Временные методические указания по хроматографическому определению ивина и его метаболита 2,6-лутидина в воде, овощах (картофель, огурцы, томаты)
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6079-91)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
29 июля 1991 г. № 6079-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ИВИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТА 2,6-ЛУТИДИНА В ВОДЕ, ОВОЩАХ (КАРТОФЕЛЬ, ОГУРЦЫ, ТОМАТЫ)
определению ивина в воде и овощах» № 4327-87 от 08.06.87)
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика соединений
Ивин — N-окись 2,6-диметилпиридина
/\
// \ C H NO. // \ 7 9 /\\ /\ М.м. 123,18. H C \\N/ CH 3 \/ 3
O
Химически чистое вещество представляет собой бесцветную жидкость со слабым специфическим запахом с температурой кипения 240 °C. Легко растворяется в воде, спирте, хлороформе, ацетоне и других органических растворителях.
Ивин — малотоксичное соединение (ЛД для крыс составляет 1717 50 мг/кг, для мышей — 1497 мг/кг).
Препарат применяется в виде водных растворов для предпосевной обработки семян овощных культур или клубней картофеля.
ПДК в воде водоемов 0,02 мг/л, МДУ в овощах 0,04 мг/кг.
//\
| 7 9 |
|---|
/\\ /\ H C \\/ CH М.м. 107,15.
| 3 | 3 |
|---|
N
Химически чистое вещество представляет собой бесцветную жидкость с пиридиновым специфическим запахом. Температура кипения 144 °C. Растворим в спирте, ацетоне, воде, хлороформе, диэтиловом эфире.
ПДК в воде водоемов и МДУ в пищевых продуктах не установлены.
2. Методика определения ивина и его метаболита 2,6-лутидина в воде, овощах
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Методика основана на извлечении ивина и 2,6-лутидина из подщелоченных проб органическим растворителем, концентрировании экстрактов, кислотной очистке (овощи) и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Зоны локализации обнаруживаются раствором бромкрезолового пурпурного после ультрафиолетового облучения пластинок.
2.1.2 Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии близких по области применения и структуре следующих соединений: гидрела, дигидрела, хлорхолинхлорида, морфола, морфонола, алара, гиббереллина и некоторых производных пиридина-нитрапирина, 6-хлорпиколиновой кислоты, 2-пиколиновой кислоты, 2,6-дипиколиновой кислоты.
2.1.3 Метрологическая характеристика методики (n = 5, p = 0,95)
| Анализируемый | Метрологические параметры | |||||
| объект | предел опред., мг/кг | диапазон определяемых конц., мг/кг (л) | средний % обнаружения _ с | стандартное отклонение _ S | доверит. интервал E | относительное стандартное отклонение Sr, % |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| Ивин | ||||||
| Вода Картофель Томаты Огурцы | 0,02 0,08 0,08 0,08 | 0,02 — 0,1 0,08 — 0,1 0,08 — 0,1 0,08 — 0,1 | 98,4 94,0 93,0 94,0 | +/- 2,78 +/- 3,08 +/- 2,25 +/- 3,37 | +/- 1,297 +/- 3,820 +/- 2,780 +/- 4,170 | +/- 2,82 +/- 3,00 +/- 2,42 +/- 3,58 |
| 2,6-лутидин | ||||||
| Вода Картофель Томаты Огурцы | 0,04 0,08 0,08 0,08 | 0,04 — 0,1 0,08 — 0,1 0,08 — 0,1 0,08 — 0,1 | 97,0 85,0 81,0 83,0 | +/- 2,69 +/- 1,69 +/- 2,83 +/- 2,74 | +/- 3,78 +/- 1,97 +/- 1,17 +/- 1,13 | +/- 2,76 +/- 1,88 +/- 3,49 +/- 3,30 |
2.2. Реактивы и материалы
Ивин, хч. Стандартный раствор в ацетоне, содержащий 100 мкг/мл, хранят в холодильнике не более 3-х месяцев.
2,6-лутидин, хч. Стандартный раствор в ацетоне, содержащий 100 мкг/мл, хранят в холодильнике не более одного месяца.
Натр едкий, хч, ГОСТ 4328-77, 15-процентный водный раствор.
Хлористоводородная кислота конц., ч, ГОСТ 3118-77, 1М водный раствор.
Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Бромкрезоловый пурпурный, чда, ТУ 6-09-1386-76, 0,3% раствор в 80% этиловом спирте с добавлением на 100 мл 1,5 мл 15% раствора натра едкого.
Этиловый спирт, хч, ТУ 6-1710-77.
Бутиловый спирт, чда, ГОСТ 6006-78.
Муравьиная кислота, чда, ГОСТ 5848-73.
Пластинки хроматографические «Силуфол» UV-254 (ЧССР) размером 15 x 15.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.
Прибор для отгонки растворителей, ТУ 25-11-917-76, тип ИР-1М.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Колбы конические, ГОСТ 20292-74, на 250 мл.
Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.
Воронки делительные, ГОСТ 23932-79, вместимостью 500 мл.
Воронки химические, ГОСТ 23932-79.
Микропипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Цилиндры мерные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-79.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы анализировать сразу.
2.5. Описание определения
2.5.1 Экстракция
Вода. 50 мл воды помещают в коническую колбу, добавляют 2 мл 15-процентного раствора натра едкого и экстрагируют хлороформом (30 мл) на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Экстракцию повторяют еще дважды по 20 мл хлороформом. Объединенный хлороформный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе досуха при температуре 30 °C. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку при помощи ацетона (3 x 0,5 мл) и хроматографируют.
Овощи (картофель, огурцы, томаты). 25 г пробы измельчают, помещают в плоскодонную колбу, добавляют 2 мл 15-процентного раствора натра едкого, заливают 30 мл хлороформа и оставляют на 2 часа, периодически интенсивно встряхивая. Экстракцию повторяют еще дважды хлороформом по 30 мл. Объединенные экстракты отфильтровывают через фильтр с безводным сернокислым натрием в круглодонную колбу. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре 30 °C. К сухому охлажденному остатку прибавляют 10 мл раствора 1М хлористоводородной кислоты, тщательно ополаскивают колбу и переносят через фильтр в делительную воронку. Колбу еще дважды (по 5 мл) промывают раствором хлористоводородной кислоты и сливают в ту же делительную воронку. Объединенный экстракт нейтрализуют раствором натра едкого, затем добавляют еще 2 мл 15-процентного раствора натра едкого (pH раствора 11) и экстрагируют хлороформом. Далее поступают аналогично анализу воды.
2.5.2 Условия хроматографирования
Хроматографирование проводят в системе бутиловый спирт - муравьиная кислота - вода в соотношении 7:3:1. После хроматографирования пластинку высушивают и выдерживают под ртутно-кварцевой лампой в течение 25 минут на расстоянии 15 - 20 *см.* Затем пластинку опрыскивают раствором бромкрезолового пурпурного. При этом пластинка окрашивается в фиолетовый цвет без видимых зон локализации соединений. Затем пластинку оставляют на воздухе на 2 - 3 мин., фон пластинки становится желтым, а зоны
локализации соединений проявляются в виде серых пятен. Далее пятна
закрепляют на пластинке путем обработки 15% раствором натра едкого. Ивин и 2,6-лутидин при этом проявляются в виде фиолетовых пятен на сером фоне с величиной R 0,60 и 0,25 соответственно.
f
2.6. Обработка результатов анализа
Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов.
Содержание ивина и 2,6-лутидина в пробе определяют по следующей формуле:
A x S
2
X — содержание соединений в пробе, мг/кг (л);
A — количество соединений в пятне стандартного раствора, мкг (в диапазоне линейности);
S — площадь стандартного раствора, кв. мм; 1
S — площадь пятна пробы, кв. мм; 2
3. Требования техники безопасности
Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР (N 2455-81 от 20.10.81).