--- title: "\"Методические указания по определению аполло в воде, почве, плодовых культурах методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии\"" number: "5005-89" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-5005-89" --- ## "Методические указания по определению аполло в воде, почве, плодовых культурах методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии" # "Методические указания по определению аполло в воде, почве, плодовых культурах методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 08.06.1989 N 5005-89) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 5005-89
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АПОЛЛО В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ПЛОДОВЫХ КУЛЬТУРАХ**
**МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>**
--- <*> Разработаны Д.Б. Гиренко, И.П. Литвин (ВНИИГИНТОКС). Краткая характеристика препарата. Аполло - 3,6-бис(2- хлорофенил)-1-2,4-5-тетразин. Брутто-формула C H Cl N . 14 8 2 4 Молекулярная масса 303,2. Общепринятое название - хлорфентезин, бисхлорфентезин. Красное кристаллическое вещество без запаха. Т. пл. 182 - 186 °C. Растворимость, г/л: в хлороформе - 650, бензоле - 2,5, гексане < 1, воде - 0,8 мг/л. Для крыс ЛД > 3000 мг/кг. 50 Принцип метода. Метод основан на определении аполло методами ГЖХ и ТСХ после извлечения его из исследуемой пробы органическим растворителем, очистки от коэкстрактивных веществ в системе жидкость - жидкость. Метрологическая характеристика методов приведена в таблице 142. Таблица 142
**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АПОЛЛО.**
**ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,005 - 0,1 МГ/КГ**
**ИЛИ МГ/Л**
Анализируемый объектСреднее значение определения, %Стандартное отклонение, %Доверительный интервал среднего, %
Метод газожидкостной хроматографии
Вода91,36+/- 2,48+/- 3,0
Почва81,32+/- 3,26+/- 3,9
Яблоки81,9+/- 4,0+/- 4,8
Виноград78,12+/- 4,04+/- 4,85
Метод тонкослойной хроматографии
Вода82,14+/- 4,72+/- 5,7
Почва66,2+/- 5,6+/- 6,7
Яблоки62,2+/- 3,4+/- 4,08
Виноград63,8+/- 4,6+/- 5,52
Избирательность метода. Препараты, близкие по сфере применения, в условиях ГЖХ определению не мешают. В условиях ТСХ могут мешать препараты, обнаруживаемые с помощью аммиаката серебра. Реактивы и растворы. Для экстракции. Ацетон х.ч. Гексан ч. Сульфат натрия. Для газожидкостной хроматографии. 5% SE-30 на хроматоне N-AW (0,16 - 0,20 мм). Азот газообразный особой чистоты. Стандартный раствор аполло (5 мкг/мл). Хранят в холодильнике не более 3 дней. Для тонкослойной хроматографии. Нитрат серебра х.ч. Пластинки "Силуфол". Подвижная фаза гексан - ацетон (4:1). Проявляющий реагент - раствор аммиаката серебра (0,5 г AgNO 3 растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 - 10 мл аммиака (22,5%) и доводят объем раствора до 200 мл ацетоном). Основной стандартный раствор аполло (200 мкг/мл) в ацетоне. Хранят в холодильнике не более 2 мес. Приборы, посуда. Посуда мерная (колбы конические, пипетки, цилиндры и др.). Воронки делительные. Колбы грушевидные, круглодонные на 25, 50, 250 мл. Воронки конические. Аппарат для встряхивания. Лампа ртутно-кварцевая. Камера хроматографическая. Пульверизаторы стеклянные. Испаритель ротационный вакуумный. Хроматограф, снабженный ДПР "Цвет" или другой марки. Микрошприц на 10 мкл. Колонка стеклянная - длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм (заполнена носителем на 0,5 - 0,6 м). Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку и экстрагируют аполло дважды по 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе при температуре бани 40 °C до объема 0,3 - 0,5 мл. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и определяют методами ТСХ или ГЖХ. Растительный материал (яблоки, виноград) (25 г пробы) помещают в коническую колбу, приливают 50 мл ацетона, встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют дважды, объединяют ацетоновые экстракты, фильтруют и переносят в делительную воронку. Прибавляют 300 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и реэкстрагируют аполло дважды по 30 мл гексаном. Объединяют гексан, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и далее определяют методами ТСХ или ГЖХ. Пробу почвы (25 г) помещают в коническую колбу, прибавляют 10 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и заливают 50 мл ацетона. Затем содержимое колбы встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют дважды. Экстракты фильтруют, переносят в делительную воронку, добавляют 300 мл дистиллированной воды и экстрагируют аполло дважды по 30 мин. гексаном. Объединенный гексан сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют. Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и далее хроматографируют. Условия хроматографирования. Метод газожидкостной хроматографии. Носитель - хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм). Неподвижная фаза 5% SE-30. Колонка стеклянная 1 м, заполнена носителем на 0,5 - 0,6 м. Скорость потока газа-носителя (азота) 50 -12 мл/мин. Шкала электрометра 20 x 10 А. Температура, °C: колонки - 220; испарителя - 240; детектора - 240. Вводимый объем 5 мкл. При указанных условиях хроматографирования препарат дает три пика - один основной (t = 4,8 мин.) и два нижних (t = 2,5 мин. и уд уд 7,4 мин.). Линейный диапазон детектирования (по основному пику) 2 - 25 нг. Минимально детектируемое количество (основной пик) - 2 нг. Для количественного определения измеряют площадь основного пика в пробе и стандартном растворе (при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора). Содержание аполло в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле: C VS ст пр X = -------, S V P ст 1 где: C - количество препарата во введенном в хроматограф ст стандартном растворе, нг; S - площадь пика исследуемого раствора, кв. мм; пр S - площадь пика стандартного раствора препарата, введенного ст в хроматограф, мл; V - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл; 1 V - общий объем экстракта после упаривания, мл; P - масса анализируемой пробы, г. Метод тонкослойной хроматографии. Пробу, сконцентрированную до объема 0,1 - 0,2 мл, количественно наносят на пластинку "Силуфол". Параллельно наносят серию стандартных растворов с содержанием аполло 3, 5, 10 мкг. Хроматографируют в смеси растворителей гексан - ацетон (4:1). Аполло в стандартном растворе и пробе обнаруживается на пластинке в виде пятна красного цвета. Для повышения надежности идентификации пластинку после хроматографирования можно обработать водно-ацетоновым раствором аммиаката серебра и поместить на 30 мин. под УФ-облучение. Аполло обнаруживается в виде серо-черного пятна. Величина R 0,47 +/- f 0,05. Содержание аполло в исследуемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле: A X = -, P где:
A - количество препарата, найденное на пластинке в пробе, мкг;
P - навеска или объем пробы, г или мл.
Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.
---