--- title: "\"Методические указания по хроматографическому измерению содержания гептилового и амилового спиртов на коже\"" number: "5111-89" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-5111-89" --- ## "Методические указания по хроматографическому измерению содержания гептилового и амилового спиртов на коже" # "Методические указания по хроматографическому измерению содержания гептилового и амилового спиртов на коже" (утв. Минздравом СССР 28.09.1989 N 5111-89) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
**В.И.ЧИБУРАЕВ**
28 сентября 1989 г. N 5111-89
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ СОДЕРЖАНИЯ**
**ГЕПТИЛОВОГО И АМИЛОВОГО СПИРТОВ НА КОЖЕ**
I. CH (CH ) CH OH М.м. 88,15 3 2 3 2 Амиловый спирт - бесцветная жидкость. Т. кип. 138 °C, Т. пл. (-78,5°). Растворимость в воде 2,7%, хорошо растворим в этаноле, эфире, ацетоне и некоторых других органических растворителях. II. CH (CH ) CH OH И.и. 116,21 3 2 5 2 Гептиловый спирт - бесцветная жидкость. Т. кип. 174 - 176°, Т. пл. - 34,1°. Растворим в этаноле, эфире, ацетоне и некоторых других органических растворителях. ## 1. Характеристика методики Определение основано на переведении спиртов в соответствующие нелетучие производные - 3,5-динитробензонаты, которые разделяют в тонком слое силикагеля, пропитанного родамином 6ж. Количественное определение проводят после извлечения бензоатов по реакции Яновского. В качестве смывающей жидкости используется ацетон. Диапазон измеряемого содержания 0,12 - 1,2 мг/кв. см. Определению не мешает метиловый спирт. Граница суммарной погрешности измерения +/- 25%. ПДУ гептилового и амилового спирта на коже 0,2 мг/кв. см. ## 2. Реактивы и растворы Спирты: амиловый и гептиловый, х.ч., перегнанные при температуре кипения. Бензол, [ГОСТ 5955-75](https://bukva.ai/docs/gost-5955-75), осушенный над хлористым кальцием. 3,5-динитробензоилхлорид, раствор с содержанием 50 мг в 30 мл бензола. Пиридин, [ГОСТ 13647-78](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-13647-78), 10-процентный раствор в бензоле. Ацетон, ГОСТ 2603-71. Натрия гидроксид, ГОСТ 4328-77, 40-процентный раствор. Родамин 6ж, 0,05-процентный раствор в этаноле. Диэтиловый эфир для наркоза. Пластинки хроматографические "Silufol". Основной стандартный раствор готовят для каждого спирта отдельно. Для чего в мерную колбу на 25 мл вносят 10 - 15 мл бензола и взвешивают. Добавляют 0,1 - 0,2 мл спирта и вновь взвешивают. По разности в весе определяют количество спирта. Объем доводят до метки бензолом и вычисляют содержание спирта в 1 мл. Раствор устойчив в течение месяца. Стандартный раствор N 1, содержащий 2 мг/мл, готовят соответствующим разбавлением основного раствора. ## 3. Приборы и посуда Теплоэлектровентилятор. Пробирки с притертыми пробками высотой 120 мм, внутренним диаметром 15 мм. Камера хроматографическая размером 22 x 25 x 12 см. Кювета эмалированная размером 22 x 27 см. Колбы мерные вместимостью 25 x 50 мл. Микропипетки, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74), вместимостью 0,1 - 0,2 мл. Пипетки, ГОСТ 20222-74, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл. Баня водяная. Термометр на 100 °C. Пинцет медицинский. Скальпель. Воронки стеклянные d = 3,0 - 3,5 см. ## 4. Проведение измерения
Условия проведения смыва
Смыв с кожных покровов проводится способом обмыва. Для этого в фарфоровую чашку наливают 30 мл ацетона. Ватным тампоном (0,3 г), смоченным в смывающей жидкости, обмывают участок кожного покрова (100 кв. см) сверху вниз. При этом тампон несколько раз обмакивают в жидкость. Смыв переносят в склянку. Одновременно проводят контрольный смыв у рабочих, не контактирующих с амиловым и гептиловым спиртами.
Условия анализа
Вату извлекают из смыва пинцетом, помещают в воронку, тщательно отжимают и вновь промывают 5 мл ацетона. Жидкость присоединяют к основному смыву, фильтруют и измеряют объем. Для анализа берут 1 мл пробы, добавляют 2 мл бензола, 0,4 мл раствора 3,5-динитробензоилхлорида и 2 капли раствора пиридина. Одновременно с пробами готовят бензоаты спиртов для построения стандартной шкалы ("свидетели"). С этой целью берут по 0,5 мл стандартного раствора каждого спирта с содержанием - 2 мг/мл, переносят в колориметрическую пробирку, добавляют 0,4 мл раствора 3,5-динитробензоилхлорида, 2 капли раствора пиридина, 1 мл ацетона и объем доводят до 3 мл бензолом. И стандарт, и пробу помещают на водяную баню, постепенно доводят температуру до 90 - 95 °C и пробу выпаривают до сухого остатка. Сухой остаток пробы растворяют в 30 мл бензола; 0,05 - 0,1 мл этого раствора используют для последующего хроматографического определения. Стандарт растворяют в 1 мл бензола, при этом получают раствор 3,5-динитробензоатов спиртов, соответствующих содержанию 1 мг каждого спирта в 1 мл. Хроматографическое разделение: Пластинку "Silufol" размером 15 x 15 см пропитывают родамином 6ж. С этой целью в эмалированную кювету наливают 0,05-процентный этанольный раствор родамина и наносят его на пластинку путем быстрого погружения ее в раствор. Пластинку сушат в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 4 - 5 мин. и затем 30 мин. в сушильном шкафу при температуре 100 - 110 °C. На обработанной таким образом пластинке проводят линию старта в 1,5 см от края, на которой намечают 6 точек на расстоянии 2 см друг от друга. В камеру можно помещать сразу две пластинки, т.е. одновременно определять несколько проб. При этом микропипеткой в часть точек каждой пластинки наносят пробы, в остальные - растворы "свидетелей", соответствующие 20 - 40 - 80 - 100 - 140 - 180 - 200 мкг каждого спирта. После нанесения проб и "свидетелей" пластинку помещают в хроматографическую камеру, на дно которой предварительно (за 1,5 - 2 ч до начала анализа) наливают бензол (подвижная фаза). Пластинку извлекают из камеры, когда подвижный растворитель поднимется на 13,5 - 14 см, сушат в вытяжном шкафу при комнатной температуре и вторично помещают в камеру. Когда растворитель пройдет то же расстояние, что и при первом разделении, пластинку извлекают и сушат в тех же условиях. Пятна бензоатов спиртов при этом проявляются в виде малиновых пятен на слабо розовом фоне. При слабой окраске пятен наблюдение за разделением можно вести в фильтрованном ультрафиолетовом свете (320 - 380 нм). При этом видны коричневые пятна бензоатов на желтом фоне. Путем сравнения на хроматограмме пятен проб с пятнами стандартных растворов "свидетелей" делают вывод о наличии в пробе спирта. Производные одного и того же спирта располагаются на одинаковом расстоянии от линии старта. Ближе к старту находится амиловый спирт R амилового спирта 0,65; f гептилового 0,83. Для количественного определения спиртов в пробах бензоаты пятен проб и "свидетелей" элюируют эфиром. С этой целью скальпелем осторожно переносят силикагель пятна в пробирку с притертой пробкой, заливают 2 мл эфира, при взбалтывании в течение 3 - 4 мин. извлекают бензоаты. Частицам силикагеля дают осесть на дно пробирки, а раствор переносят в сухую пробирку. Силикагель промывают 1 мл эфира и присоединяют к первой порции элюата. Ацетоном доводят содержимое до 5 мл. После извлечения бензоатов проб и "свидетелей" во все пробирки добавляют по 1 мл раствора едкого натра, осторожно перемешивают и устанавливают количество спирта путем сравнения интенсивности фиолетовой окраски проб с окраской "свидетелей" стандартной шкалы. Содержание спирта C (мг/кв. см) вычисляют по формуле: Q C = -, S где Q - количество искомого вещества во всей пробе, мг; S - площадь исследуемой части тела, кв. см. ---