---
title: "\"Временные методические указания по хроматографическому определению ивина в биологическом материале\""
number: "6078-91"
issuer: "Министерство здравоохранения СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6078-91"
---

## "Временные методические указания по хроматографическому определению ивина в биологическом материале"

# "Временные методические указания по хроматографическому определению ивина в биологическом материале"

(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6078-91)


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждены<br>
Министерством здравоохранения СССР

</div>

<div align="center">

29 июля 1991 г. N 6078-91

</div>


<a id="p100002"></a>**ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ИВИНА**
**В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ**

<div align="center">

<a id="p100003"></a>(Дополнение к "Методическим указаниям по хроматографическому

</div>

определению ивина в воде и овощах" N 4327-87 от 08.06.87)

<a id="p100004"></a>Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
<a id="p100005"></a>Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.


## 1. <a id="p100006"></a>Краткая характеристика препарата


<a id="p100007"></a>Краткую характеристику препарата ивин см. во Временных методических [указаниях](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-6079-91#p100007).


## 2. <a id="p100008"></a>Методика определения ивина в биологическом материале



### <a id="p100009"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100010"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100011"></a>Методика основана на извлечении ивина из проб органическим растворителем, кислотной очистке экстрактов, реэкстракции препарата и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Зоны локализации препарата обнаруживаются: водным раствором крахмала после УФ-облучения и обработки пластинок парами иода, альтернативно реактивом Паули после УФ-облучения.

##### <a id="p100012"></a>2.1.2 Избирательность метода

<a id="p100013"></a>В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии близких по области применения и структуре следующих соединений: гидрела, дигидрела, хлорхолинхлорида, морфола, морфонола, алара, гиббереллина и некоторых производных пиридина-нитрапирина, 6-хлорпиколиновоЙ кислоты, 2-пиколиновой кислоты, 2,6-дипиколиновой кислоты, 2,6-лутидина.

##### <a id="p100014"></a>2.1.3 Метрологическая характеристика методики (n = 20, P = 0,95)



<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="18%"><col width="16%"><col width="14%"><col width="16%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры</td></tr>
<tr><td>предел обнаружения, мкг/г (мл)</td><td>диапазон опреде-х концен-й, мкг/г (мл)</td><td>среднее значение % определения</td><td>стандартное отклонение, %</td><td>доверительный интервал среднего, %</td></tr>
<tr><td>Печень</td><td>0,2</td><td>0,2 - 2</td><td>84,5</td><td>+/- 2,4</td><td>+/- 5,2</td></tr>
<tr><td>Почки</td><td>0,2</td><td>0,2 - 2</td><td>81,7</td><td>+/- 2,2</td><td>+/- 4,7</td></tr>
<tr><td>Легкие</td><td>0,2</td><td>0,2 - 2</td><td>83,8</td><td>+/- 2,4</td><td>+/- 5,0</td></tr>
<tr><td>Мозг</td><td>0,2</td><td>0,2 - 2</td><td>82,1</td><td>+/- 1,9</td><td>+/- 4,0</td></tr>
<tr><td>Селезенка</td><td>0,2</td><td>0,2 - 2</td><td>85,7</td><td>+/- 2,5</td><td>+/- 5,3</td></tr>
<tr><td>Сердце</td><td>0,2</td><td>0,2 - 2</td><td>84,7</td><td>+/- 2,1</td><td>+/- 4,5</td></tr>
<tr><td>Кровь</td><td>0,2</td><td>0,2 - 2</td><td>86,4</td><td>+/- 2,2</td><td>+/- 4,7</td></tr>
<tr><td>Моча</td><td>0,4</td><td>0,4 - 2</td><td>78,6</td><td>+/- 2,1</td><td>+/- 4,5</td></tr>
<tr><td>Кал</td><td>0,4</td><td>0,4 - 2</td><td>77,7</td><td>+/- 1,5</td><td>+/- 3,2</td></tr>
</table>



### <a id="p100025"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100026"></a>Ивин, хч. Стандартный раствор в хлороформе, содержащий 100 мкг/мл действующего вещества, хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.
<a id="p100027"></a>Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.
<a id="p100028"></a>Натр едкий, хч, ГОСТ 4328-77, 15-процентный водный раствор.
<a id="p100029"></a>Кали едкий, хч, ГОСТ 4203-65, 10-процентный водный раствор.
<a id="p100030"></a>Хлористоводородная кислота, ч, ГОСТ 3118-77, 1М водный раствор.
<a id="p100031"></a>Натрий сернокислый безводный, ч, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76).
<a id="p100032"></a>Пластинки хроматографические "Силуфол" UV-254 (ЧССР).
<a id="p100033"></a>Бензол, хч, ГОСТ 5955-68.
<a id="p100034"></a>Уксусная кислота лед., ГОСТ 61-75.
<a id="p100035"></a>Иод кристаллический, чда, ГОСТ 4139-79.
<a id="p100036"></a>Крахмал, [ГОСТ 10163-76](https://bukva.ai/docs/gost-10163-76), 1-процентный водный раствор.
<a id="p100037"></a>Сульфаниловая кислота, чда, [ГОСТ 5821-78](https://bukva.ai/docs/gost-5821-78).
<a id="p100038"></a>Натрий азотистокислый, хч, ГОСТ 4197-74.
<a id="p100039"></a>Спирт этиловый, хч, ТУ 6-1710-77.
<a id="p100040"></a>Диэтиловый эфир, ч, ГОСТ 6265-74.


### <a id="p100041"></a>2.3. Приборы, аппаратура, посуда


<a id="p100042"></a>Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.
<a id="p100043"></a>Прибор для отгонки растворителей, ТУ 25-11-917-76, тип ИР-1М.
<a id="p100044"></a>Колбы мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), на 100 мл.
<a id="p100045"></a>Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.
<a id="p100046"></a>Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.
<a id="p100047"></a>Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл.
<a id="p100048"></a>Воронки химические, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100049"></a>Микропипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74), на 0,1 мл.
<a id="p100050"></a>Цилиндры мерные, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), емк. 50, 100 мл.
<a id="p100051"></a>Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100052"></a>Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100053"></a>Фильтры бумажные "синяя лента".
<a id="p100054"></a>Камера с парами иода (10 - 20 г кристаллического иода помещают на дно герметически закрытой камеры).


### <a id="p100055"></a>2.4. Подготовка к определению


<a id="p100056"></a>Приготовление проявляющего реактива Паули: к раствору 25 г сульфаниловой кислоты в 125 мл 10-процентного раствора кали едкого добавляют (при охлаждении) 100 мл раствора нитрита натрия, 40 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и 20 мл воды. Полученную соль промывают последовательно ледяной водой, этанолом, диэтиловым эфиром и высушивают. При хранении в темной склянке в холодильнике соль устойчива несколько месяцев. Для опрыскивания готовят 0,1 г диазониевой соли в 20 мл 15-процентного раствора едкого натра. Раствор готовят перед употреблением.


### <a id="p100057"></a>2.5. Описание определения



##### <a id="p100058"></a>2.5.1 Экстракция и очистка

<a id="p100059"></a>5 г измельченного биологического материала (мозг, печень, почки, легкие, кал, сердце, селезенка) или 5 мл крови, мочи помещают в плоскодонную колбу и экстрагируют хлороформом трижды по 20 мл. Объединенные экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием в колбу для выпаривания. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60 °C. К сухому остатку добавляют 10 мл 1М раствора хлористоводородной кислоты, тщательно смывая остаток со стенок колбы. Раствор фильтруют через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Колбу еще дважды ополаскивают по 5 мл 1М раствором хлористоводородной кислоты и сливают в ту же воронку.
<a id="p100060"></a>Кислотный экстракт нейтрализуют 15% раствором едкого натра и реэкстрагируют ивин хлороформом 3 x 30 мл. Хлороформный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60 °C.

##### <a id="p100061"></a>2.5.2 Хроматографирование и проявление

<a id="p100062"></a>После отгонки растворителя остаток с помощью хлороформа количественно наносят на пластинку "Силуфол" (ЧССР) на расстоянии 1 см от нижнего края пластины. Сначала хроматографирование проводят в бензоле. При этом ивин остается на старте, а примеси, содержащиеся в пробе, продвигаются вверх. Пластинку высушивают на воздухе и проводят вторичное хроматографирование в том же направлении в смеси бензол - уксусная кислота в соотношении 1:1,5. После хроматографирования пластинку высушивают и выдерживают под ртутно-кварцевой лампой в течение 10 - 15 минут.
<a id="p100063"></a>    Затем  пластинку  или  помещают  в  камеру  с  парами  иода  и
обрабатывают  раствором крахмала, или сразу обрабатывают реактивом
Паули.  Зоны  локализации  ивина обнаруживаются в виде синих пятен
(пары иода - крахмала) или в  виде розовых пятен (реактив Паули) с
величиной R  0,58 +/- 0,02.

<div align="center">

           f

</div>



### <a id="p100064"></a>2.6. Обработка результатов анализа


<a id="p100065"></a>Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски проб и стандартных растворов.
<a id="p100066"></a>Содержание ивина в пробе определяют по следующей формуле:

                               A x S
                                    2
<a id="p100067"></a>                           X = ------,
                               P x S
                                    1

<a id="p100068"></a>    где:
<a id="p100069"></a>    X - содержание ивина в пробе, мг/г (мл);
<a id="p100070"></a>    A  -  количество  ивина, содержащегося  в  пятне  стандартного
раствора, мкг (в диапазоне линейности);
<a id="p100071"></a>    S  - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;
     1
<a id="p100072"></a>    S  - площадь пятна пробы, кв. мм;
     2

<div align="center">

<a id="p100073"></a>    P - количество анализируемой пробы, г (мл).

</div>



## 3. <a id="p100074"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100075"></a>Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также [правила](https://bukva.ai/docs/pravila-2455-81) устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР (N 2455-81 от 20.10.81).



<a id="p100076"></a>

---