Временные методические указания по определению действующего вещества препарата гибберсиб в воде и почве методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 27.11.1984 № 3162-84)

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА ГИББЕРСИБ В ВОДЕ И ПОЧВЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Краткая характеристика препарата

Основное действующее начало препарата гибберсиб — натриевая соль гибберелловой кислоты (или гиббереллин А ). 3

        O

/

\

CO /

\ /

/ \ \ /

     CH   COONa     2
       3

Гибберсиб представляет собой мелкий однородный гигроскопичный порошок, получаемый высушиванием на распылительной сушилке продуктов метаболизма грибка Fusarium moniliforme Sheld. Гибберсиб является смесью натриевых солей гибберелловой, карбоновых кислот и карбоната натрия.

Растворимость гибберсиба в воде при 20 °C — 2 г/л. Растворим в этиловом и метиловом спиртах, этилацетате, ацетоне. Нерастворим в бензоле, гексане.

Применяется в качестве регулятора роста растений (томаты, виноград) в период цветения.

2. Методика определения действующего препарата гибберсиб

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

    Определение  основано  на  экстракции  гиббереллинов из  воды  и  почвы
этилацетатом   с   последующей  тонкослойной  хроматографией  экстракта  на
пластинках   "Силуфол".  Обнаружение  гиббереллина  А  проводят  обработкой

                                                 3

пластинок 70-процентной серной кислотой и проявлением в УФ-свете.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

    Диапазон  определяемых  концентраций - 0,05 - 0,5 мг/л в воде и 0,4 - 5
мг/кг  в  почве. Предел обнаружения препарата на пластинках - 3 мкг. Предел
обнаружения  в  воде  -  0,05  мг/л,  в почве - 0,4 мг/кг. Среднее значение

определения стандартных количеств гиббереллина А : 74% — вода, 66% — почва. 3

Стандартное  отклонение:  вода  -  12, почва - 9. Относительное стандартное
отклонение:  вода - 16%, почва - 14%. Доверительный интервал среднего при p

= 0,95 и n = 5 для воды +/- 15 и для почвы +/- 14%.

2.1.3 Избирательность метода

    Определению  не  мешают  соли  других  гиббереллинов А ,  А ,  А , А  ,
                                                          4    7    9   14

неорганические компоненты и экстрактивные вещества из почвы.

2.2. Реактивы и материалы

Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) ч, ГОСТ 8981-78.

Хлороформ медицинский, фармакопея СССР.

Метанол чда, ГОСТ 6995-77.

Кислота серная хч, ГОСТ 4204-77, 70-процентный раствор.

Аммиак водный технический, ГОСТ 9-77.

Гиббереллин кристаллический (А ~ 80%), ТУ 64-3-103-75. 3

Натрий хлористый, ГОСТ 4233-77.

Уксусная кислота ледяная, ГОСТ 61-75.

Хроматографические пластинки «Силуфол» (ЧССР).

Стандартный раствор гиббереллина А с содержанием 1000 мкг/мл 3 этилацетата.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Ультрахемископ типа «Хроматоскоп».

Центрифуга типа ЦЛС-31М.

Ротационный испаритель ИР-1М или любой другой.

Весы аналитические типа ВЛР-200 (отсчет до 0,0001 г).

Весы технические типа ВЛТК-500.

Универсальная встряхивающая машина типа К-203 лабор. 2162.

Камера для хроматографии из комплекта КТХ-01 или сосуды цилиндрические типа СЦ.

Пульверизатор стеклянный.

pH-метр типа pH-262.

Воронка делительная типа ВД-1-250, ГОСТ 25336-82.

Колбы типа КнКШ-100, 250-29/32, ГрКШ-10-14/23, ГОСТ 25336-82.

Пипетка 1-1-1, ГОСТ 20292-74.

Линейка измерительная металлическая, ГОСТ 427-75.

Микрошприц 100 мкл.

Капилляры стеклянные.

Сито с отверстиями 1 мм.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Приготовление системы растворителей

Смешивают хлороформ с метанолом в соотношении 10:1 (система I) и хлороформ, метанол с уксусной кислотой в соотношении 10:1:0,1 по объему (система II).

2.4.2 Отбор проб

Отбор пробы производится в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (МЗ СССР, ГСЭУ, Москва, 1980 г., № 2051-75 от 21.02.79).

Анализы производят в день отбора проб или на следующий день.

2.5. Проведение определения

2.5.1 Экстракция гиббереллина

Вода. К 200 мл воды приливают 80 мл 0,5% раствора аммиака, смешивают на встряхивающей машине в течение 15 мин. и доводят pH раствора до 2,2 +/- 0,2. Затем приливают 25 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют в делительной воронке этилацетатом порциями по 50, 40, 40 мл. Этилацетатный экстракт освобождают от воды на центрифуге (10 мин. при 5000 об./мин.) и упаривают до объема ~ 0,1 — 0,2 мл.

Почва. Почву просеивают через сито с отверстиями 1 мм. К 100 г почвы приливают 80 мл 0,5-процентного раствора аммиака, гомогенизируют в течение 15 мин. на встряхивающей машине и осаждают на центрифуге в течение 10 мин. при 5000 об./мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок промывают 30 мл 0,5-процентного раствора аммиака, еще раз центрифугируют. Объединяют обе порции и доводят pH до 2,2 +/- 0,2. Приливают 25 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют в делительной воронке этилацетатом порциями по 50, 40, 40 мл. Этилацетатный экстракт освобождают от хлопьев и воды на центрифуге (при 5000 об./мин., 10 мин.). Экстракт сливают, отделяя воду на делительной воронке, а осадок промывают 10 мл этилацетата, еще раз центрифугируют, объединяют с экстрактом и упаривают до объема ~ 0,1 — 0,2 мл.

2.5.2 Хроматографирование и проявление

    Экстракт   из   воды.   Упаренный  экстракт  количественно  наносят  на
хроматографическую  пластинку (диаметр пятна 10 - 12 мм) при помощи пипетки
с  оттянутым  концом,  капилляром  или  микрошприцем  и параллельно наносят

стандартный раствор (3 — 20 мкг), подсушивают на воздухе и хроматографируют в системе растворителей I (хлороформ — метанол 10:1 по объему). После окончания хроматографирования пластинки подсушивают под тягой и опрыскивают

из   пульверизатора   70-процентной    серной    кислотой.    Хроматограммы
рассматривают    в    УФ-свете.   Обводят  контуры  пятен,  соответствующих
гиббереллину А  в пробе и стандарте.

          3

Экстракт из почвы. На хроматографическую пластинку в левый угол на расстоянии 15 — 20 мм от края пластинки наносят упаренный экстракт из почвы (диаметр пятна 10 — 12 мм) и хроматографируют в системе II (хлороформ — метанол — ледяная уксусная кислота 10:1:0,1). После того как фронт растворителя дойдет до края пластинки, ее извлекают из хроматографической камеры, поворачивают на 90° и помещают в ту же систему для хроматографирования. Так же поступают со стандартным раствором, нанесенным на другую пластинку. После хроматографирования пластинки обрабатывают серной кислотой, как указано для воды.

2.6. Обработка результатов анализа

С помощью линейки или миллиметровой бумаги измеряют размеры пятен на хроматограммах проб и стандартных растворов, вычисляют их площади.

Содержание гиббереллина А в мг/л или мг/кг вычисляют по формуле: 3

                                A x S
                                     2

C = ------, S x P 1

где:

A — количество стандартного раствора, мкг;

S — площадь пятна на хроматограмме пробы, кв. мм; 2

S — площадь пятна на хроматограмме стандарта, кв. мм; 1

3. Требования безопасности

Выполняются требования по технике безопасности, необходимые при работе в химических лабораториях.

---