---
title: "\"Временные методические указания по определению действующего вещества препарата гибберсиб в воде и почве методом тонкослойной хроматографии\""
number: "3162-84"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-3162-84"
---

## "Временные методические указания по определению действующего вещества препарата гибберсиб в воде и почве методом тонкослойной хроматографии"

# "Временные методические указания по определению действующего вещества препарата гибберсиб в воде и почве методом тонкослойной хроматографии"

(утв. Минздравом СССР 27.11.1984 N 3162-84)


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Заместитель Главного<br>
государственного<br>
санитарного врача СССР<br>
**А.И.ЗАИЧЕНКО**

</div>

<div align="center">

27 ноября 1984 г. N 3162-84

</div>


<a id="p100002"></a>**ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА ГИББЕРСИБ**
**В ВОДЕ И ПОЧВЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**


## 1. <a id="p100003"></a>Краткая характеристика препарата


<a id="p100004"></a>    Основное  действующее  начало  препарата  гибберсиб  -  натриевая  соль
гибберелловой кислоты (или гиббереллин А ).
                                        3

            O


<table>
<colgroup><col width="35%"><col width="10%"><col width="15%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td>/</td><td>\</td><td>CO /</td><td colspan="2">\ /</td><td>/ \ \ /</td></tr>
</table>

         CH   COONa     2
           3

<a id="p100007"></a>Гибберсиб представляет собой мелкий однородный гигроскопичный порошок, получаемый высушиванием на распылительной сушилке продуктов метаболизма грибка Fusarium moniliforme Sheld. Гибберсиб является смесью натриевых солей гибберелловой, карбоновых кислот и карбоната натрия.
<a id="p100008"></a>Растворимость гибберсиба в воде при 20 °C - 2 г/л. Растворим в этиловом и метиловом спиртах, этилацетате, ацетоне. Нерастворим в бензоле, гексане.
<a id="p100009"></a>Применяется в качестве регулятора роста растений (томаты, виноград) в период цветения.


## 2. <a id="p100010"></a>Методика определения действующего препарата гибберсиб



### <a id="p100011"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100012"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100013"></a>    Определение  основано  на  экстракции  гиббереллинов из  воды  и  почвы
этилацетатом   с   последующей  тонкослойной  хроматографией  экстракта  на
пластинках   "Силуфол".  Обнаружение  гиббереллина  А  проводят  обработкой
                                                     3
пластинок 70-процентной серной кислотой и проявлением в УФ-свете.

##### <a id="p100014"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100015"></a>    Диапазон  определяемых  концентраций - 0,05 - 0,5 мг/л в воде и 0,4 - 5
мг/кг  в  почве. Предел обнаружения препарата на пластинках - 3 мкг. Предел
обнаружения  в  воде  -  0,05  мг/л,  в почве - 0,4 мг/кг. Среднее значение
определения стандартных количеств гиббереллина А : 74% - вода, 66% - почва.
                                                3
Стандартное  отклонение:  вода  -  12, почва - 9. Относительное стандартное
отклонение:  вода - 16%, почва - 14%. Доверительный интервал среднего при p
= 0,95 и n = 5 для воды +/- 15 и для почвы +/- 14%.

##### <a id="p100016"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100017"></a>    Определению  не  мешают  соли  других  гиббереллинов А ,  А ,  А , А  ,
                                                          4    7    9   14
неорганические компоненты и экстрактивные вещества из почвы.


### <a id="p100018"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100019"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) ч, [ГОСТ 8981-78](https://bukva.ai/docs/gost-8981-78).
<a id="p100020"></a>Хлороформ медицинский, фармакопея СССР.
<a id="p100021"></a>Метанол чда, [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77).
<a id="p100022"></a>Кислота серная хч, ГОСТ 4204-77, 70-процентный раствор.
<a id="p100023"></a>Аммиак водный технический, ГОСТ 9-77.
<a id="p100024"></a>    Гиббереллин кристаллический (А  ~ 80%), ТУ 64-3-103-75.
                                  3
<a id="p100025"></a> Натрий хлористый, ГОСТ 4233-77.
<a id="p100026"></a> Уксусная кислота ледяная, ГОСТ 61-75.
<a id="p100027"></a>    Хроматографические пластинки "Силуфол" (ЧССР).
<a id="p100028"></a>    Стандартный   раствор   гиббереллина  А    с  содержанием  1000  мкг/мл
                                           3
этилацетата.


### <a id="p100029"></a>2.3. Приборы, аппаратура и посуда


<a id="p100030"></a>Ультрахемископ типа "Хроматоскоп".
<a id="p100031"></a>Центрифуга типа ЦЛС-31М.
<a id="p100032"></a>Ротационный испаритель ИР-1М или любой другой.
<a id="p100033"></a>Весы аналитические типа ВЛР-200 (отсчет до 0,0001 г).
<a id="p100034"></a>Весы технические типа ВЛТК-500.
<a id="p100035"></a>Универсальная встряхивающая машина типа К-203 лабор. 2162.
<a id="p100036"></a>Камера для хроматографии из комплекта КТХ-01 или сосуды цилиндрические типа СЦ.
<a id="p100037"></a>Пульверизатор стеклянный.
<a id="p100038"></a>pH-метр типа pH-262.
<a id="p100039"></a>Воронка делительная типа ВД-1-250, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100040"></a>Колбы типа КнКШ-100, 250-29/32, ГрКШ-10-14/23, ГОСТ 25336-82.
<a id="p100041"></a>Пипетка 1-1-1, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74).
<a id="p100042"></a>Линейка измерительная металлическая, ГОСТ 427-75.
<a id="p100043"></a>Микрошприц 100 мкл.
<a id="p100044"></a>Капилляры стеклянные.
<a id="p100045"></a>Сито с отверстиями 1 мм.


### <a id="p100046"></a>2.4. Подготовка к определению



##### <a id="p100047"></a>2.4.1 Приготовление системы растворителей

<a id="p100048"></a>Смешивают хлороформ с метанолом в соотношении 10:1 (система I) и хлороформ, метанол с уксусной кислотой в соотношении 10:1:0,1 по объему (система II).

##### <a id="p100049"></a>2.4.2 Отбор проб

<a id="p100050"></a>Отбор пробы производится в соответствии с Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (МЗ СССР, ГСЭУ, Москва, 1980 г., N 2051-75 от 21.02.79).
<a id="p100051"></a>Анализы производят в день отбора проб или на следующий день.


### <a id="p100052"></a>2.5. Проведение определения



##### <a id="p100053"></a>2.5.1 Экстракция гиббереллина

<a id="p100054"></a>Вода. К 200 мл воды приливают 80 мл 0,5% раствора аммиака, смешивают на встряхивающей машине в течение 15 мин. и доводят pH раствора до 2,2 +/- 0,2. Затем приливают 25 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют в делительной воронке этилацетатом порциями по 50, 40, 40 мл. Этилацетатный экстракт освобождают от воды на центрифуге (10 мин. при 5000 об./мин.) и упаривают до объема ~ 0,1 - 0,2 мл.
<a id="p100055"></a>Почва. Почву просеивают через сито с отверстиями 1 мм. К 100 г почвы приливают 80 мл 0,5-процентного раствора аммиака, гомогенизируют в течение 15 мин. на встряхивающей машине и осаждают на центрифуге в течение 10 мин. при 5000 об./мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок промывают 30 мл 0,5-процентного раствора аммиака, еще раз центрифугируют. Объединяют обе порции и доводят pH до 2,2 +/- 0,2. Приливают 25 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют в делительной воронке этилацетатом порциями по 50, 40, 40 мл. Этилацетатный экстракт освобождают от хлопьев и воды на центрифуге (при 5000 об./мин., 10 мин.). Экстракт сливают, отделяя воду на делительной воронке, а осадок промывают 10 мл этилацетата, еще раз центрифугируют, объединяют с экстрактом и упаривают до объема ~ 0,1 - 0,2 мл.

##### <a id="p100056"></a>2.5.2 Хроматографирование и проявление

<a id="p100057"></a>    Экстракт   из   воды.   Упаренный  экстракт  количественно  наносят  на
хроматографическую  пластинку (диаметр пятна 10 - 12 мм) при помощи пипетки
с  оттянутым  концом,  капилляром  или  микрошприцем  и параллельно наносят
стандартный раствор (3 - 20 мкг), подсушивают на воздухе и хроматографируют
в  системе  растворителей  I  (хлороформ  -  метанол 10:1 по объему). После
окончания хроматографирования пластинки подсушивают под тягой и опрыскивают
из   пульверизатора   70-процентной    серной    кислотой.    Хроматограммы
рассматривают    в    УФ-свете.   Обводят  контуры  пятен,  соответствующих
гиббереллину А  в пробе и стандарте.
              3
<a id="p100058"></a>Экстракт из почвы. На хроматографическую пластинку в левый угол на расстоянии 15 - 20 мм от края пластинки наносят упаренный экстракт из почвы (диаметр пятна 10 - 12 мм) и хроматографируют в системе II (хлороформ - метанол - ледяная уксусная кислота 10:1:0,1). После того как фронт растворителя дойдет до края пластинки, ее извлекают из хроматографической камеры, поворачивают на 90° и помещают в ту же систему для хроматографирования. Так же поступают со стандартным раствором, нанесенным на другую пластинку. После хроматографирования пластинки обрабатывают серной кислотой, как указано для воды.


### <a id="p100059"></a>2.6. Обработка результатов анализа


<a id="p100060"></a>С помощью линейки или миллиметровой бумаги измеряют размеры пятен на хроматограммах проб и стандартных растворов, вычисляют их площади.
<a id="p100061"></a>    Содержание гиббереллина А  в мг/л или мг/кг вычисляют по формуле:
                             3

                                    A x S
                                         2
<a id="p100062"></a>                                C = ------,
                                    S  x P
                                     1

<a id="p100063"></a>    где:
<a id="p100064"></a>    A - количество стандартного раствора, мкг;
<a id="p100065"></a>    S  - площадь пятна на хроматограмме пробы, кв. мм;
     2
<a id="p100066"></a>    S  - площадь пятна на хроматограмме стандарта, кв. мм;
     1

<div align="center">

<a id="p100067"></a>    P - масса или объем пробы, взятые для анализа, г или мл.

</div>



## 3. <a id="p100068"></a>Требования безопасности


<a id="p100069"></a>Выполняются требования по технике безопасности, необходимые при работе в химических лабораториях.



<a id="p100070"></a>

---