Методические указания по определению апплауда в растительном материале (томаты, огурцы, плоды и зеленая масса), почве, воде методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 5003)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АППЛАУДА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ (ТОМАТЫ, ОГУРЦЫ, ПЛОДЫ И ЗЕЛЕНАЯ МАССА), ПОЧВЕ, ВОДЕ

---

<*> Разработаны Т.М. Петровой, О.К. Остроуховой (ВИЗР); А.А. Красных, Ю.А. Шуровенковым (ВНИИЗР).

Краткая характеристика препарата. Действующее вещество — 2- трет-бутилимино-(тетрагидро)-3-изопропил-5-фенил-1,3,5-тиадиазинон -4. Брутто-формула C H № OS. Молекулярная масса 305,5. 16 16 3

Общепринятое   название   -   бупрофезин.  Технический  продукт  -
кристаллическое  вещество белого или желтого цвета, т. пл. 104,5 -
105,5  °C. Медленно разлагается при pH 3 - 5 и стабилен при pH 7 -

10. Растворимость при 25 °C в хлороформе 52%; ацетоне 25; этаноле -2

8%. Давление паров  при  25 °C  1,25 x 10   Па. Выпускается в виде
25-процентного с.п.  Препарат  используют  на   овощных  культурах
закрытого  грунта против белокрылки, дельфацидов, цикадок, щитовок
и клеща. Для крыс ЛД   2198 - 2355 мг/кг.

                50

Принцип метода. Метод основан на извлечении апплауда из растительных проб (томата, огурца) 50-процентным водным ацетоном; из почв — смесью ацетона с 0,05 н раствором хлорида кальция (1:1); из воды — хлороформом, — очистке переэкстракцией в н-гексане и количественном определении методом ГЖХ с ДЭЗ, ДПР или ТИД.

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

Анализируемый объект	Предел определения, мг/л или мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, %	Доверительный интервал среднего при p = 0,95; n = 5, %
Вода Почва Растения	0,0002 0,008 0,02	92 78 77	+/- 2,0 +/- 2,5 +/- 2,3	+/- 1,8 +/- 3,7 +/- 2,1

Примечание. Диапазон линейного детектирования 0,2 — 10,0 нг.

Избирательность метода. При данных условиях хроматографирования пестициды типа ювенильных гормонов не мешают определению. Избирательность метода обеспечивается сочетанием селективных детекторов и неподвижных фаз различной полярности.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Гексан х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Хлорид натрия ч.д.а. Этиловый спирт-ректиф. Хлороформ х.ч. Петролейный эфир х.ч. Неподвижная жидкая фаза: 5% SE-30 или 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 — 0,160 мм). Азот особой чистоты. Стандартный раствор апплауда в н-гексане — 5 мкг/мл. Раствор стабилен в течение 3 мес. при хранении его в холодильнике.

Посуда и приборы. Колбы конические со шлифами; круглодонные на 50 мл. Воронки: делительные на 250; химические. Аппарат для встряхивания колб АВУ-1. Газовый хроматограф с ДЭЗ, ДПР или ДТИ. Микрошприц на 10 мкл. Хроматографические стеклянные колонки размером 1 м x 3 мм.

Подготовка к определению хроматографической колонки. Стеклянную колонку (1 м x 3 мм) промывают смесью органических растворителей ацетон — этиловый спирт — петролейный эфир (1:1:1). Для этого сначала заливают на 1 часть смесь растворителей, а затем промывают 300 мл ацетона. Колонку сушат в токе азота и заполняют сорбентом с нанесенной на него фазой с помощью вакуумного насоса. Колонку кондиционируют при 270 °C в течение 8 ч. Скорость потока азота 30 — 40 мл/мин.

Хранение проб. Пробы хранят в холодильнике не более 2 недель.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Навеску 10 г измельченных свежих зеленых листьев или 100 г плодов огурца, томатов заливают 100 — 200 мл 50%-ного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч и для лучшей экстракции оставляют на ночь. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр, колбу ополаскивают дважды 30 мл 50%-ного водного ацетона. Объединенные фильтраты помещают в делительную воронку, добавляют 50 — 70 мл дистиллированной воды и 1 — 3 г хлорида натрия. Очистку проводят переэкстракцией апплауда в н-гексан тремя порциями по 25 — 30 мл растворителя. Гексановые фракции фильтруют через безводный сульфат натрия в круглодонную колбу и концентрируют под вакуумом при температуре 40 °C до 10 мл. Аликвоту в количестве 1 — 3 мкл вводят в хроматограф.

Навеску почвы (25 г) заливают 50 мл смеси ацетон — 0,05 н раствор хлорида кальция (1:1), встряхивают в течение 1 ч и оставляют на ночь. Далее анализ ведут так, как описано для растительных проб.

Пробу воды (1 л) помещают в делительную воронку вместимостью 1,5 л, добавляют 5 — 7 г хлорида натрия и 100 мл хлороформа. Смесь в течение 15 мин. энергично встряхивают. После разделения слоев хлороформную фракцию сливают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, а водную фракцию вновь переносят в делительную воронку и проводят еще два раза экстракцию апплауда хлороформом порциями по 75 мл. Объединенные фракции хлороформа сушат безводным сульфатом натрия, добавляя в колбу 10 — 12 г соли, или фильтруют через нее. Растворитель концентрируют под вакуумом до 1 — 2 мл, затем полностью удаляют струей воздуха. К сухому остатку добавляют 1 мл гексана. Аликвоту 1 — 3 мкл вводят в хроматограф.

Условия хроматографического определения. Хроматограф с ДЭЗ, ДПР или ТИД. Условия хроматографирования при работе на ДЭЗ, ДПР: температура, °C: колонки — 240; испарителя — 250; детектора — 260. Скорость газа-носителя (азота) 45 мл/мин. Колонка стеклянная (1 м x 3 мм), заполненная 5% SE-30 или 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 — 0,160 мм). Время удерживания на 5% SE-30 — 1 мин. 30 с, на 5% XE-60 — 2 мин. 20 с.

Условия хроматографирования при работе на ТИД: температура, °C: колонки — 240; испарителя — 250. Скорость газа-носителя (азота), мл/мин., — 50; водорода — 16 — 18; воздуха — 300. В этих условиях минимально детектируемое количество апплауда 0,5 нг, диапазон линейности 0,5 — 15 нг. Время удерживания на 5% SE-30 — 1 мин. 15 с, на 5% XE-60 — 2 мин. 20 с.

Обработка результатов анализа. Содержание апплауда в анализируемой пробе определяют методом соотношения пиков стандарта и проб. Количество апплауда (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

                           H CV
                            2

X = -----, H V P 1 1

где:

C — количество препарата в стандарте, введенном в хроматограф, нг;

    H ,   H    -   высоты   пиков   соответственно   стандарта   и
     1     2

анализируемого раствора, мм;

V — объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, 1 мкл;

V — объем анализируемой пробы, мл;

P — навеска пробы, г.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит «зашкаливание», то готовят более разбавленные растворы.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила предосторожности при работе с токсичными, взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.

---