--- title: "\"Методические указания по определению базаграна в эфирных маслах методом газожидкостной хроматографии\"" number: "4348-87" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-4348-87" --- ## "Методические указания по определению базаграна в эфирных маслах методом газожидкостной хроматографии" # "Методические указания по определению базаграна в эфирных маслах методом газожидкостной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 08.06.1987 N 4348-87)
Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4348-87
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЗАГРАНА В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ**
**МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>**
--- <*> Разработаны Ю.С. Барановым (ВНИИЭМК). Краткая характеристика препарата. Химическое название 3- изопропил-бензо-2,1,3-тиадиазинон-4-диоксид-2,2. Брутто-формула C H N O S. Молекулярная масса 240,3. Общепринятое название - 10 12 2 3 бентазон. В чистом виде кристаллы белого цвета, т. пл. 137 - 139 °C. Растворимость в воде 500 мг/л при 20°C; давление насыщенного -6 пара 1,33 x 10 Па. Растворим в этаноле, бензоле, ацетоне. Выпускается в виде концентрата эмульсии с содержанием д.в. 25%. Рекомендован для борьбы с сорняками на рисе, сое, мяте и других культурах. Принцип метода. Метод основан на извлечении базаграна из н-гексанового раствора слабой щелочью с последующим перераспределением препарата в диэтиловый эфир, метилировании, очистке на колонке с оксидом алюминия и определении методом ГЖХ с ДПР. Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество базаграна 2 нг. Нижний предел определения в мятном масле 0,4 мг/кг. Среднее значение определения 76,3%. Стандартное отклонение 3,4%. Доверительный интервал +/- 6,6%; n = 7, p = 0,95. Избирательность метода. Метод селективен в присутствии хлорорганических и фосфорорганических пестицидов. Определению не мешают симм-триазины, амиды, динитроаналины и другие гербициды, рекомендованные на мяте. Реактивы и растворы. н-Гексан ч. Бензол ч.д.а. Диэтиловый эфир ч. Оксид алюминия для хроматографии ч., размер частиц 100 - 200 мк, 2-й степени активности по Брокману. Натрия гидроксид х.ч. Диметилсульфат. Хлороводородная кислота ч. Метанол. Хлорид натрия ч.д.а. Сульфат натрия безводный ч. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60. Стандартный раствор базаграна (метиловый эфир) с содержанием 10 мкг/мл. Для приготовления стандартного раствора отбирают на аналитических весах навеску базаграна 10 мг +/- 0,2 мг, помещают в мерную колбу на 100 мл, растворяют в 10 - 15 мл ацетона и доводят до метки тем же растворителем. Концентрация полученного раствора 100 мкг/мл. Отбирают пипеткой 10 мл раствора данной концентрации, переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки ацетоном. Концентрация полученного раствора 10 мкг/мл. Для метилирования отбирают 1 мл раствора концентрацией 10 мкг/мл, упаривают досуха, добавляют 1 мл диэтилового эфира и 0,5 мл додекана, метилируют диазометаном или диметилсульфатом, как указано ниже. Растворы базаграна в ацетоне стабильны в течение 6 мес. Метилированный препарат стабилен в диэтиловом эфире 3 сут. Приборы и посуда. Хроматограф газовый с ДЭЗ "Цвет-106", "Цвет-164", "Газохром-1106" и др. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель. Делительные воронки. Лабораторные воронки. Колбы: плоскодонные конические; грушевидные остродонные; мерные на 100 мл. Пипетки на 1, 10 мл. Пробирки на 10 мл. Микрошприцы на 10 мкл. Колонки для хроматографии размером 100 x 15 мм. Подготовка к определению. Органические растворители перед началом очистить по соответствующим методикам и перегнать. Сульфат натрия прокалить при 300 - 400 °C. Хроматографическую колонку кондиционировать в режимных условиях в течение 2 ч. Приготовление раствора диазометана. В делительную воронку помещают 3 мл хлороформа и медленно (1 капля за 5 с) приливают в реакционную колбу к смеси 3 г едкого кали, 1 мл гидразин гидрата и 1 мл метанола. Диазометан выделяется в виде желтого газа и через боковой отросток колбы поступает в поглотительный сосуд, содержащий 100 мл диэтилового эфира. Хранить раствор диазометана в холодильнике не более 3 дней. В случае отсутствия гидразин гидрата можно получать диазометан из нитрозометилмочевины (см. Методические [указания](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-2427-81#p100019)). Отбор проб. Для анализа отбирают среднюю пробу эфирного масла 10 г. Ход анализа. Навеску 10 г эфирного масла растворяют в 50 мл н-гексана и переносят на делительную воронку. Прибавляют 50 мл 0,5 н едкого натра, встряхивают, отделяют нижний слой. Операцию повторяют. Объединенные щелочные экстракты промывают 50 мл н-гексана, подкисляют соляной кислотой до pH 1, добавляют 10 г хлорида натрия и трижды экстрагируют базагран диэтиловым эфиром порциями по 50 мл, пропуская верхний слой через 100 г безводного сульфата натрия. К эфирному экстракту прибавляют 15 мл раствора диазометана в диэтиловом эфире, выдерживают 2 ч и концентрируют до 5 мл на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40 °C. Остаток переносят на предварительно промытую бензолом хроматографическую колонку с 6 г оксида алюминия, высота слоя безводного сульфата натрия 2 см. При метилировании базаграна диметилсульфатом диэтиловый эфир удаляют на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку прибавляют 3 мл 5-процентного диметилсульфата в абсолютном метаноле, прибавляют 1 г безводного сульфата натрия и нагревают 10 мин. на водяной бане при 55 °C с обратным холодильником. Реакционную колбу охлаждают, прибавляют 3 мл насыщенного раствора хлористого натрия, 3 мл бензола и энергично встряхивают. После расслоения фаз бензольный слой отделяют и переносят на хроматографическую колонку. Препарат элюируют 100 мл смеси бензол - диэтиловый эфир (9:1), используя избыточное давление. Элюат концентрируют на ротационном испарителе до 1 мл и аликвоту 2 - 5 мкл вводят в испаритель хроматографа (табл. 145). Таблица 145 **УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ НА РАЗЛИЧНЫХ ФАЗАХ** | Параметры | 5% SE-30 | 5% XE-60 | | --- | --- | --- | | Размер колонки, мм | 1000 x 3 | 1000 x 3 | | Материал колонки | Стекло | Стекло | | Форма колонки | Спираль | Спираль | | Расход газа-носителя, мл/мин. | 60 | 60 | | Температура, °C: | | | | испарителя | 220 | 220 | | термостата колонок | 160 | 160 | | термостата детекторов | 230 | 230 | | Хроматографируемый объем, мкл | 2 | 2 | | Время удерживания базаграна | 4 мин. 15 с | 8 мин. | | Линейный динамический диапазон, нг | 2 - 100 -12 | 2 - 100 -12 | | Рабочая шкала электрометра, A | 20 x 10 | 20 x 10 | Обработка результатов анализа. Количественно препарат в анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле: HV 1 X = ----, V KA 2 где: V - объем анализируемой пробы, мл; 1 V - объем инъектируемой пробы, мкл; 2 H - высота пика препарата в анализируемой пробе, мм; A - навеска, г; K - калибровочный коэффициент, мм/нг, который определяют по формуле: H H H 1 1 2 n K = - (--- + --- + ... + ---), n CV CV CV 1 2 n где: H , H ...H - высоты пиков стандартного раствора базаграна, 1 2 n мм; V , V ...V - объемы стандартного раствора базаграна, вводимые 1 2 n в хроматограф; C - концентрация стандартного раствора базаграна, мкг/мл. Содержание базаграна в пробах эфирного масла вычисляют как среднее из трех параллельных определений. Требования безопасности. При выполнении операций по определению базаграна следует руководствоваться требованиями безопасности при работе с соединениями третьего класса токсичности и легколетучести растворителями. Диазометан взрывоопасен и ядовит (т. кип. 24 °C). Запрещается подвергать растворы диазометана прямому воздействию солнечного света. Хранить растворы диазометана в сосудах, закрытых корковой пробкой, в холодильнике. ---