводится путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и пятен
стандартных растворов. При этом следует обратить внимание на пятно
стандарта, содержащего 0,2 мкг, и пятно, где 0,2 мкг внесено в пробу. Наиболее точно (ошибка +/- 11%) количественная оценка достигается при концентрациях 0,2 - 1 мкг. При большем содержании баста в исследуемом образце необходимо разбавить элюат (исходный объем V = 10 мл) и повторить ТСХ-определение, как описано выше в
1
Расчет результатов содержания баста в образце проводят по следующей формуле:
A x V x B x K
1
X — содержание баста в образце, мг/кг;
A — содержание баста, найденное в образце на пластинке, мкг;
V — общий объем водного элюата, мл; 1
B — кратность разведения V ; 1
V — объем этанольного экстракта, нанесенного на пластинку, 2 мл;
P — масса анализируемой пробы, мл или г (для растений с учетом взятой аликвоты соответствует 1/2 навески);
K — коэффициент, учитывающий потери при концентрировании
вымораживанием до объема 2 — 3 мл, равен 1,2.
3. Техника безопасности
Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами.