--- title: "\"Методические указания по измерению концентрации покоящихся спор энтомофторовых грибов (микоафидина, энтомофторина) методом световой микроскопии в воздухе рабочей зоны\"" number: "3158-84" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-3158-84" --- ## "Методические указания по измерению концентрации покоящихся спор энтомофторовых грибов (микоафидина, энтомофторина) методом световой микроскопии в воздухе рабочей зоны" # "Методические указания по измерению концентрации покоящихся спор энтомофторовых грибов (микоафидина, энтомофторина) методом световой микроскопии в воздухе рабочей зоны" (утв. Минздравом СССР 27.11.1984 N 3158-84)
Утверждены
Минздравом СССР
27 ноября 1984 г. N 3158-84 **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИИ ПОКОЯЩИХСЯ СПОР** **ЭНТОМОФТОРОВЫХ ГРИБОВ (МИКОАФИДИНА, ЭНТОМОФТОРИНА)**
**МЕТОДОМ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ <*>**
--- <*> Разработали В.И. Мурза, Г.Т. Архипчук (ВНИИГИНТОКС); А.И. Чумакова (ВИЗР); Е.Ф. Соловей (ВНИИ БМЗР). Энтомофторовые грибы, в частности Entomophthora thaxteriana, используются для производства средств защиты растений (микоафидина, энтомофторина и др.). В состав микоафидина входят 7 покоящиеся споры указанного вида гриба (не менее 4 x 10 в 1 г), фрагменты мицелия и остатки питательной среды. Препарат - мелкодисперсный аморфный порошок желтого или бежевого цвета, имеющий слабый специфический (грибной) запах. Гигроскопичен. В воде образует нестойкую суспензию. У энтомофторина состав и свойства подобны описанным. Токсичность микоафидина и энтомофторина низкая. ЛД для белых мышей и крыс при введении в 50 желудок превышает 10 г/кг. ПДК (ориентировочная) в воздухе рабочей 3 зоны 5 x 10 спор/куб. м. Микоафидин и энтомофторин используются в качестве контактных инсектицидов против тлей. Препараты применяют с помощью опрыскивания вегетирующих растений. Краткая характеристика препарата. Энтомофторовые грибы - эффективное средство борьбы с тлями. Грибы этого рода образуют два вида спор: конидии (инфекционные частицы) и покоящиеся споры, позволяющие сохраняться и выживать в неблагоприятных условиях. Эта стадия гриба используется для получения биопрепарата. Покоящиеся споры получают в массовом количестве в биолабораториях. Принцип метода. Метод основан на осаждении на аналитические фильтры типа АФА из перхлорвинила, просветлении фильтра в парах ацетона, подсчете покоящихся спор энтомофторовых грибов на фильтрах методом микроскопии в проходящем свете, расчете содержания спор в воздухе. Метрологическая характеристика метода. Диапазон определения 2 5 количества спор на фильтре 12 x 10 - 6 x 10 . Предел обнаружения 2 5 x 10 спор на фильтре. Среднее значение определения стандартных количеств спор 82%. Стандартное отклонение отдельного определения 26,1%. Относительное стандартное отклонение 0,2. Доверительный интервал среднего при p = 0,05 +/- 29,4%. Избирательность метода. Метод избирателен в присутствии посторонней микрофлоры, минеральных и органических частиц. Определению мешает избыток пыли на фильтре, если ее количество превышает 3 - 5 мг. Реактивы и материалы. Ацетон х.ч. Этанол 96-процентный. Диэтиловый эфир (для наркоза). Вода дистиллированная. Мешки полиэтиленовые хозяйственные. Формалин. Фильтры АФА-ВП-20 или АФА-ХП-20. Вата обезжиренная медицинская. Приборы и аппаратура. Аспирационное устройство. Аллонжи ИРА-2000. Трубки соединительные резиновые. Микроскоп МБИ-3 или аналогичный. Стекла предметные и покровные 24 x 24 мм. Микрометр окулярный винтовой МОВ-1-15. Объект-микрометр ОМП. Кювета металлическая (150 x 100 x 30 мм) со стеклянной крышкой. Баня водяная. Колбы конические на 100 мл. Подготовка к определению. Отбор, транспортировку, хранение и анализ проб проводят при соблюдении правил асептики. Аналитические аэрозольные фильтры и аллонжи стерилизуют в парах формалина (в полиэтиленовых мешках, завернутыми в бумагу) в течение 24 ч при комнатной температуре. Площадь поля зрения микроскопа определяют при помощи микрометра окулярного и объект-микрометра. Предметные и покровные стекла обрабатывают смесью этанола с эфиром (1:1). Отбор проб. Споры энтомофторовых грибов улавливают на аналитические аэрозольные фильтры из перхлорвинила путем фильтрации через них исследуемого воздуха. Через фильтр пропускают 500 - 600 л воздуха со скоростью 5 - 20 л/мин. Пробы можно хранить продолжительное время при температуре 2 - 5 °C. Ход анализа. Фильтр с пробой наносят на предметное стекло (аэрозольными частицами вверх), свисающие части фильтра срезают ножницами. Предметное стекло помещают в металлическую кювету над слоем кипящего ацетона (подогревают на водяной бане, работу проводят в вытяжном шкафу) и накрывают крышкой. Под воздействием паров ацетона фильтр осветляется в течение 5 - 10 с. Предметное стекло извлекают из кюветы, ацетон в течение 10 - 20 с испаряется. Споры на фильтре подсчитывают путем микроскопии в проходящем свете при увеличении 20 x 7 или 20 x 10 в препарате "раздавленная капля". Для этого на просветленный фильтр наносят на 2 участка на расстоянии 30 - 35 мм по одной капле дистиллированной воды и накрывают покровным стеклом. Количество покоящихся спор подсчитывают в 50 полях зрения микроскопа (по 5 x 5 на обоих участках фильтра). Для равномерного обзора всего участка фильтра споры подсчитывают в полях зрения, расположенных не подряд, а с интервалом в 2 - 3 поля. Покоящиеся споры энтомофторовых грибов имеют округлую форму и четко различимую двойную оболочку. В центре споры располагается крупная "жировая капля". Споры имеют размеры от 27 до 50 мкм, а "жировая капля" - 12 - 20 мкм. Обработка результатов анализа. Концентрацию покоящихся спор энтомофторовых грибов в воздухе (X, спор/куб. м) вычисляют по формуле: 1000Sn X = -------, S n V 1 1 20 где: S - площадь аналитического аэрозольного фильтра (той части, через которую проходит воздух при закреплении фильтра в аллонже), кв. мм; S - площадь поля зрения микроскопа, кв. мм; 1 n - число подсчитанных спор энтомофторовых грибов; n - число просмотренных полей зрения микроскопа; 1 V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к 20 стандартным условиям, л; 1000 - коэффициент пересчета литров в метры кубические. Требования безопасности. Соблюдаются общие правила по технике безопасности при работе с легковоспламеняющимися жидкостями и электроприборами. Выполняются меры предосторожности, рекомендуемые для работы с условно-патогенными микроорганизмами, сущность которых сводится к предупреждению загрязнения проб и соблюдению правил личной гигиены. ---