--- title: "\"Временные методические указания по измерению концентраций покоящихся спор энтомофторовых грибов (микоафидина, энтомофторина) методом световой микроскопии в воздухе рабочей зоны\"" number: "3158-84" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-3158-84-2" --- ## "Временные методические указания по измерению концентраций покоящихся спор энтомофторовых грибов (микоафидина, энтомофторина) методом световой микроскопии в воздухе рабочей зоны" # "Временные методические указания по измерению концентраций покоящихся спор энтомофторовых грибов (микоафидина, энтомофторина) методом световой микроскопии в воздухе рабочей зоны" (утв. Минздравом СССР 27.11.1984 N 3158-84)
Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
**А.И.ЗАИЧЕНКО**
27 ноября 1984 г. N 3158-84
**ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ПОКОЯЩИХСЯ СПОР** **ЭНТОМОФТОРОВЫХ ГРИБОВ (МИКОАФИДИНА, ЭНТОМОФТОРИНА)** **МЕТОДОМ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ** Энтомофторовые грибы, в частности Entomophthora thaxteriana, используются для производства средств защиты растений (микоафидина, энтомофторина и др.). В состав микоафидина входят покоящиеся споры 7 указанного вида гриба (не менее 4 x 10 в 1 г), фрагменты мицелия и остатки питательной среды. Препарат представляет собой мелкодисперсный аморфный порошок желтого или бежевого цвета, имеющий слабый специфический (грибной) запах. Гигроскопичен. В воде образует нестойкую суспензию. У энтомофторина состав и свойства подобны описанным. Токсичность микоафидина и энтомофторина низкая: ЛД для белых мышей и 50 крыс при введении в желудок превышает 10 г/кг. ПДК (ориентировочная) в 3 воздухе рабочей зоны - 5 x 10 спор/куб. м. Микоафидин и энтомофторин используются в качестве конкретных инсектицидов против тлей. Препараты применяются методом опрыскивания вегетирующих растений. ## 1. Методика определения покоящихся спор энтомофторовых грибов в воздухе методом световой микроскопии ### 1.1. Основные положения 1. Метод основан на осаждении аэрозоля на аналитические фильтры типа АФА из перхлорвинила, просветлении фильтров в парах ацетона, подсчете покоящихся спор энтомофторовых грибов на фильтрах методом микроскопии в проходящем свете, расчете содержания спор в воздухе. 2 2. Диапазон определяемых количеств спор на фильтре - 12 x 10 - 6 x 5 10 . 2 3. Предел обнаружения спор на фильтре - 5 x 10 . 4. Среднее значение определения стандартных количеств спор - 82%. 5. Стандартное отклонение отдельного определения - 26,1%. 6. Относительное стандартное отклонение - 0,2. 7. Доверительный интервал среднего при P = 0,05 и n = 5 - +/- 29,4%. 8. Метод избирателен в присутствии посторонней микрофлоры, минеральных и органических частиц. Мешает определению избыток пыли на фильтре - если ее количество превышает 3 - 5 мг. ### 1.2. Реактивы и материалы Ацетон хч, ГОСТ 2603-79. Этанол 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77. Эфир диэтиловый (для наркоза), Фармакопея СССР. Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72. Мешки полиэтиленовые хозяйственные, ОСТ 6-19-37-033-82. Формалин, Фармакопея СССР. Фильтры АФА-ВП-20 или АФА-ХП-20. Вата обезжиренная медицинская, ГОСТ 5566-75. ### 1.3. Приборы, аппаратура и посуда Аспирационное устройство, ТУ 64-1-862-77. Аллонжи ИРА-2000, ТУ 690-00-00. Трубки соединительные резиновые. Микроскоп МБИ-3 и т.п. Стекла предметные. Стекла покровные, 24 x 24 мм, [ГОСТ 6672-75](https://bukva.ai/docs/gost-6672-75-gosstandart-sssr). x Микрометр окулярный винтовой МОВ-1-15 , ГОСТ 7865-56. Объект-микрометр ОМП, ГОСТ 7513-75. Кювета металлическая (150 x 100 x 30 мм) со стеклянной крышкой. Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76. Колбы конические на 100 мл, ГОСТ 10394-72. ### 1.4. Подготовка к определению Отбор, транспортировку, хранение и анализ проб проводят при соблюдении правил асептики. Аналитические аэрозольные фильтры и аллонжи стерилизуют в парах формальдегида (в полиэтиленовых мешках, завернутыми в бумагу) в течение 24 часов при комнатной температуре. Площадь поля зрения микроскопа определяют при помощи микрометра окулярного и объект-микрометра. Предметные и покровные стекла обрабатывают смесью этанола с эфиром (1:1). ### 1.5. Отбор проб Улавливание спор энтомофторовых грибов осуществляют на аналитические аэрозольные фильтры из перхлорвинила путем фильтрации через них исследуемого воздуха. Через фильтр пропускают 50 - 600 л воздуха со скоростью 5 - 20 л/мин. Пробы можно хранить продолжительное время при температуре 2 - 5 °C. ### 1.6. Проведение определения Фильтр с пробой помещают на предметное стекло (аэрозольными частицами вверх), свисающие части фильтра отрезают ножницами. Предметное стекло с фильтром помещают в металлическую кювету над слоем кипящего ацетона (подогревают на водяной бане, работу проводят в вытяжном шкафу) и накрывают стеклянной крышкой. Под воздействием паров ацетона происходит просветление фильтра в течение 5 - 15 с. Предметное стекло извлекают из кюветы, ацетон в течение 10 - 20 с испаряется. Подсчет спор на фильтре проводят путем микроскопии в проходящем свете при увеличении 20 x 7 или 20 x 10 в препарате "раздавленная капля". Для этого на просветленный фильтр наносят на два участка на расстоянии 30 - 35 мм по одной капле дистиллированной воды и накрывают покровными стеклами. Подсчитывают количество покоящихся спор в 50 полях зрения микроскопа (по 5 x 5 на обоих участках фильтра). Для равномерного обзора всего участка фильтра споры подсчитывают в полях зрения, расположенных не подряд, а с интервалами в 2 - 3 поля. Покоящиеся споры энтомофторовых грибов имеют округлую форму и четко различимую двойную оболочку. В центре споры располагается крупная "жировая капля". Спора имеет размеры от 27 до 50 мкм (в среднем 33 мкм), а "жировая капля" - 12 - 20 мкм. ### 1.7. Обработка результатов Концентрацию покоящихся спор энтомофторовых грибов в воздухе (X, спор/куб. м) вычисляют по формуле: S x N x 1000 X = -------------, S x N x V 1 1 20 где: S - площадь аналитического аэрозольного фильтра (той части, через которую проходит воздух при закреплении фильтра в аллонже), кв. мм; S - площадь поля зрения микроскопа, кв. мм; 1 N - количество подсчитанных спор энтомофторовых грибов, ед.; N - количество просмотренных полей зрения микроскопа, ед.; 1 V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным 20 условиям, л; 1000 - коэффициент пересчета литров в метры кубические. ## 2. Требования безопасности Соблюдаются общие правила по технике безопасности при работе с легковоспламеняющимися жидкостями и электроприборами. Выполняются меры предосторожности, обычно рекомендуемые для работы с микроорганизмами IV группы (условно патогенные), сущность которых сводится к предупреждению загрязнения проб и соблюдению правил личной гигиены. ---