Методические указания по определению аполло в воде, почве, плодовых культурах методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 5005-89)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АПОЛЛО В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ПЛОДОВЫХ КУЛЬТУРАХ

---

<*> Разработаны Д.Б. Гиренко, И.П. Литвин (ВНИИГИНТОКС).

    Краткая   характеристика   препарата.   Аполло   -  3,6-бис(2-
хлорофенил)-1-2,4-5-тетразин.      Брутто-формула      C  H Cl N .
                                                        14 8  2 4
Молекулярная  масса  303,2.  Общепринятое название - хлорфентезин,
бисхлорфентезин.  Красное  кристаллическое вещество без запаха. Т.
пл.  182 - 186 °C. Растворимость, г/л: в хлороформе - 650, бензоле

• 2,5, гексане < 1, воде — 0,8 мг/л. Для крыс ЛД > 3000 мг/кг. 50

Принцип метода. Метод основан на определении аполло методами ГЖХ и ТСХ после извлечения его из исследуемой пробы органическим растворителем, очистки от коэкстрактивных веществ в системе жидкость — жидкость.

Метрологическая характеристика методов приведена в таблице 142.

Таблица 142

ИЛИ МГ/Л

Анализируемый объект	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, %	Доверительный интервал среднего, %
Метод газожидкостной хроматографии
Вода	91,36	+/- 2,48	+/- 3,0
Почва	81,32	+/- 3,26	+/- 3,9
Яблоки	81,9	+/- 4,0	+/- 4,8
Виноград	78,12	+/- 4,04	+/- 4,85
Метод тонкослойной хроматографии
Вода	82,14	+/- 4,72	+/- 5,7
Почва	66,2	+/- 5,6	+/- 6,7
Яблоки	62,2	+/- 3,4	+/- 4,08
Виноград	63,8	+/- 4,6	+/- 5,52

Избирательность метода. Препараты, близкие по сфере применения, в условиях ГЖХ определению не мешают. В условиях ТСХ могут мешать препараты, обнаруживаемые с помощью аммиаката серебра.

    Реактивы  и  растворы.  Для  экстракции. Ацетон х.ч. Гексан ч.
Сульфат  натрия.  Для  газожидкостной  хроматографии.  5% SE-30 на

хроматоне N-AW (0,16 — 0,20 мм). Азот газообразный особой чистоты.

Стандартный  раствор  аполло  (5 мкг/мл). Хранят в холодильнике не
более  3 дней. Для тонкослойной хроматографии. Нитрат серебра х.ч.
Пластинки   "Силуфол".  Подвижная  фаза  гексан  -  ацетон  (4:1).
Проявляющий  реагент  -  раствор  аммиаката  серебра  (0,5 г AgNO

                                                             3

растворяют  в  5  мл  дистиллированной  воды, прибавляют 7 - 10 мл
аммиака  (22,5%)  и  доводят  объем  раствора до 200 мл ацетоном).

Основной стандартный раствор аполло (200 мкг/мл) в ацетоне. Хранят в холодильнике не более 2 мес.

Приборы, посуда. Посуда мерная (колбы конические, пипетки, цилиндры и др.). Воронки делительные. Колбы грушевидные, круглодонные на 25, 50, 250 мл. Воронки конические. Аппарат для встряхивания. Лампа ртутно-кварцевая. Камера хроматографическая. Пульверизаторы стеклянные. Испаритель ротационный вакуумный. Хроматограф, снабженный ДПР «Цвет» или другой марки. Микрошприц на 10 мкл. Колонка стеклянная — длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм (заполнена носителем на 0,5 — 0,6 м).

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку и экстрагируют аполло дважды по 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе при температуре бани 40 °C до объема 0,3 — 0,5 мл. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и определяют методами ТСХ или ГЖХ.

Растительный материал (яблоки, виноград) (25 г пробы) помещают в коническую колбу, приливают 50 мл ацетона, встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют дважды, объединяют ацетоновые экстракты, фильтруют и переносят в делительную воронку. Прибавляют 300 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и реэкстрагируют аполло дважды по 30 мл гексаном. Объединяют гексан, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и далее определяют методами ТСХ или ГЖХ.

Пробу почвы (25 г) помещают в коническую колбу, прибавляют 10 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и заливают 50 мл ацетона. Затем содержимое колбы встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют дважды. Экстракты фильтруют, переносят в делительную воронку, добавляют 300 мл дистиллированной воды и экстрагируют аполло дважды по 30 мин. гексаном. Объединенный гексан сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют. Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и далее хроматографируют.

    Условия      хроматографирования.     Метод     газожидкостной
хроматографии.   Носитель  -  хроматон  N-AW  (0,16  -  0,20  мм).
Неподвижная  фаза  5%  SE-30.  Колонка  стеклянная  1 м, заполнена

носителем на 0,5 — 0,6 м. Скорость потока газа-носителя (азота) 50 -12 мл/мин. Шкала электрометра 20 x 10 А. Температура, °C: колонки

• 220; испарителя — 240; детектора — 240. Вводимый объем 5 мкл. При указанных условиях хроматографирования препарат дает три пика
• один основной (t = 4,8 мин.) и два нижних (t = 2,5 мин. и

                  уд                               уд
7,4 мин.).  Линейный диапазон детектирования (по  основному  пику)
2 - 25 нг.  Минимально  детектируемое  количество (основной пик) -

2 нг.

    Для  количественного  определения  измеряют  площадь основного
пика  в пробе и стандартном растворе (при условии, что пики близки
по   величине   и   определение  ведется  в  диапазоне  линейности

детектора).

Содержание аполло в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

                             C  VS
                              ст  пр

X = -------, S V P ст 1

где:

C — количество препарата во введенном в хроматограф ст стандартном растворе, нг;

S — площадь пика исследуемого раствора, кв. мм; пр

S — площадь пика стандартного раствора препарата, введенного ст в хроматограф, мл;

V — объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл; 1

V — общий объем экстракта после упаривания, мл;

P — масса анализируемой пробы, г.

Метод тонкослойной хроматографии. Пробу, сконцентрированную до объема 0,1 — 0,2 мл, количественно наносят на пластинку «Силуфол». Параллельно наносят серию стандартных растворов с содержанием аполло 3, 5, 10 мкг. Хроматографируют в смеси растворителей гексан

• ацетон (4:1). Аполло в стандартном растворе и пробе

обнаруживается  на  пластинке  в  виде  пятна  красного цвета. Для
повышения     надежности     идентификации     пластинку     после
хроматографирования  можно  обработать  водно-ацетоновым раствором
аммиаката  серебра и поместить на 30 мин. под УФ-облучение. Аполло
обнаруживается  в  виде  серо-черного  пятна. Величина R  0,47 +/-

                                                    f

0,05.

Содержание аполло в исследуемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

                              A

X = -, P

где:

---