Методические указания по определению рицида-П в рисе, воде и почве методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 28.01.1980 № 2143-80, 08.06.1989 № 5001-89)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РИЦИДА-П В РИСЕ, ВОДЕ И ПОЧВЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны Ф.Р. Мельцер, К.Ф. Новиковой (ВНИИХСЗР).

    Рицид-П   -   O,O-диизопропил-S-бензилтиофосфат.   Синоним   -
китацин-П.  Общепринятое название - ИБФ. Брутто-формула C  H  OPS.

                                                     13 21

Молекулярная  масса 576,0. В чистом виде - прозрачная жидкость. Т.
кип.  126  °C  при  5,3 Па. Растворимость в воде при 20 °C 50 г/л.

Хорошо растворим в органических растворителях.

Принцип метода. Метод основан на извлечении рицида-П из риса этилацетатом, из воды — гексаном, а из увлажненной почвы — смесью гексана с ацетоном (4:1), удалении растворителя, перераспределении рицида-П в гексан и определении методом ГЖХ с ТИД.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон измеряемых концентраций: в рисе — 0,025 — 0,5 мг/кг, в воде — 0,0005 — 0,002 мг/л, в почве — 0,05 — 2,00 мг/кг. Предел обнаружения в хроматографируемой пробе 0,2 — 8,0 нг. Нижний предел определения в почве 0,05 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств (n = 15) 74,8 +/- 3,3% в рисе, 94,6 +/- 4,8% в воде, 95,3 +/- 3,5% в почве.

Доверительный интервал среднего значения определения (n = 5, p = 0,95) +/- 4,1% в рисе, +/- 6,0% в воде, +/- 4,8% в почве.

Избирательность метода. Метод селективен. Селективность обеспечивается сочетанием трех альтернативных колонок различной полярности и ГЖХ с ТИД.

Реактивы и растворы. Гексан свежеперегнанный. Ацетон. Этилацетат. Хроматон N-AW-DMCS (0,200 — 0,250 мм) с 5% XE-60. Хроматон N-супер (0,16 — 0,20 мм) с 3% SE-30. Хроматон N-AW-HMDS (0,16 — 0,20 мм) с 2% ПДЭГС. Газообразный азот особой чистоты из баллона или гелий. Водород из баллона или получаемый из генератора водорода. Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором. Натрия сульфат безводный. Стандартный раствор рицида-П в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор № 1) и 1 мкг/мл (раствор № 2). Для приготовления раствора № 1 в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают навеску рицида-П (100 мг), взятую на аналитических весах с точностью +/- 0,0002 г. Навеску растворяют в ацетоне и доводят до метки тем же растворителем. Из раствора № 1 пипеткой отбирают 1 мл, переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки гексаном. Растворы № 1 и № 2 стабильны при хранении в холодильнике в течение года.

Приборы и посуда. Хроматограф «Цвет-106» или аналогичный прибор с ТИД. Ротационный вакуумный испаритель или аналогичный с набором колб. Механический встряхиватель или аналогичный. Колбы: круглодонные вместимостью 50, 300 и 500 мл; плоскодонные вместимостью 250 мл, 1 л; мерные вместимостью 100 мл. Пипетки на 10; 5 и 1 мл с делениями. Эксикатор. Грушевидные колбочки с пробками на шлифах вместимостью 100 мл. Почвенное сито. Микрошприц. Секундомер. Фарфоровая чашка.

Подготовка к определению. Подготовка колонки. Готовят насадку с 2% ПДЭГС на хроматоне N-AW-HMDS. В круглодонную колбу на 300 мл помещают навеску ПДЭГС (1 г), взвешенную с точностью +/- 0,2 г, и растворяют жидкую фазу в 200 мл хлороформа. В полученный раствор при непрерывном равномерном помешивании постепенно высыпают 49 г хроматона N-AW-HMDS (0,16 — 0,20 мм). Объем раствора должен быть не менее чем в два раза больше насыпного объема сорбента. С помощью ротационного вакуумного испарителя при слабом нагревании водяной бани удаляют растворитель. После того как носитель при вращении колбы начинает легко осыпаться со стенок, его переносят в фарфоровую чашку и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 60 — 70 °C в течение 1 ч. После охлаждения в эксикаторе носитель пересыпают в стеклянную емкость с плотно закрываемой пробкой.

Заполненную носителем колонку присоединяют к хроматографу и кондиционируют при скорости потока азота или гелия 75 мл/мин. сначала в режиме программирования температуры от 50 до 210 °C со скоростью нагрева 1 °C/мин., а затем при 210 °C в течение 10 ч без подсоединения колонки к детектору. После завершения кондиционирования колонку подсоединяют к детектору, прибор подготавливают согласно инструкции.

Подготовка проб к анализу. Рис измельчают в кофейной мельнице до размера частиц, как в манной крупе. Для анализа берут 50 г измельченного риса.

Почву просеивают через почвенное сито, подготавливают 3 — 5 параллельных навесок массой 10 г. Перед анализом каждую пробу помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл и увлажняют 5 мл дистиллированной воды.

Ход анализа. Экстракция. Навеску риса 50 г помещают в круглодонную колбу на 500 мл, добавляют 150 мл этилацетата и экстрагируют рицид-П с помощью механического встряхивания колбы в течение 30 мин. Экстракт фильтруют в коническую колбу на 1 л. Рицид-П из риса экстрагируют еще трижды этилацетатом порциями по 100 мл. Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (примерно 40 г) в течение 10 мин. Небольшими порциями декантируют раствор в круглодонную колбу на 50 мл и отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя. Промывают сульфат натрия небольшими порциями этилацетата. Последнюю порцию растворителя отгоняют полностью. К сухому остатку пипеткой добавляют 5 мл гексана. Колбу закрывают притертой пробкой, тщательно обмывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.

Пробу воды (1 л) переносят в делительную воронку на 1,5 л, добавляют 20 — 30 г хлорида натрия, и рицид-П экстрагируют гексаном порциями по 100 мл четыре раза. Объединенный гексановый экстракт сушат над безводным сульфатом натрия. Небольшими порциями декантируют раствор в круглодонную колбу на 50 мл. Растворитель отгоняют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 — 2 мл. Безводный сульфат натрия промывают небольшими порциями гексана. Последнюю порцию гексана отгоняют до объема 1 — 2 мл и переносят остаток количественно с помощью ацетона в грушевидную колбу вместимостью 10 — 15 мл. Растворитель из грушевидной колбы отгоняют досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл ацетона, колбу закрывают пришлифованной пробкой, тщательно обмывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.

Навеску увлажненной анализируемой пробы почвы заливают 50 мл смеси гексана с ацетоном (4:1) и экстрагируют рицид-П с помощью механического встряхивания колбы в течение 30 мин. Экстракт пропускают через бумажный фильтр в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл. Экстракцию рицида-П повторяют еще два раза тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (примерно 20 г), а затем порциями фильтруют в грушевидную колбу на 100 мл. Концентрируют раствор с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема около 1 — 2 мл. Сульфат натрия и стенки колбы несколько раз обмывают ацетоном (общий объем 5 мл), полученный раствор также переносят в грушевидную колбу. Из последней порции фильтрата растворитель удаляют полностью. К сухому остатку пипеткой добавляют 5 мл гексана. Колбу закрывают пробкой на шлифе и ее стенки тщательно обмывают растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора.

Условия хроматографирования представлены в таблице 42.

Таблица 42

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ НА РАЗЛИЧНЫХ КОЛОНКАХ

Параметры	Колонка
	I	II	III
Длина колонки, м	1,1	1,5	2
Внутренний диаметр, мм	3,0	3,5	3,5
Насадка колонки	5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,20 — 0,25 мм)	2% ПДЭГС на хроматоне N-AW-HMDS (0,16 — 0,20 мм)	3% SE-30 на хроматоне N-супер (0,16 — 0,20 мм)
Температура, °C:
колонки	185	180	170
испарителя	200	200	190
Скорость потока, мл/мин.:
газа-носителя	75	75	60
(гелия или азота) водорода	14 — 15	18	18
воздуха	400 -10	180 -10	180 -10
Рабочая шкала электрометра, А	5 x 10	2 x 10	2 x 10
Скорость протяжки ленты самописца, мм/ч	240	240	240
Время удерживания:
рицида-П	3 мин. 11 с	2 мин. 27 с	5 мин. 44 с
рицида	3 мин. 50 с	3 мин. 42 с	5 мин. 7 с
ялана	48 с	30 с	1 мин. 45 с
метафоса	8 мин. 31 с	19 мин. 30 с	6 мин. 36 с
пропанида Линейный диапазон определения, нг	19 мин. 50 с 0,2 — 8	19 мин. 30 с 0,5 — 10	- 0,5 — 10
Объем вводимой пробы, мкл	2	2	2

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пиков. Содержание рицида-П в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

                        C  H  V
                         ст рп

X = -------, H V P ст а

где:

C — содержание рицида-П в стандарте, нг; ст

H — высота пика рабочей пробы, мм; рп

H — высота пика стандарта, мм; ст

V — объем рабочей пробы, мл;

V — объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл; а

P — навеска анализируемого образца (г) или объем воды (мл).

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит «зашкаливание», в подготовленную пробу пипеткой вносят известное количество гексана и анализируют более разбавленные растворы.

Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности, установленные для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и ФОП.

---