Временные методические указания по определению суми-альфа в биологическом материале методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6101-91)

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СУМИ- \alpha В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Суми- \alpha — S-альфа-циано-3-феноксибензил(S)-2-(4-хлорфенил)- 3-метилбутират. Суми- \alpha представляет собой смесь изомеров, обогащенную эсфенвалератом. Эсфенвалерат — оптический изомер фенвалерата. Другим основным изомером суми- \alpha является (R)-альфа-циано-3-феноксибензил(S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират. Суми- \alpha — жидкость или твердое вещество коричневого цвета, без специфического запаха. Т. кип. 225 °C/1,7 мм рт. ст., летучесть -7

при  20  °C 1,44 x 10   мм рт. ст. Почти нерастворим в воде, менее
1,0 ч./млн. Растворимость в органических  растворителях при 25 °C,
в % вес/объем: ксилол  -  45,0;  хлороформ -  45,0; ацетон - 45,0;

этилацетат — 45,0.

            CH   CH                              C  H  ClNO .
              3    3                              25 22    3

           \/

CH //\ //\ Мол. масса 419,9.

<pre class="legal-pre">        _____   │          //  \    //  \
    Cl_//   \\_CH___COOCH__│   ││-O-│   ││
       \ ___ /        │    \\  /    \\  /
         ───          CN    \\/      \\/</pre>

    Предложен  в качестве инсектицида  для  борьбы  с  вредителями
овощных  культур, плодовых  деревьев.  ЛД   для крыс 325 мг/кг (по

                                     50

данным фирмы Сумитомо).

в биологическом материале

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на определении суми- \alpha методом газожидкостной хроматографии после экстракции препарата из анализируемой пробы органическим растворителем и очистки экстрактов в системе жидкость — жидкость.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода определения суми- \alpha (ГЖХ)

Анализируемый объект	Размах варьирования	Среднее значение определения	Относительное стандартное отклонение	Доверительный интервал среднего, %
Кровь Печень Мозг Сальник	64 — 72 59 — 64 58 — 65 66 — 69	67,4 61,4 62,0 67,2	4,99 4,5 4,45 2,03	+/- 4,95 +/- 4,50 +/- 4,49 +/- 3,16

Диапазон определяемых концентраций 0,05 — 0,5 мг/кг (мг/л).

Предел обнаружения 0,005 мг/кг (мг/л).

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, осч 95, ТУ 6-09-3513-86.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77.

Трихлоруксусная кислота, ТУ 6-09-1926-77, 20%-ный водный раствор.

Сульфат натрия, ч, ГОСТ 4166-76, 5%-ный водный раствор.

Сульфат натрия безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Хроматон N-AW-HMDS (0,16 — 0,20 мм) с нанесенной неподвижной фазой SE-30 (Хемапол, ЧССР).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором.

Суми- \alpha — 96,5%, фирма «Сумитомо».

Основной рабочий стандартный раствор суми- \alpha , содержащий 100 мкг/мл суми- \alpha , готовят следующим образом: растворяют 10,36 мг суми- \alpha (96,5%) в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Стандартный рабочий раствор, содержащий 1 мкг/мл суми- \alpha , получают соответствующим разбавлением основного рабочего раствора. Хранят в холодильнике не более 5-ти месяцев.

Уксусная кислота, хч, ГОСТ 61-69.

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов (тип «Цвет-106» или др.).

Ротационный вакуумный испаритель для отгонки растворителей типа ИР-11, ТУ 25-11-917-76.

Микрошприцы МШ-10М, 10 мкл, ТУ 2-833-106.

Микроизмельчитель тканей, тип РТ-2, ТУ 64-1-1505-79.

Аппарат для встряхивания, ТУ 25-11-917-79, или аналогичный.

Центрифуга с числом оборотов до 6000 в мин.

Центрифуга ОПН-3442, ТУ 5-375-4260-76.

Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.

Воронки делительные емкостью 200, 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы конические емкостью на 100, 300 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 25336-82.

Воронки конические, ГОСТ 25336-82.

Воронки Бюхнера, ГОСТ 25336-82.

Колба Бунзена, ГОСТ 25336-82.

Секундомер СД СПР 1.200, ГОСТ 5072-79.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб

2.4.1. Пробы (кровь, печень, мозг, сальник, моча) отбирают в лабораторных условиях и сразу же помещают их в испарительную камеру холодильника. Хранят на льду не более 3 суток.

2.5. Проведение определения

2.5.1 Экстракция и очистка экстрактов

Биологический материал. Пробу биоматериала (кровь, печень, мозг, сальник, моча), предварительно измельченную ножницами, переносят в сосуд для гомогенизации и заливают 50 мл метанола или 50 мл смеси ацетон:вода (4:1). Биоматериал измельчают на микроизмельчителе тканей в течение 3 — 5 мин. при 3000 об./мин. Гомогенизированную пробу помещают в коническую колбу на 100 мл и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 часа (дважды по 30 мин.). Объединенный экстракт фильтруют через воронку Бюхнера. Фильтрат обрабатывают 20%-ным раствором трихлоруксусной кислоты или уксусной кислотой по 1 мл на каждый грамм ткани или мл крови и 10 мл воды и смесь помещают в испарительную камеру холодильника на 1 час. Затем к охлажденной смеси прибавляют по 10 — 15 мл 5%-ного водного раствора сульфата натрия и центрифугируют при 4000 — 5000 об./мин. в течение 10 — 15 мин. или фильтруют через воронку Бюхнера в вакууме водоструйного насоса. Центрифугат экстрагируют гексаном (3 x 20 мл). Объединенные гексановые экстракты промывают дистиллированной водой, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе. Последние порции растворителя удаляют при помощи сжатого воздуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона, выдерживают в холодильнике 2 — 3 часа и затем центрифугируют при 2000 об./мин. в течение 15 мин. Полученный указанным способом центрифугат анализируют на газожидкостном хроматографе.

2.5.2 Идентификация и количественное определение суми- \alpha .

2.5.3 Метод газожидкостной хроматографии

Носитель — хроматон N-AW-HMDS.

Неподвижная фаза — 5% SE-30.

Колонка стеклянная 0,5 м x 3 мм.

Скорость газа-носителя (азота) 60 куб. см/мин. («Цвет-106»).

Скорость азота для продувки детектора 150 мл/мин. -12

Шкала электрометра 20 x 10 А.

Температура колонки 220 °C.

Температура испарителя 240 °C.

Вводимый объем 2 мкл.

Линейный диапазон детектирования 0,5 — 50 нг.

Минимально детектируемое количество 0,5 нг.

Время удерживания при указанных условиях 10,8 мин.

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом путем сравнения рассчитываемого пика с пиком, полученным введением известного количества стандартного вещества, при условии, что величина пиков находится в диапазоне линейности детектора. Содержание суми- \alpha в анализируемой пробе определяют по формуле:

                          C  x V  x H  x V
                           1    1    2

X = ----------------,

                            H  x V  x P
                             1    2

где:

X — содержание суми- \alpha в пробе, мкг/г, мкг/мл;

C — концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

H — высота пика стандартного раствора, мм; 1

H — высота пика пробы, мм; 2

V — объем стандартного раствора, введенный в хроматограф, 1 мкл;

V — объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл; 2

V — общий объем экстракта после упаривания, мл;

3. Техника безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими и токсическими веществами.

---