--- title: "\"Методические указания по измерению концентраций диазинона, эптама, гамма-изомера ГХЦГ, фенмедифама, ленацила, фосфамида и пиразона при их совместном присутствии в воздухе рабочей зоны хроматографическими методами\"" number: "3196-85" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-3196-85" --- ## "Методические указания по измерению концентраций диазинона, эптама, гамма-изомера ГХЦГ, фенмедифама, ленацила, фосфамида и пиразона при их совместном присутствии в воздухе рабочей зоны хроматографическими методами" # "Методические указания по измерению концентраций диазинона, эптама, гамма-изомера ГХЦГ, фенмедифама, ленацила, фосфамида и пиразона при их совместном присутствии в воздухе рабочей зоны хроматографическими методами" (утв. Минздравом СССР 24.08.1983 N 2860-83, 03.01.1985 N 3196-85)
Утверждены
Минздравом СССР
3 января 1985 г. N 3196-85 (метод ГЖХ)
24 августа 1983 г. N 2860-83 (метод ТСХ)
**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ДИАЗИНОНА, ЭПТАМА,** **ГАММА-ИЗОМЕРА ГХЦГ, ФЕНМЕДИФАМА, ЛЕНАЦИЛА, ФОСФАМИДА** **И ПИРАЗОНА ПРИ ИХ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ В ВОЗДУХЕ**
**РАБОЧЕЙ ЗОНЫ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ <*>**
--- <*> Разработаны И.Г. Белашовой (КНИИГТиПЗ). Краткая характеристика препаратов. Диазинон (см. Методические [указания](https://bukva.ai/docs/metodika-3222-85#p100015)). В воздухе может находиться в виде паров и аэрозоля. ПДК в воздухе рабочей зоны 0,2 мг/куб. м. Эптам (см. с. 389 (т. 1)). В воздухе может находиться в виде паров и аэрозоля. ПДК в воздухе рабочей зоны 2,0 мг/куб. м. Гамма-изомер ГХЦГ (см. Методические [указания](https://bukva.ai/docs/4120-86#p100006)). В воздухе может находиться в виде паров и аэрозоля. ПДК ГХЦГ в воздухе рабочей зоны 0,05 мг/куб. м. Фенмедифам (см. с. 368 (т. 1)). В воздухе может находиться в виде паров и аэрозоля. ПДК в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/куб. м. Ленацил - 3-циклогексил-5,6-триметиленурацил. Брутто-формула C H N O . Молекулярная масса 234,3. Синоним - гексилур. Белое 13 17 2 2 кристаллическое вещество. Т. пл. 315 - 317 °C. Практически нелетуч. Растворимость в воде 6 мг/л, в большинстве органических растворителей - 40 г/кг. В воздухе может находиться в виде аэрозоля. ПДК в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/куб. м. Фосфамид (см. Методические [указания](https://bukva.ai/docs/metodika-3222-85#p100042)). В воздухе может находиться в виде паров и аэрозоля. ПДК в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/куб. м. Пиразон - 5-амино-2-фенил-4-хлор-пиридазон-3. Брутто-формула C H ClN O. Молекулярная масса 221,7. Синонимы - пирамин, феназон, 10 8 3 хлоридазон. Белое кристаллическое вещество. Т. пл. 205 - 206 °C. Давление паров 9,9 Па при 40 °C. Растворимость в воде 400 мг/л, ацетоне - 28 г/кг, метаноле - 34, бензоле - 0,7 г/кг. Плохо растворим в петролейном эфире. В воздухе может находиться в виде паров и аэрозоля. ПДК в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/куб. м. Методика определения диазинона, эптама, гамма-изомера ГХЦГ, фенмедифама, ленацила, фосфамида и пиразона в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии. Принцип метода. Метод основан на хроматографировании препаратов в тонком слое силикагеля (пластинки "Силуфол") с последующим обнаружением зон локализации препаратов путем использования следующих реагентов: бромфеноловый синий; 2,6-дибром-N-оксихинонимин; о-толидин; дифениламин; о-толуидин; йодкрахмальный реактив. Отбор проб проводят с концентрированием (бумажный фильтр "синяя лента", пенополиуретан эластичный). Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 180. Таблица 180 **МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**
ПрепаратНижний предел измерения в анализируемом объеме пробы, мкг (ТСХ); нг (ГЖХ)Нижний предел измерения в воздухе, мг/куб. мДиапазон измеряемых концентраций, мг/куб. мГраница суммарной погрешности, %
Метод тонкослойной хроматографии <*>
Диазинон20,044 <*>0,044 - 0,660+/- 18,4
Эптам10,220,022 - 0,660+/- 18,4
гамма-ГХЦГ10,220,022 - 0,660+/- 18,4
Фенмедифам10,220,022 - 0,660+/- 18,4
Ленацил0,50,0110,011 - 0,440+/- 18,4
Фосфамид0,50,0110,011 - 0,440+/- 18,4
Пиразон0,50,0110,011 - 0,440+/- 18,4
Метод газожидкостной хроматографии <**>
гамма-ГХЦГ0,10,0020,002 - 0,5+/- 16,3
Пиразон10,020,02 - 1,6+/- 16,3
Диазинон50,10,1 - 4,0+/- 16,3
Фосфамид50,10,1 - 12,0+/- 16,3
Фенмедифам50,10,1 - 12,0+/- 16,3
--- <*> При отборе 45 л воздуха. <**> При отборе 10 л воздуха. Избирательность метода. Определению не мешают другие компоненты технических препаратов (40-процентный с.п. диазинона; 75-процентный к.э. эптама; 90-процентный техн. препарат гамма-изомера ГХЦГ; 16-процентный к.э. фенмедифама; 80-процентный с.п. ленацила; 40-процентный к.э. фосфамида; 60-процентный с.п. пиразона). Реактивы, растворы, материалы. Диазинон х.ч. Эптам х.ч. Гамма-изомер ГХЦГ х.ч. Фенмедифам х.ч. Ленацил х.ч. Фосфамид х.ч. Пиразон х.ч. Ацетон х.ч. Хлороформ ч.д.а. н-Гексан ч. Эфир диэтиловый х.ч. Бензол х.ч. Толуол ч.д.а. Метанол х.ч. Этанол 96-процентный. Хлороводородная кислота х.ч. Лимонная кислота х.ч., 2-процентный раствор. Ледяная уксусная кислота х.ч. Гидроксид натрия х.ч., 0,5-процентный раствор. Пероксид водорода х.ч., 3-процентный раствор. Нитрат серебра ч.д.а. Вольфрам натрия ч., 10-процентный раствор. Перманганат калия х.ч. Йодид калия х.ч. Крахмал растворимый. Бромфеноловый синий ч.д.а. Орто-толидин ч. Орто-толуидин ч. Дифениламин ч.д.а. 2,6-Дибром-N-оксихинонимин. Фильтры бумажные "синяя лента". Пенополиуретан эластичный бесцветный, очищенный ацетоном в течение 12 ч, а затем хлороформом в течение 36 - 48 ч в аппарате Сокслета. После очистки нарезают кусочки размером 2 - 3 мм и 5 - 6 мм. Подвижные фазы: гексан - ацетон (4:1); гексан - эфир диэтиловый (2:1); гексан - бензол (1:1); гексан - толуол (1:1); бензол - метанол - ацетон (7:1:2); бензол - метанол - эфир диэтиловый (7:1:2,5). Проявляющие реагенты: N 1 - раствор 0,05 г бромфенолового синего в 10 мл ацетона разбавляют до 100 мл 0,5-процентным водно-ацетоновым (1 часть воды + 3 части ацетона) раствором нитрата серебра. Для обесцвечивания фона используется 2-процентный раствор лимонной кислоты. Реактив устойчив длительное время; N 2 - 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-оксихинонимина в н-гексане. Устойчив длительное время; N 3 - смесь равных объемов раствора А и Б. Раствор А - 0,5-процентный профильтрованный раствор о-толидина в ацетоне. Хранится на холоде 3 дня. Раствор Б - 3 части 0,5-процентного раствора гидроксида натрия и 2 части 3-процентного раствора пероксида водорода. Используется свежеприготовленным; N 4 - 1-процентный раствор дифениламина в ацетоне. Используется свежеприготовленным; N 5 - 160 мг о-толидина растворить в 30 мл ледяной уксусной кислоты, раствор довести до 50 мл дистиллированной водой и добавить 1 г йодида калия. Реагент устойчив месяц; N 6 - 32 мг о-толуидина растворить в 10 мл 1 н раствора уксусной кислоты, добавить 1,5 мл 10-процентного раствора вольфрама натрия, 25 мг йодида калия и 12 мл ацетона. Реагент используется свежеприготовленным; N 7 - 5 мл 1-процентного раствора йодида калия смешать с 5 мл 3-процентного свежеприготовленного раствора крахмала и добавить 2 мл этанола. Реагент используется свежеприготовленным. Стандартные растворы препаратов в ацетоне или хлороформе концентрации 100 мкг/мл. Готовят из химически чистых или технических препаратов с учетом содержания действующего начала. Растворы хранятся 3 мес. Приборы, посуда. Аспирационное устройство. Фильтродержатели. Поглотительные трубки гофрированные, стеклянные длиной 5 см, наполненные пенополиуретаном (кусочки размером 2 - 3 мм, на торцах - по 5 - 6 мм). Ротационный испаритель с набором колб. Водяная баня. Аппарат Сокслета. Посуда стеклянная лабораторная. Пластинки "Силуфол" размером 150 x 150 мм. Камеры хроматографические. Пульверизаторы стеклянные. Лампа УФ-света ОКН-11. Камера для хлорирования (можно использовать большой эксикатор). На дно камеры помещают чашку Петри со взвешенным марганцовокислым калием (4 - 5 г), в нее наливают 12 - 15 мл концентрированной хлороводородной кислоты. Камера готова к использованию через 10 мин. Условия отбора проб воздуха. Исследуемый воздух со скоростью 1,5 л/мин. аспирируют через последовательно соединенные фильтр "синяя лента", 1-ю поглотительную трубку с пенополиуретаном и 2-ю поглотительную трубку с пенополиуретаном, смоченным дистиллированной водой (для улавливания паров фосфамида). Воздух аспирируют в течение 30 мин. Для определения 1/2 ПДК препаратов следует отобрать не более 45 л воздуха. Пробы хранятся в закрытых склянках 12 дней. Ход анализа. Фильтр в колбе заливают 10 мл ацетона, закрывают пробкой и оставляют на 1 ч. Пенополиуретан из первой и второй поглотительной трубки помещают в 2 разные колбочки, заливают по 25 мл хлороформа, закрывают пробками и оставляют на 15 мин. при периодическом перемешивании. Раствор пробы с фильтра и с пенополиуретана 1-й поглотительной трубки сливают в колбу ротационного испарителя, фильтр промывают дважды по 5 мл ацетона, а пенополиуретан тщательно отжимают. Раствор пробы с пенополиуретаном 2-й поглотительной трубки сливают в ту же колбу ротационного испарителя через слой безводного сульфата натрия, тщательно отжимая пенополиуретан. Растворитель отгоняют до объема 0,1 - 0,2 мл. Остаток в колбе ротационного испарителя количественно наносят на предварительно размеченную хроматографическую пластинку "Силуфол" в точку А (рис. 20), которая находится на высоте 3,5 см от нижнего края пластинки и на расстоянии 1,5 см от левого края пластинки. В точку Б, находящуюся на высоте 3,5 см от нижнего края пластинки и на расстоянии 1,5 см от правого края пластинки, наносят по 0,03 мл стандартных растворов диазинона и эптама, что соответствует 3 мкг каждого вещества. Пластинку помещают в хроматографическую камеру, в которую за 30 мин. до хроматографирования была налита подвижная фаза гексан - ацетон (4:1) или гексан - эфир (2:1), и подвергают первому хроматографированию (на рисунке 20 - направление I). После поднятия фронта подвижной фазы на высоту 10 см пластинку вынимают и оставляют до полного испарения растворителей. II
1,5 / / < > \ \
I/\Г \ ___ / / 1 \ \ \___/ / \ 1а / 1б \ 6 /\ / \ / \ / 1в \ / 3
/ /
1,5 < >. А ___1,5
3,5/\ \/1,5/ 2 \ \___/ . В /\ \//\ 3,5 \/
III
Рис. 20. Схема N 1 (ТСХ) разметки пластин и пояснения
(размеры в см): точки нанесения: А - пробы; Б - смеси стандартных растворов диазинона и эптама; В - смеси стандартных растворов фенмедифама, ленацила, фосфамида и пиразона; Г - стандартного раствора гамма-изомера ГХЦГ; 1, 2 - части пластинки после ее разреза; 1а, 1б, 1в - фрагменты первой части пластинки после ее разреза. I - направление первого хроматографирования - в ПФ гексан - ацетон (4:1) или гексан - диэтиловый эфир (2:1); II - направление второго хроматографирования - в ПФ гексан - бензол (1:1) или гексан - толуол (1:1); III - направление второго хроматографирования - в ПФ бензол - метанол - ацетон (7:1:2) или бензол - метанол - диэтиловый эфир (7:1:2,5). В точку В, находящуюся на расстоянии 1,5 см от нижнего и от левого края пластинки, наносят по 0,03 мл стандартных растворов фенмедифама, ленацила, фосфамида и пиразона, а в точку Г, находящуюся на расстоянии 1,5 см от верхнего края и левого края пластинки, наносят 0,03 мл стандартного раствора гамма-изомера ГХЦГ, что соответствует 3 мкг вещества. Затем пластинку разрезают по горизонтали на уровне 2,5 см вверх от точки нанесения пробы А. Часть 1 (верхнюю) пластинки поворачивают на 90°, помещают в хроматографическую камеру, в которую за 30 мин. до хроматографирования была налита подвижная фаза гексан - бензол (1:1) или гексан - толуол (1:1), и подвергают второму хроматографированию в направлении II (см. [рис. 20](#p100047)). После подъема фронта подвижной фазы на высоту 10 см пластинку вынимают из камеры и оставляют до полного испарения следов растворителей. Затем пластинку разрезают по линиям, как указано на рисунке. Части 1а и 1в пластинки обрабатывают проявляющим реагентом N 1, помещают на 20 мин. в сушильный шкаф, нагретый до 80 °C, затем охлаждают их и обесцвечивают фон раствором лимонной кислоты. Диазинон и эптам проявляются в виде быстро обесцвечивающихся (в течение 5 мин.) лиловых пятен на желтом фоне. Части 1а и 1в пластинки можно обработать и проявляющим реагентом N 2 в качестве альтернативы, поместить на 10 мин. в сушильный шкаф, нагретый до 115 °C. При этом диазинон проявляется в виде розового (нижний предел измерения 0,5 мкг), а эптам - в виде желтого пятна. Цвет пятен устойчив длительное время. Величины R диазинона и эптама приведены в f таблице 181. Таблица 181 ВЕЛИЧИНЫ R ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ РАЗЛИЧНЫХ ПОДВИЖНЫХ ФАЗ F | Препарат | Гексан - ацетон (4:1) | Гексан - эфир (2:1) | Гексан - бензол (1:1) | Гексан - толуол (1:1) | Бензол - метанол - ацетон (7:1:2) | Бензол - метанол - эфир (7:1:2,5) | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Диазинон Эптам гамма-изомер ГХЦГ Фенмедифам Ленацил Фосфамид Пиразон | 0,48 0,79 0,57 0,07 0,09 0,03 0,02 | 0,45 0,82 0,73 0,05 0,01 0,00 0,00 | 0,02 0,07 0,79 - - - - | 0,00 0,03 0,83 - - - - | - - - 0,83 0,74 0,55 0,45 | - - - 0,62 0,48 0,40 0,35 | Часть 1б пластинки обрабатывают проявляющим реагентом N 3 или 4 и влажную помещают под УФ-свет на 15 - 20 мин. При обработке о-толидином гамма-изомер ГХЦГ проявляется в виде сине-зеленого, а при обработке дифениламином - серого пятна. Окраска пятен устойчива несколько дней. Величины R гамма-изомера ГХЦГ приведены f в [таблице 181](#p100052). Часть 2 пластинки поворачивают на 90°, помещают под углом наклона 30 - 40° в хроматографическую камеру, в которую непосредственно перед хроматографированием была налита подвижная фаза бензол - метанол - ацетон (7:1:2) или бензол - метанол - эфир (7:1:2,5) в самом минимальном количестве (например, 12 мл в камеру диаметром 15 см), и подвергают второму хроматографированию (на [рисунке 20](#p100047) - направление III). После подъема фронта подвижной фазы на высоту 11 см пластинку вынимают из камеры и оставляют до полного испарения следов растворителей. Затем пластинку помещают на 5 - 10 мин. в камеру для хлорирования, вынимают ее, оставляют на воздухе до улетучивания остатков хлора (15 - 20 мин.) и после этого обрабатывают проявляющим реагентом N 1, 2 или 3. Окраска пятен ленацила, фосфамида и пиразона устойчива несколько дней, пятна фенмедифама - несколько часов. Величины R фенмедифама, f ленацила, фосфамида и пиразона приведены в [таблице 181](#p100052). Содержание препаратов в пробе определяют по предварительно построенным (во время проведения исследований) градуировочным графикам зависимости площади пятен препаратов (кв. мм), которая определяется путем использования миллиметровой бумаги, от количества препаратов (мкг). Обработка результатов анализа. Концентрацию каждого вещества в воздухе (X, мг/куб. м) вычисляют по формуле: G X = ---, V 20 где: G - количество препарата в пробе, найденное по калибровочному графику, мкг; V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к 20 стандартным условиям, л. Методика определения диазинона, гамма-изомера ГХЦГ, фосфамида, пиразона и фенмедифама в воздухе рабочей зоны газохроматографическим методом. Принцип метода. Метод основан на газохроматографическом определении препаратов с использованием ДЭЗ. Отбор проб проводят с концентрированием. Метрологическая характеристика метода (см. [табл. 180](#p100013)). Избирательность метода. Определению не мешают близкие по срокам применения препараты эптам, тиллам и ленацил. Реактивы, растворы, материалы. Диазинон х.ч. Гамма-изомер ГХЦГ х.ч. Фосфамид х.ч. Пиразон х.ч. Фенмедифам х.ч. Ацетон х.ч. Хлороформ ч.д.а. Безводный сульфат натрия ч.д.а. 5% SE-30 на хроматоне N-AW (0,250 - 0,315 мм); 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,250 - 0,315 мм). Фильтры бумажные "синяя лента". Пенополиуретан эластичный, бесцветный, порезанный на куски размером 2 - 5 мм и очищенный ацетоном (12 ч) и хлороформом (12 ч) в аппарате Сокслета. Стандартные растворы препаратов в ацетоне с концентрацией 10 мкг/мг готовят из химически чистых препаратов. Растворы хранятся в холодильнике 3 мес. Приборы, посуда. Хроматограф с ДЭЗ. Аспирационное устройство. Микрошприц. Фильтродержатели. Стеклянные гофрированные поглотительные трубки длиной 5 см, диаметром 1 см. Аппарат Сокслета. Ротационный вакуумный испаритель с набором колб. Водяная баня. Посуда лабораторная стеклянная. Колонки стеклянные длиной 1, 2 м, диаметром 3 мм. Условия отбора проб воздуха. Воздух со скоростью 1,0 л/мин. протягивают через фильтр, помещенный в фильтродержатель, и соединенную с ним первую поглотительную трубку с пенополиуретаном и вторую поглотительную трубку с пенополиуретаном, смоченным дистиллированной водой (для поглощения паров фосфамида). Для определения 1/2 ПДК препаратов следует отобрать не более 10 л воздуха. Пробы хранятся в холодильнике в закрытых склянках 12 дней. Ход анализа. Подготовка проб к анализу. Фильтр в колбе заливают 10 мл ацетона, закрывают пробкой и оставляют на 1 ч. Пенополиуретан из первой и второй поглотительных трубок помещают в 2 разные колбы, в одну заливают 25 мл ацетона, в другую - 25 мл хлороформа, закрывают пробками и оставляют на 15 мин. при периодическом перемешивании. Ацетоновые растворы от фильтра и пенополиуретана первой поглотительной трубки объединяют (фильтр при этом промывают дважды по 5 мл ацетона, а пенополиуретан тщательно отжимают) и упаривают в вакууме до объема около 0,5 мл. Раствор пробы от пенополиуретана второй поглотительной трубки пропускают через слой безводного сульфата натрия, тщательно отжимая сорбент, упаривают в вакууме досуха, сухой остаток растворяют в 0,2 - 0,3 мл ацетона и количественно переносят в смесь растворов пробы от фильтра и пенополиуретана первой поглотительной трубки. Общий объем раствора доводят ацетоном до 1 мл. Для анализа берут аликвотную часть (5 мкл) полученного раствора пробы. Условия газохроматографического анализа. ДЭЗ. Колонка стеклянная (длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм; длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм). Набивка хроматон N-AW + 5% XE-60 (l = 1 м, d = 3 мм); хроматон N-AW + 5% SE-30 и хроматон N-AW-DMCS + 5% XE-60 в соотношении 1:1 (l = 2 м). Температура, °C: испарителя - 230 или 200 <*>; колонки - 190 - 250 или 140 <*>; детектора - 250 или 200 <*>. Скорость газа-носителя на колонке 50 мл/мин., на -12 детекторе - 6 л/ч. Шкала амперметра 50 x 10 А. Скорость диаграммной ленты 20 см/ч. Объем анализируемой пробы 5 мкл. Общий объем пробы 1 мл. --- <*> Температурные условия анализа фенмедифама. Анализ фенмедифама вследствие его более низкой термической устойчивости и особенности его структуры проводят отдельно. Присутствующие в смеси препараты диазинон, гамма-изомер ГХЦГ, фосфамид и пиразон определению не мешают. Смесь препаратов диазинона, гамма-изомера ГХЦГ, фосфамида и пиразона анализируют отдельно. Присутствующий в смеси фенмедифам определению не мешает. В таблице 182 приведены значения времени удерживания препаратов на разных колонках. Таблица 182 **ВРЕМЯ УДЕРЖИВАНИЯ ПРЕПАРАТОВ НА РАЗНЫХ КОЛОНКАХ** | Препарат | 5% SE-30 + 5% XE-60 | 5% XE-60 | | --- | --- | --- | | Диазинон гамма-ГХЦГ Фосфамид Пиразон Фенмедифам | 1 мин. 07 с 2 мин. 04 с 5 мин. 35 с 11 мин. 08 с 1 мин. 07 с | 1 мин. 11 с 2 мин. 10 с 6 мин. 12 с 11 мин. 00 с 2 мин. 08 с | Количество препаратов в анализируемом объеме пробы определяют по предварительно построенным градуировочным графикам зависимости площади пика на хроматограмме (кв. мм) от количества препарата (нг). Обработка результатов анализа. Концентрацию каждого вещества в воздухе (X, мг/куб. м) рассчитывают по формуле: GV 2 X = -----, V V 1 20 где: G - количество препаратов в хроматографируемом объеме пробы, нг; V - объем раствора пробы, взятый для хроматографирования, 1 мкл; V - общий объем анализируемого раствора, мл; 2 V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к 20 стандартным условиям, л. Требования безопасности. Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях. ---