Методические указания по определению ресина в воде, корнеплодах и ботве свеклы методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1987 № 4329-87)
8 июня 1987 г. № 4329-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕСИНА В ВОДЕ, КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ СВЕКЛЫ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Ю.А. Бунятяном, А.А. Геворгян (Филиал ВНИИГИНТОКС).
Краткая характеристика препарата. Ресин - 5,6,7-трихлор-3- фенил-2Н-1,2,4-бензотиадиазиноксид-1. Брутто-формула C H OCl N S. 13 7 3 2 Молекулярная масса 345,64. Химически чистое вещество - кремоватый порошок без запаха с т. пл. 225 - 230 °C, труднорастворимый в хлороформе, ацетонитриле, диметилформамиде. Растворимость в воде, бензоле, эфире при 20 °C 0,1%. МДУ в корнеплодах сахарной свеклы
0,04 мг/кг; ПДК в воде 0,002 мг/л.
Ресин применяется совместно с ТМТД в виде дуста при предпосевной обработке семян свеклы для повышения полевой всхожести.
Принцип метода. Метод основан на извлечении ресина из воды, корнеплодов и ботвы свеклы органическим растворителем, очистке экстрактов, хроматографировании в тонком слое силикагеля, УФ-облучении и проявлении зон локализации препарата аммиакатом серебра.
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 153.
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
| Параметры | Анализируемый объект | ||
| вода | корнеплоды свеклы | ботва свеклы | |
| Диапазон определяемых концентраций, мг/л, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, % Доверительный интервал среднего значения определения при n = 25 и p = 0,95 | 0,004 — 0,04 95,5 +/- 0,35 +/- 0,14 | 0,02 — 0,2 88,66 +/- 2,88 +/- 1,34 | 0,04 — 0,4 89,31 +/- 1,76 +/- 0,72 |
Примечание. Предел определения 1 мкг.
Избирательность метода. Определению не мешают соединения, применяемые совместно с ресином и близкие по области применения (ТМТД, гидрел, дигидрел, ГМК, хлорхолинхлорид, этрел).
Реактивы и материалы. Ресин х.ч. Хлороформ ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а. н-Гексан ч. Сульфат натрия безводный ч. Аммиак 25-процентный водный ч.д.а. Ацетон ч.д.а. Этиловый эфир. Бензол ч.д.а. Гидроксид натрия х.ч. Хлороводородная кислота х.ч. Бумага индикаторная универсальная (pH 1 — 10). Эфир петролейный. Стандартные растворы ресина в хлороформе с содержанием соединения 5, 10, 20, 50, 100 мкг/мл. Хранить в холодильнике не более 2 недель. Проявляющий реагент: 0,85 г нитрата серебра помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в нескольких миллиметрах дистиллированной воды, прибавляют 2,5 мл концентрированного раствора аммиака. Содержимое колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Хранят проявляющий реагент в защищенном от света месте не более 2 недель.
Приборы, аппаратура, посуда. Ротационный испаритель. Колбы: грушевидные для отгонки растворителей; конические на 500 мл; мерные на 50, 100 мл. Пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол" УФ . Пипетки на 1, 5, 10 мл. Камера
254
хроматографическая. Воронки делительные на 500 мл; химические. Пульверизатор стеклянный. Механический встряхиватель. Ртутно-
кварцевая лампа ПРК-4.
Ход анализа. Экстракция. Пробу воды (250 мл) помещают в колбу на 500 мл, добавляют 100 мл хлороформа и экстрагируют на встряхивателе в течение 20 мин. Органический слой отделяют при помощи делительной воронки в колбу для отгонки растворителя, сливая через слой безводного сульфата натрия. Воду вновь экстрагируют 100 мл хлороформа в течение 20 мин. на встряхивателе. Объединенные экстракты упаривают на роторном испарителе при температуре 60 °C и количественно переносят на хроматографическую пластинку при помощи хлороформа — 3 раза по 0,2 мл.
Навеску свеклы (50 г) или ботвы (25 г) измельчают и помещают в колбу на 250 мл, заливают 30 мл хлороформа и экстрагируют на встряхивателе в течение 20 мин. Хлороформ сливают через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют еще дважды. Объединенный экстракт выпаривают на роторном испарителе при температуре 60 °C. Затем колбу охлаждают и извлекают ресин в виде натриевой соли тройной экстракцией 5-процентным раствором едкого натра порциями по 3 мл. Водную фазу отфильтровывают через фильтр, подкисляют 0,5 М раствором хлороводородной кислоты до pH 5 — 6 и оставляют на 15 мин. Ресин из воды извлекают на встряхивателе, дважды обрабатывая хлороформом порциями по 10 мл в течение 10 мин. Экстракты объединяют, промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции и сливают через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя. Хлороформ выпаривают на ротационном испарителе при 60 °C. Сухой остаток количественно, трижды обрабатывая хлороформом по 0,2 мл, переносят на пластинку «Силуфол».
Условия хроматографирования. При исследовании воды пластинку с нанесенными экстрактами помещают в хроматографическую камеру со смесью гексан — ацетон (1,25:1) и хлороформ — ацетон (16:1). После поднятия фронта растворителей на 10 — 12 см пластинку вынимают и сушат на воздухе.
При хроматографировании экстрактов из корнеплодов свеклы пластинки хроматографируют ступенчатым способом в двух подвижных фазах: 1 — бензол, 2 — гексан — ацетон (1,25:1). В первой камере пластинку оставляют на 1 ч. После полного испарения остатков бензола проводят разделение во второй камере, поднимая растворитель на 10 — 12 см. Затем пластинку вынимают и сушат на воздухе.
Исследуя ботву свеклы, пластинку помещают в камеру с системой растворителей петролейный эфир - этиловый эфир (9:1) и поднимают подвижную фазу на 10 - 12 см. Удалив с пластинки растворитель первой камеры, ее помещают в камеру с подвижной фазой гексан - ацетон (1,25:1) и поднимают фронт на 10 - 12 см. Затем пластинку вынимают и сушат на воздухе. После хроматографирования пластинку подвергают УФ-облучению в течение 60 мин. Затем обрабатывают раствором аммиаката серебра и вновь помещают под УФ-лампу на 5 мин. Зоны локализации ресина проявляются в виде темно-коричневых пятен на светло-сером фоне с величиной R 0,66 +/- 0,02.
f
Обработка результатов анализа. Количество препарата в пробе (X, мг/л или мг/кг) определяют сравнением площади пятна проб и
стандартных растворов по формуле:
AS
2
A — количество ресина в пятне стандартного раствора (в диапазоне линейности), мкг;
P — количество анализируемой пробы, мл или г;
S , S - площади пятен соответственно стандартного раствора и 1 2
пробы, кв. мм.
Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.