--- title: "\"Методические указания по определению базаграна в рыбе методом тонкослойной хроматографии\"" number: "4345" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-4345" --- ## "Методические указания по определению базаграна в рыбе методом тонкослойной хроматографии" # "Методические указания по определению базаграна в рыбе методом тонкослойной хроматографии" (утв. Минздравом СССР 08.06.1987 N 4345) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4345 **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЗАГРАНА В РЫБЕ**
**МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>**
--- <*> Разработаны В.А. Ковалем, В.Н. Поляковой, С.Д. Анциферовым, П.М. Махно, Н.И. Жаворонковым, В.В. Владимировым (ВИЭВ). Краткая характеристика препарата дана в Методических [указаниях](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-1880-78#p100003). ДСД 0,002 мг/кг. Принцип метода. Метод основан на извлечении базаграна из измельченной мышечной ткани рыбы органическими растворителями, очистке экстракта и хроматографировании в тонком слое пластинок "Силуфол" УФ . Подвижной фазой служит смесь органических 254 растворителей. Проявление хроматограмм можно осуществить двумя способами: 1 - термическое разложение базаграна, диазотирование нитритом натрия в солянокислой среде, азосочетание солей фенилдиазония с 1-нафтолом; 2 - активация базаграна УФ-светом, хлорирование и взаимодействие с о-толидином. Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество 1 мкг. Нижний предел определения 0,05 мг/кг. Среднее значение определения 95%. Стандартное отклонение +/- 2,5%. Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5 +/- 4,9%. Избирательность метода. Определению базаграна не мешают арезин, диурон, линурон, монурон, пропанид, солан, фалоран, применяемые на зерновых культурах. Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Бензол х.ч. Гексан ч. Этиловый спирт 96-процентный. Перманганат калия. Хлороводородная кислота х.ч. Сульфат натрия безводный. Пластинки "Силуфол" УФ 254 размером 150 x 150 мм. Силикагель АСК. о-Толидин ч. Хлороформ х.ч. Этилацетат х.ч. Нитрит натрия х.ч. Диэтиловый эфир (для наркоза). Фармакопея СССР. Стандартный раствор базаграна в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл. Проявляющие реагенты: N 1 (к смеси, состоящей из 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной хлороводородной кислоты, прибавляют 1 г нитрита натрия); N 2 (в 50 мл дистиллированной воды растворяют 3 г едкого кали, прибавляют 0,5 г 1-нафтола); N 3 - насыщенный раствор о-толидина в этилацетате. В холодильнике растворы хранятся продолжительное время. Приборы, посуда. Ротационный вакуумный испаритель. Водяная баня. Воронки: Бюхнера на 50, 100 мл; делительные на 100, 250, 500 мл. Камера для опрыскивания. Камера для хроматографирования. Колбы: мерные на 50, 100 мл; конические на 100, 250, 500 мл. Лампа ртутно-кварцевая ОКН-11. Микрошприц на 10 мкл. Пластинки стеклянные размером 15 x 15 или 20 x 20 см. Пипетки различной вместимости. Прибор для встряхивания. Цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, 250, 500 мл. Гомогенизатор или измельчитель тканей. Пульверизаторы стеклянные. Стеклянная хроматографическая колонка (диаметр x высота) 20 x 400 мм. Подготовка к определению. Подготовка пластинок. Пластинки "Силуфол" УФ активируют при температуре 130 - 140 °C 20 мин. в 254 сушильном шкафу. Подготовка хроматографических колонок для очистки экстрактов от примесей. В нижнюю часть хроматографической колонки размером 20 - 400 мм помещают 500 мг ваты, обезжиренной гексаном. Затем засыпают в колонку силикагель АСК (70 мл) и уплотняют силикагель постукиванием по колонке. Колонку промывают 50 мл н-гексана или петролейного эфира и прошедший через нее растворитель отбрасывают. После этого колонка готова для очистки экстрактов из проб рыбы. Ход анализа. Экстракция. Ткани подвергают деструкции, затем 20 г гомогената заливают в конической колбе с притертой пробкой диэтиловым эфиром (ацетоном, хлороформом или этилацетатом). Экстракцию базаграна проводят трижды в течение 1,5 ч при встряхивании порциями по 50 мл растворителя. Экстракты объединяют и фильтруют через воронку с бумажным фильтром, заполненным на 2/3 безводным сульфатом натрия. Растворитель отгоняют и испаряют на водяной бане при температуре 60 °C. Сухой остаток растворяют в 10 мл ацетона и вносят его в колонку с силикагелем АСК. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8 пропорциями по 25 - 30 мл. Через 10 мин. после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью груши. Элюат отгоняют или испаряют. Хроматографирование. Сухой остаток после очистки экстрактов и испарения растворителя растворяют 0,3 мл ацетона. В зависимости от количества базаграна в пробе на пластинку наносят либо весь раствор, либо аликвотную его часть. Пробу наносят на пластинку "Силуфол" УФ с помощью шприца или пипетки в одну точку так, 254 чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартные растворы, содержащие близкие к определяемому количества базаграна (2; 5; 10 мкг). Пластинку с нанесенным раствором помещают в камеру для хроматографирования, на дно которой за 30 мин. наливают подвижный растворитель: гексан - ацетон (1:1), гексан - ацетон (1:3) или хлороформ - этиловый спирт (9:1). После того как фронт растворителя поднимается на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Для обнаружения базаграна на пластинках "Силуфол" можно использовать два альтернативных способа: 1. Пластинку помещают в сушильный шкаф, нагретый до 180 °C, и выдерживают 30 - 40 мин. Извлеченные из шкафа пластинки после охлаждения опрыскивают проявляющим реагентом N 1 и затем N 2. При наличии базаграна появляются пятна красного цвета. 2. После высушивания пластинки на воздухе ее облучают УФ-светом 20 - 25 мин., затем помещают в камеру, насыщенную парами хлора. Для получения паров хлора на дно эксикатора наливают насыщенный водный раствор перманганата калия и такой же объем концентрированной хлороводородной кислоты. Через 10 - 15 мин. пластинку вынимают, оставляют на воздухе 15 мин. для удаления избытка хлора и затем опрыскивают насыщенным раствором о-толидина в этилацетате. Базагран обнаруживается в виде сиренево-фиолетовых пятен на светлом фоне с R 0,52 в системе гексан - ацетон (1:1), f 0,75 - в системе гексан - ацетон (1:3) и 0,57 - в системе хлороформ - этиловый спирт (9:1). Обработка результатов анализа. Количественно препарат определяют путем сравнения площади пятен. Измеряют площади с помощью миллиметровой бумаги. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией препарата наблюдается в интервале 1 - 10 мкг препарата. Содержание базаграна в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле: AS 2 X = ---, PS 1 где: A - количество базаграна в стандартном растворе, мкг; S , S - площади пятен соответственно стандартного раствора и 1 2 пробы, кв. мм; P - масса исследуемой пробы, г. Требования безопасности. Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями. При работе с кварцевой лампой необходимо пользоваться светозащитными очками. ---